楊毅青，王莉佳，馬增輝，王 祺

(山西省食品藥品檢驗所，山西太原 030001)

摘 要：目的：建立超高效液相色譜-串聯質譜法測定牛奶和雞蛋不同基質中地塞米鬆殘留量的分析方法。方法：樣品經乙酸-乙酸鈉和甲醇溶液提取，固相萃取柱淨化後，以甲醇-0.1%甲酸溶液為流動相進行梯度洗脫，采用電噴霧負離子模式電離，多反應監測(MRM)模式進行采集，內標法定量。結果：地塞米鬆在0～44.191 4 ng/mL範圍內線性關係良好，相關係數為0.999 9，平均回收率為70.53%～118.25%，為3.5%～7.0%。結論：該方法快捷、簡便、回收率高，重現性好，可用於不同動物源基質中地塞米鬆的殘留量分析。

關鍵詞：地塞米鬆;超高效液相色譜-串聯質譜法;動物源性食品

Determination of Dexamethasone Residues in Animal Matrix by High-Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

YANG Yiqing, WANG Lijia, MA Zenghui, WANG Qi

(Shanxi Institute for Food and Drug Control, Taiyuan 030001, China)

Abstract: Objective: To establish a method for the determination of dexamethasone residues in milk and eggs by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS). Methods: The samples were extracted by acetic acid-sodium acetate and methanol solution, purified by spe column, and eluted by gradient elution with methanol-0.1% formic acid solution as mobile phase. The samples were ionized by electrospray ionization in negative ion mode, and collected by multiple reaction monitoring (MRM) mode, and quantified by internal standard method. Results: Dexamethasone had a good linear relationship in the range 0～44.191 4 ng/mL , the correlation coefficient () was 0.999 9. The recoveries were 70.53%～118.25%, and with the relative standard deviations () of 3.5%～7.0%. Conclusion: This method is rapid, simple, good recovery and good reproducibility, which is suitable for rapid determination of dexamethasone residues in different substrates of animal origin.

Keywords: dexamethasone; ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry; animal derived food

地塞米鬆又名氟美鬆、氟甲強地鬆龍、德沙美鬆，是糖皮質類激素。其衍生物有氫化可的鬆、潑尼鬆等，其藥理作用主要是抗炎、抗毒、抗過敏、抗風濕，臨床使用較廣泛[1-2]。而在獸醫治療中被廣泛應用於治療母畜代謝病，是畜禽飼養中普遍的藥物之一[3]。激素的頻繁使用會在畜禽體內殘留，不僅給動物源世界杯賽程預測帶來隱患，而且對人們的健康及環境危害嚴重[4]。因此，世界各國嚴格禁止地塞米鬆作為生長激素使用，且限製該藥物用於動物源性食品中，並提出了嚴格的限量要求[5]。

目前，國內外有關地塞米鬆殘留的檢測方法較多，主要采用酶聯免疫法、液相色譜法、液相色譜-串聯質譜法、超液相色譜-串聯質譜法、氣質聯用法等。本研究參照國家標準GB/T 21981—2008[6]，建立了一種快捷、簡便、回收率好的超高效液相色譜-串聯質譜法快速檢測不同動物源基質中地塞米鬆殘留量的方法，為快速高效檢測動物源性食品中地塞米鬆的殘留提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

1.1.1 試驗樣品

新鮮牛奶、雞蛋，均購置於某超市。

1.1.2 主要試劑

地塞米鬆標準品(中國食品藥品檢定研究院，含量99.8%);氫化可的鬆-d3(阿爾塔科技有限公司，含量98.0%);甲醇、二氯甲烷、甲酸(美國Fisher公司，色譜純);乙酸、乙酸鈉(NaAC·4H2O)(國藥集團，分析純);β-葡萄糖醛酸酶4.5 U/mL(德國默克公司);實驗室一級超純水。ENVI-Carb固相萃取柱(500 mg/6 mL)和氨基固相萃取柱(500 mg/6 mL)(艾傑爾科技公司)。

1.1.3 儀器與設備

LCMS-8050液質聯用儀(日本島津公司);UB-7pH計(丹佛儀器);V2S025渦旋混合器(德國ZKA);HC-3018離心機(安徽中科中佳科學儀器);氮吹濃縮儀(天津安特塞恩斯)。

1.2 試驗方法

1.2.1 液相條件

色譜柱：YMC C18(100 mm×2.1 mm，3 µm);流動相：0.1%甲酸水溶液+甲醇溶液，梯度洗脫，見表1;流速：0.2 mL/min;柱溫：40 ℃;進樣量：10 µL。

1.2.2 質譜條件

離子化模式：ESI-;質譜掃描模式：多反應檢測(MRM);電噴霧電壓：-3 000 V;離子源溫度：300 ℃;加熱氣流量：10 L/min;幹燥氣流量：10 L/min;輔助氣壓力：60 psi;其他質譜參數見表2。

