賈倩倩1，李宏鐸2，白福軍3，於宏雙1，張 靜4，周 琦1，賈 晨1*

(1.北京美正生物科技有限公司，北京，102200;2.西安市食品藥品檢驗所，
陝西西安 710054;3.中儲糧承德糧油質監中心有限公司，
河北承德 067000;4.雨潤集團馬鞍山百瑞食品有限公司，安徽馬鞍山 243100)

摘 要：本文以黴菌酵母測試片為基礎，探究添加不同濃度的抑製劑對黴菌和酵母菌菌落的影響。實驗中抑製劑的添加量為1 μL/L、2 μL/L、3 μL/L。實驗結果表明，當濃度在2 μL/L時，抑製劑能夠有效抑製黴菌菌絲的蔓延，提高黴菌的計數範圍，且不影響黴菌和酵母菌菌落的生長率。同時使用黴菌酵母菌測試片對6種食品樣品加標檢測，結果表明添加2 μL/L抑製劑的測試片的黴菌菌落邊緣清晰，更易計數，因此，優化後的黴酵測試片能夠滿足樣品中的黴菌酵母計數的快速檢測需求。

關鍵詞：黴菌;酵母;測試片;抑製劑;食品

Optimization of the Count Plate for Rapid Detection of Mold and Yeast

JIA Qianqian1, LI Hongduo2, BAI Fujun3, YU Hongshuang1, ZHANG Jing4, ZHOU Qi1, JIA Chen1*

(1.Beijing Meizheng Biotechnology Co., Ltd.,Beijing, 102200,China; 2.Xi'an Institute for Food and Drug Control, Xi'an, 710054 China;3. Chengde Grain and Oil Quality Supervision Center Co., Ltd., Hebei, 067000 China;4.Yurun Group Ma'anshan Yuber Food Co., Ltd., Anhui, 243100 China)

Abstract: The effects of different concentrations of inhibitor on mold and yeast colonies were studied on the Mold & Yeast count plate. The amount of inhibitor was 1μL/L, 2μL/L, 3μL/L. The results showed when the concentration is 2μL/L, the inhibitor can effectively inhibit the spread of mold hyphae, increase the count range of mold, does not affect the growth rate. At the same time, 6 food samples inoculated strains were tested on the count plate. The results showed the mold colonies of the count plate with 2 μL/L inhibitor was clear and easier to count. Therefore, the optimized Mold & Yeast count plate can meet the need for rapid detection in the samples.

Keywords: mold; yeast; count plate; inhibitor; food

黴菌和酵母使用廣泛，與人們日常生活聯係十分密切。黴菌不僅應用於傳統的釀酒製醬和發酵食品中，在農業、紡織、食品、醫藥和皮革製造等領域都有極為重要的作用[1-3]。黴菌和酵母菌的汙染會導致食品營養價值下降，甚至腐敗變質。若食用被黴菌、酵母菌汙染的食品，會造成腸胃不適，引發疾病[4]。因此，人們愈來愈重視食品中黴菌和酵母菌汙染對人體造成的危害[5-6]。

黴菌和酵母菌的數量表明食品被汙染的程度，是評價食品衛生質量必不可少的指標[7]。在我國飲料、堅果製品、米麵製品、糕點類等食品中，把黴菌和酵母菌作為食品汙染的指示菌進行監測，被列入國標GB 4789係列世界杯賽程預測微生物常規檢測項目之一[8]。目前，國內外對黴菌的檢查方法主要有平板計數法、顯色培養基計數法、WKJ-Ⅱ型微生物快速檢測係統、流式細胞儀計數法和測試片法[9-10]。其中，測試片法是一項微生物快速的檢測方法，該方法操作簡便，檢測時間短，極大地提高了檢測效率。而黴菌和酵母菌落在上呈不同形態，容易判斷觀察和直接計數。戴昌芳[11]、餘淑冰[12]、王明[13]和趙紅陽[14]等將測試片與國標方法檢測效果進行了評價，研究結果表明兩種方法的檢出結果無顯著性差異。

測試片法雖然成本低、檢測性能好，但也存在黴菌菌絲的蔓延和顯色效果的不穩定影響計數準確性等問題。因此，本研究同過添加不同濃度的抑製劑，探究其對黴菌和酵母菌落形態和顏色的影響，以此優化黴酵測試片檢測效果。

1 材料和方法

1.1 材料與試劑

黴菌酵母測試片：北京美正生物科技有限公司;抑製劑與其他試劑均為國藥分析純試劑。實驗中選取不同品牌和口味的糕點、麵包、堅果樣品共5種，均購自超市。標準菌株：1株酵母菌(10231)和11株黴菌(M-1至M-11)。

1.2 儀器與設備

SHP-80型生化培養箱，上海森信實驗儀器有限公司;YXQ-70A立式壓力蒸汽滅菌器，上海博迅實業有限公司醫療設廠;SW-CJ-2FD雙人單麵垂直淨化台，蘇州智淨淨化設備有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 菌液製備

從甘油管中活化酵母至馬鈴薯葡萄糖液體培養基，28 ℃培養2 d，平板計數備用。

1.3.2 測試片培養基單因素實驗

將3株黴菌與酵母分別用無菌水進行梯度稀釋，配置成一定濃度的菌懸液，振蕩器混勻，製成最終濃度為10～100 CFU/mL的稀釋液。分別添加黴菌抑製劑的濃度為1 μL/L、2 μL/L、3 μL/L，每個稀釋梯度設置兩個平行，分別吸取菌液1.0 mL接種於黴酵測試片上，培養測定酵母菌和黴菌的菌落總數，考察抑製劑濃度對黴菌和酵母菌落總數的影響。

