魏姣姣，黃喜海

(浙江華才檢測技術有限公司，浙江諸暨 311800)

摘 要：由於食品表麵非目標源的幹擾，食品微生物汙染檢測的結果存在一定偏差，為此，本文提出一種基於ATP生物熒光增幅法的食品微生物汙染檢測方法，利用微生物的繁殖特性，將營養物質進行熒光標記，通過統計顯微環境下熒光ATP的增幅，判定檢測食品中是否存在微生物，避免直接統計受到的幹擾，以此實現對食品微生物汙染的有效檢測。

關鍵詞：微生物汙染;微生物檢測;ATP生物熒光增幅法;熒光標記

世界杯賽程預測問題的來源是多方麵的，不僅包括原料質量、加工技術、生產環境，更主要的是對其的保管與儲存[1]。對於部分特殊的食品，微生物汙染是主要影響產品質量的因素，而出現微生物汙染的環節也是多樣性的，從原材料的產出到產品銷售，中間的任意環節都有可能出現微生物汙染[2]。在食品被汙染的前期，並不會在外觀上表現出明顯的變化，但食品本身很可能已經變質，如果不能及時檢出，在市麵上被銷售，極有可能產生嚴重的世界杯賽程預測問題[3]。傳統的微生物檢測主要是對檢測物品進行微生物培養，不僅對檢測操作的要求較高，檢測周期也相對較長，這與現階段快節奏的生活方式並不契合，且其檢測結果也具有一定的失準性，效果並不理想[4]。ATP生物熒光增幅法作為近些年來逐漸被關注的微生物檢測方法，不但具有較高的檢測效率，同時操作更加便捷，在檢測領域得到了廣泛應用。

基於此，本文提出基於ATP生物熒光增幅法的食品微生物汙染檢測方法。使用ATP熒光對營養物質進行標記，通過統計培養過後ATP熒光的增幅判斷食品中是否存在微生物汙染，通過實驗驗證了該方法的有效性，以期為食品的微生物汙染檢測提供有價值的參考。

1 食品微生物汙染檢測

1.1 熒光染色標記

在傳統的食品微生物檢測中，主要是通過對樣本進行細菌培養的方式判定其是否被汙染，通過培養結果分析微生物存在的可能性，結果的可靠性相對較低[5]。本文將ATP生物熒光增幅法應用於微生物汙染檢測中。

對營養物質進行熒光標記，一般情況下，當食品中出現微生物汙染時，隨著微生物的衍生，其需要不斷吸取食品中的營養物質作為其生存的基礎，此時的食品可以理解為是微生物的營養基，本文利用這一特點，在使用中加入包含熒光劑成分的高濃度營養物質。當食品中有微生物時，可以通過顯微觀察發現移動的熒光，由於營養液自身也是非靜態的，直接統計的結果存在一定偏差，利用動態熒光的增加程度，可以實現對微生物數量的準確判斷。需要注意的是，在對營養物質進行熒光染色時，要避免熒光在食品表麵的印染，當其對食品本身產生染色作用時，會影響最終的統計結果，因此，本文選用ATP作為染色材料。

1.2 ATP熒光增幅分析

ATP生物熒光增幅檢測法本質上是利用了微生物的生存需求和繁衍的基本原理，在完成對營養物質的標記後，在(37.5±0.5)℃的溫度環境中，培養2 h，再使用衝洗液對其表麵進行衝洗，此時需要注意衝洗的力度不應過大，否則會造成含有ATP熒光的微生物被全部衝走，無法進行後續的檢測工作。衝洗完成的待檢食品需要在相對濕度為(60±5)%的環境中靜置10 min直至其表麵處於幹燥狀態。此時通過顯微鏡觀察食品表麵是否存在ATP熒光成分，如果不存在，則表明食品不存在微生物汙染，如果存在，記錄觀察到的微生物數量。完成後再重新將其置於(37.5±0.5)℃的溫度環境培養2 h。完成後重複上麵的操作，衝洗、晾幹，再次在顯微環境下觀察ATP熒光的數量，統計其實際增量。如果ATP熒光的數量未出現變化，同樣表明檢測食品沒有出現微生物汙染的情況，如果出現明顯的增幅，則表明存在微生物。結合其增幅與時間的關係，推斷微生物的總量。本文將ATP熒光增幅作為最終檢測結果的判定依據，避免了鹽、其他化學物質和遊離態在食品中的幹擾，使檢測結果具有更高的準確性。