1.2.3 提取與淨化

稱取均質試樣5 g，置於50 mL離心管中，準確加入內標工作液100 µL和10 mL乙酸-乙酸鈉緩衝溶液，渦旋混勻，再加入β-葡萄糖醛酸酶100 µL，於(37±1)℃振蕩酶解12 h。取出冷卻至室溫，加入25 mL甲醇超聲提取30 min，0～4 ℃下，10 000 r/min離心10 min。將上清液轉入潔淨燒杯，加水100 mL，混勻後待淨化。依次用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液，6 mL甲醇，6 mL水活化ENVI-Carb固相萃取柱。提取液以2～3 mL/min的速度上樣於活化過的ENVI-Carb固相萃取柱。將小柱減壓抽幹。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液活化氨基固相萃取住。將活化好的氨基柱串聯在ENVI-Carb固相萃取柱下方。用6 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗脫並收集洗脫液，取下ENVI-Carb柱，再用2 mL二氯甲烷-甲醇溶液洗氨基柱，洗脫液在微弱的氮氣流下吹幹，用1 mL甲醇-水溶液溶解殘渣，供儀器測定。用空白樣品，不加入內標，按上述步驟製備空白樣品提取液。

1.2.4 標準溶液配製

(1)標準儲備溶液。地塞米鬆標準品稱量前於105 ℃幹燥箱幹燥至恒重，經折算相當於11.0479 mg地塞米鬆的標準品，用甲醇溶解並定容至100 mL棕色容量瓶中，得濃度為110.479 0 µg/mL的標準儲備液。此儲備液可在-18 ℃以下避光存放12個月。

(2)內標工作液。取適量氫化可的鬆-d3內標溶液，配製出濃度為100 ng/mL的內標工作液。

(3)標準工作中間液。取適量地塞米鬆標準儲備溶液配製成濃度為1.1047 9 μg/mL的標準工作中間液。

(4)標準工作液。取適量標準儲備溶液配製得濃度為110.479 0 ng/mL的標準工作液。

1.2.5 係列標準工作溶液配製

分別取標準工作中間液0 mL、0.015 mL、0.020 mL、0.050 mL、0.100 mL、0.200 mL和0.400 mL，用甲醇定容至10 mL，配製成係列標準工作溶液。標準工作液中含內標濃度為10 ng/mL。

2 結果與分析

2.1 線性關係及定量限

以地塞米鬆的定量離子峰麵積與內標峰麵積的比值為縱坐標(y)，相應的質量濃度為橫坐標(x)，繪製標準曲線，得出該樣品在0～44.191 4 ng/mL濃度範圍內的線性方程為=0.204 1-0.027 6，相關係數=0.999 9，線性良好。取空白樣品按照方法定量限(濃度為0.4 µg/kg)水平進行加標試驗，製備好的試樣溶液上機測定，信噪比大於10，滿足檢測要求。

2.2 回收率和重複性

取空白樣品，添加不同濃度的地塞米鬆標準溶液進行加標回收試驗，其餘操作同上述供試品溶液製備，每個濃度平行測定6次，計算加標回收率和重複性，結果見表3。(牛奶和雞蛋的方法定量限為0.4 µg/kg;最高殘留限量分別為0.3 µg/kg和不得檢出)。

3 結論

本研究通過對不同基質中地塞米鬆殘留量進行質譜分析，建立了超高效液相色譜-質譜聯用檢測方法，能同時快速檢測出牛奶和雞蛋不同基質中添加的地塞米鬆殘留量，並從線性關係、重複性、回收率、精密度等方麵對方法進行了考察，結果表明，該方法測定動物源食品中的地塞米鬆殘留量，方法穩定，數據可靠，為研究動物源食品地塞米鬆殘留量的檢測提供了一定的參考依據。

參考文獻

[1]鄭宇瀟.地塞米鬆在臨床腫瘤治療中的應用進展[J].醫學綜述,2019,25(17):3491-3496.

[2]GUILLAUME B,KARINE B,VIRGINIE M,et al.Preparation and physicochemical stability of liquid oral dosage forms free of potentially harmful excipient designed for pediatric patients[J].Pharmaceutics,2019,11(4):190.

[3]王永娟,朱善元,劉博,等.地塞米鬆促進豬繁殖與呼吸綜合征病毒致病性[J].江蘇農業科學,2016,44(7):293-295.

[4]周軍,李紅斌,李睿鴻.濫用抗生素對養豬業的危害及應對措施[J].當代畜禽養殖業,2011(6):44-47.

[5]林維宣.各國食品中農藥獸藥殘留限量規定[M].大連:大連海事大學出版社,2003.

[6]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局,國家質量監督檢驗檢疫總局.動物源食品中激素多殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法:GB/T 21981—2008[S].北京:中國標準出版社,2008.