1.3.3 測試片培養基驗證實驗

(1)最佳計數範圍的測定。選用12株菌株，用無菌水稀釋成1×10-7、2×10-7、4×10-7和8×10-7 CFU/mL的4個濃度梯度，進行試驗，分別吸取各個濃度梯度的菌懸液1.0 mL接種測試片，每個梯度設置2個平行，培養計數。

(2)食品樣品的檢測。從市場上采購不同品牌和口味的糕點、麵包、堅果和蜂蜜樣品共5份。稱取25 g/mL樣品放入盛有225 mL無菌水的無菌均質袋內，均質器混勻，製成1∶10的樣品勻液。選取一株黴菌，做加標實驗。將黴菌進行梯度稀釋，配置成一定濃度的菌懸液，向樣品勻液中添加菌懸液，混勻，製成最終濃度為10～100 CFU/mL的加標樣品，吸取的樣品菌懸液1.0 mL接種測試片，每個梯度設置2個平行，培養計數。

1.3.4 黴菌和酵母計數

培養後，酵母菌落較小，邊界清晰，顏色均一，菌落顯示紫紅色。黴菌菌落較大，邊緣模糊，呈淺粉色到紫紅色，顏色不均一。

1.3.5 數據分析

本實驗用SPSS、excel對實驗進行設計及數據分析處理。

2 結果與分析

2.1 抑製劑對酵母與黴菌的生長率與形態的影響

由表1可知，隨著抑製劑濃度的升高，黴菌的菌落的生長率沒有顯著性差異，但黴菌菌落大小具有顯著差異，具體見圖1。與對照相比，添加抑製劑後黴菌菌落變小;當抑製劑的濃度≥3 μL/L時，黴菌菌落的大小沒有顯著變化。同時，添加抑製劑對酵母的生長率和形態沒有顯著影響。因此，測試片添加抑製劑的濃度在2 μL/L時效果最佳。

2.2 測試片培養基準確度測試結果

為了測定優化後測試片的最佳計數範圍，使用12株菌株，濃度依次遞增，設置了4個梯度。由表2可知，優化後的測試片，大部分黴菌的計數範圍在0～80 CFU，與對照黴菌計數範圍相比(計數範圍<30 CFU)，提高了50 CFU。當菌落數大於86 CFU時，測試片結果顯示均不可計數。

2.3 食品樣品檢測結果

表3為檢測6種食品樣品的測試結果。其中，所有樣品原樣中均未檢出黴菌。加標樣品檢測的結果表明，有5種食品樣品中檢出黴菌並計數，1個核桃樣品使測試片整體變色，不能計數。優化後測試片黴菌的計數範圍明顯大於對照組，不同食品樣品的基質會影響測試片黴酵的計數結果，但影響較小。因此，優化後的測試片可以用於部分食品中黴菌菌落計數。

3 結論

本實驗以黴菌酵母測試片為基礎，通過添加抑製劑探究對黴菌酵母生長率和形態的影響。實驗結果表明，抑製劑能夠抑製黴菌菌絲蔓延，減小黴菌菌落，從而提高了黴酵測試片的計數範圍。在檢測麵包、蜜餞和堅果等食品樣品時，優化後的測試片黴菌計數範圍明顯大於對照組。因此，優化後的黴酵測試片能夠滿足食品樣品中的黴菌酵母計數的快速檢測需求。

參考文獻

[1]沈源.糧食中黴菌分離與鑒定方法的初步研究[J].彭城大學學報,1997(3):62-65.

[2]周玉庭,任佳麗,張紫鶯.糧食中黴菌汙染檢測方法現狀及發展趨勢[J].世界杯賽程預測質量檢測學報,2016,7(1):252-258.

[3]王定昌.酵母菌與食品[J].糧油食品科技,2012(4):64-65.

[4]陳忠傑,李存法,王璐.引起罐藏食品腐敗變質的微生物探討[J].鄭州牧業工程高等專科學校學報,2012,32(1):19-21.

[5]BOUAKLINE A,LACROIX C,ROUX N,et al.Fungal Contamination of Food in Hematology Units[J].Journal of Clinical Microbiology,2000,38(11):4272.

[6]柴竹林,王岩,王慶峰,等.食品中常見黴菌毒素的汙染及其檢測技術[J].世界杯賽程預測 導刊,2015(27):109.

[7]雷玲鈺.食品中黴菌、酵母菌檢測分析[J].生物技術世界,2013(7):50-51.

[8]梁美丹,肖劍,易雲婷,等.食品微生物能力驗證黴菌酵母菌計數:檢驗方法比較[J].輕工科技,2015(7):5-6

[9]劉桐,劉爽,司南,等.黴菌和酵母菌檢測技術的研究進展[J].農產品加工,2018(6):73-75.

[10]MANAFI M.Fluorogenic and chromogenic enzyme substrates in culture media and identification tests[J].International Journal of Food Microbiology,1996,31(1):45-58.

[11]戴昌芳,鄧峰,李玉偉,等.黴菌快速檢測紙片法的研究[J].中國公共衛生,1998,14(11):674-675.

[12]餘淑冰,梁景濤,周強忠.食品中黴菌和酵母菌紙片法與培養法檢驗結果的比較[J].中國衛生檢驗雜誌,1998(3):138-140.

[13]王偉,李琴,趙紅陽,等.PetrifilmTM快速黴菌酵母測試片法與GB 4789.15—2016在酸奶檢測中的比較[J].中國食品衛生雜誌,2018(3):253-256.

[14]趙紅陽,王鳴雨,宋嬌嬌,等.快速黴菌酵母測試片法與GB 4789.15—2016在3種類型食品中黴菌計數比較[J].中國食品衛生雜誌,2020,32(4):397-400.

通信作者：賈晨(1988—)，女，山東菏澤人，碩士，工程師。研究方向：食品微生物快速檢測。