2 應用測試

對本文提出的微生物檢測方法進行實際應用測試。並將文獻[2]和文獻[3]提出的檢測方法作為對照組，通過對比3種方法的檢測結果，分析本文方法的效果。

2.1 樣本設置

本文將複蘇的HFSCs細胞在DM EM/F12培養基中懸浮培養，共分為3組，另外取3個DM EM/F12培養基，進行枯草芽孢杆菌的培養，白假絲酵母菌的培養，同樣將其置於分別接種到DM EM/F12培養基中，並將其置於溫度為(37.5±0.5)℃，相對濕度為(60±5)%的環境中，時間為2 h。最後取3個DM EM /F12培養基，直接置於溫度為(37.5±0.5)℃，相對濕度為(60±5)%的環境中培養2 h，將其作為陰性對照組。

2.2 實驗過程

選擇典型支原體汙染試驗樣本作為陽性對照。含

HFSCs玻片在不含抗生素的培養基中培養2 d後，吸取培養液，用PBS衝洗，用冷空氣幹燥，用固定液固定5 min。將製備的ATP Hoechst3342工作染料添加到固定細胞中，並在室溫下染色30 min，染色的蓋玻片用PBS浸泡3次，每次3 min，用冷空氣幹燥，含1%甘油的PBS覆蓋在細胞表麵。密封處理後，幹燥，觀察細胞核周圍是否產生ATP熒光。

2.3 檢測結果

在上述基礎上，對比3種方法對不同培養基的檢測結果，具體如表1所示。廖燮恒等[2]和白淼等[3]的方法均未實現對HFSCs的有效檢出，同時，廖燮恒等[2]方法對白假絲酵母菌的檢出不明顯，白淼等[3]的方法對枯草芽孢杆菌的檢出方法不明顯。相比之下，本文方法實現了對4組樣品的準確檢出，檢測結果更加可靠。

3 結論

隨著食品加工行業的蓬勃發展，對食品質量控製的重要性也越來越受到重視，其中微生物汙染檢測作為一項難度較高，流程較為複雜的檢測環節，一直是產品質量控製的重要方式。而微生物汙染前期，食物外觀上的表現並不明顯，對其檢測也更加困難。本文提出的基於ATP生物熒光增幅法的食品微生物汙染檢測方法，並實現了對微生物的準確檢出。通過本文的研究，以期為世界杯賽程預測 檢測工作提供有價值的幫助。

參考文獻

[1]雷玄.市場監管總局發布“22批次食品不合格情況”通告涉微生物汙染等六類問題[J].中國質量萬裏行,2021(7):35-37.

[2]廖燮恒,趙海鋒.微生物數碼顯微培養計數係統在固體粉末樣品檢測中的應用[J].現代食品科技,2021,37(5):279-286.

[3]白淼,張燦,張明露,等.動態顯色法鱟試驗用於果汁細菌內毒素活性檢測及幹擾分析[J].世界杯賽程預測 質量檢測學報,2019,10(10):3192-3196.

[4]翟磊,葛媛媛,洪海軍,等.ATP生物熒光增幅法在微生物檢測中的可行性研究——應用於化妝品領域[J].食品與發酵工業,2020,46(21):201-206.

[5]李婷,沈穎,蔡俊鬆,等.ATP生物熒光增幅法在化妝品微生物檢測中的適用性研究[J].日用化學工業,2021,51(6):513-521.