超高效液相-串聯質譜法篩查食品中的蘇丹紅

2021-08-24 14:51:56來源：世界杯賽程預測導刊

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陳英（周至縣食品藥品檢驗檢測中心，陝西西安 710400）

摘要：運用超高效液相-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）同時測定辣椒麵、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。通過優化萃取試劑、樣品基質效應的消除、色譜及質譜條件等參數，檢測方法的靈敏度和適用性。在電噴霧離子源正離子模式下，多反應監測（MRM）方式檢測，外標法定量。蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ線性關係良好，相關係數（2）均大於0.999，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ在3個添加水平下，回收率範圍為85.1%～104.9%，標準偏差（）均小於6.2%，檢出限和定量限為1.0～6.0µg/kg。本方法處理過程簡單、分析時間短、準確度高，適用於辣椒麵、火鍋料、辣條、鴨蛋和鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測，可用於食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。
關鍵詞：超高效液相-串聯質譜法；蘇丹紅；非法添加
蘇丹紅共有4個組分，為蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，是一種紅色顆粒或粉末狀的紅色染料常用於工業上色如鞋、地板等的增光，因為有致癌作用危害人體健康，我國和歐盟都禁止其用於食品生產[1]。市麵上有一些不法分子為了產品成色漂亮好出售，依然違法添加工業染料。
目前，蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ檢測方法主要有薄層色譜法[2]、紫外可見分光光度法[3]、近紅外顯微成像光譜法[4]、液相色譜法[5-6]、液相色譜-質譜聯用法[7-8]和化學發光分析法[9]，這些方法前處理複雜、試劑用量大、檢測周期長、準確度不高，不適應實際工作中遇到的多種複雜基質中蘇丹紅的篩查測定。本試驗通過對色譜條件和質譜參數的研究、優化，建立了高效液相色譜-串聯質譜同時分析蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的方法。本方法前處理簡單，7 min即可同時測出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的含量，方法快速簡單，結果準確，可以用於食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的篩查。
1 材料與方法
1.1 儀器與試藥
液相色譜-串聯質譜聯用儀：Qtrap 5500三重四極杆串聯質譜儀（美國AB SCIEX公司）；配有電噴霧離子源（ESI）；LC20A超高效液相色譜儀（日本Shimadzu公司）；MS1003S電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；Milli-Q超純水儀（美國Millipore公司）；MFV-24智能氮吹儀（廣州德泰儀器科技有限公司）。
1.2 藥品及試劑
實驗用蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準品，純度均大於95%，購自Dr.Ehrenstorfer GmbH；甲醇、乙腈（色譜純，美國Mreda公司）；甲酸（色譜純，美國Fisher Scientific公司）；水為超純水。
樣品辣椒麵、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血均為市售。
1.3 標準溶液的配製
分別各精密量取適量標準溶液，加乙腈製成每1 mL中各約含1.0 mg的溶液，為標準儲備液密封，於4 ℃保存。分別量取上述蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準儲備液適量，用甲醇稀釋成約0.5 mg/mL的混合對照品儲備液。精密量取混合對照品儲備液適量，加空白樣品基質提取液配製係列混合基質標準溶液。
1.4 樣品處理方法
提取。取待測試樣適量混勻，研細，稱取粉末5.0 g（準確至0.001 g），置50 mLpvc離心管中，加15 mL乙腈超聲提取（功率300 W，頻率50 kHz）30 min，以6000 r/min離心5 min，取上清有機液，殘渣加15 mL乙腈複提一次，合並兩次有機液於雞心瓶，旋轉蒸發近幹，備用。
淨化。將上述提取的樣品用1 mL的乙腈溶解，混勻，轉移到氧化鋁層析柱上，用正己烷洗脫，氮吹濃縮置近幹，1 mL乙腈複溶，過0.22 μm濾膜，備用。
1.5 色譜條件和質譜條件
色譜柱：Waters UPLC BEH柱（3.0 µm，2.1mm×100 mm）；柱溫：35 ℃；進樣量：5 μL；流動相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈溶液，進行梯度洗脫，流速：0.6 mL/min。
電離源模式：電噴霧離子化；電離源極性：正離子模式；霧化氣：氮氣；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應監測（MRM）；電噴霧電壓：4000 V；離子源溫度：150 ℃、碰撞電壓（CE）為20～30 V、去簇電壓（DP）30～40 V。具體待測物的準確質量數及碎片離子為：蘇丹紅Ⅰ249.1/156.1，249.1/232.2；蘇丹紅Ⅱ277.3/156.1，277.3/160.1；蘇丹紅Ⅲ253.2/156.1，253.2/197.0；蘇丹紅Ⅳ381.1/224.3，381.1/275.8。
2 結果和分析
2.1 質譜方法的建立
將蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ標準品儲備液分別稀釋成濃度約為200 µg/L，按照上述色譜和質譜條件進樣檢測，在7 min內蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ能得到很好分離，方法條件滿足辣椒麵、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血中的蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的測定。
2.2 標準曲線和檢出限
在上述本實驗色譜和質譜條件下，取1.3混合係列標準溶液0～500 μg/L，繪製標準曲線，以定量離子峰麵積對質量濃度（μg/L）做線性回歸，得到蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的線性方程和相關係數。蘇丹紅Ⅰ：=1 271.7+3 854.8，蘇丹紅Ⅱ：=1 540.1+4 678.5，蘇丹紅Ⅲ：=1 383.2+2 432.3，蘇丹紅Ⅳ：=1 262.1+2 743.3，2均大於等於0.999。將混合係列溶液的最低濃度點溶液稀釋後進樣分析，測定信噪比，取信噪比約為3的溶液濃度作為定性檢測限，信噪比約為10的溶液濃度作為定量檢測限。檢出限和定量限為1.0~6.0 µg/kg。
2.3 精密度和重複性試驗
按本實驗條件，在5種不同基質樣品中進行3個添加水平（0.1 µg/mL、0.2 µg/mL、0.5 µg/mL）的加標回收實驗，每個添加水平平行實驗6次。蘇丹紅Ⅰ的平均回收率為89.3%、93.5%、91.9%；蘇丹紅Ⅱ的平均回收率為92.2%、91.4%、104.9%；蘇丹紅Ⅲ的平均回收率為87.9%、88.0%、90.5%；蘇丹紅Ⅳ的平均回收率為85.1%、86.9%、91.5%，平均相對標準偏差分別為4.05%、3.2%、6.18%，表明該方法具有良好的精密度和準確度。可滿足食品中蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的分析
要求。
2.4 樣品測定
應用建立的本方法，對市場銷售的50批次辣椒麵、火鍋料、辣條、鴨蛋、鴨血樣品進行了篩查，所測樣品中均未檢出蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ。
3 結論
本研究建立的UPLC-MS/MS高分辨率質譜檢測方法，可同時測定食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ，樣品沒有複雜的處理過程，操作簡便，可在7 min內完成整個分析，提高了檢驗效率。采用液相色譜-串聯質譜的MRM模式進行定性和定量檢測，靈敏度、準確度高，適用於食品中非法添加蘇丹紅Ⅰ～Ⅳ的檢測。
參考文獻
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作者簡介：陳英（1997—），女，漢族，陝西周至人，本科，助理工程師。研究方向：食品質量與安全。