HPLC法同時測定茶葉中咖啡因和兒茶素

2021-08-23 16:48:38來源：世界杯賽程預測導刊

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胡旭倩1,2，唐銷蓉1,2，姚菲菲1,2，駱燦1,2
（1.讚宇科技集團股份有限公司，浙江杭州 310009；

2.浙江金正檢測有限公司，浙江義烏 322000）

摘要：本文旨在建立HPLC法同時測定茶葉中的5種兒茶素類（EGC、C、EC、EGCG、ECG）及咖啡因（CAF）的方法。結果表明，5種兒茶素類和咖啡因在0.2～2.0 mg/mL的範圍內線性良好，相關係數為0.999 11～0.999 95，為0.24%～0.57%，方法回收率為95.9%～100.6%。本方法簡單、準確、重現性好，可用於茶葉中兒茶素類和咖啡因的定量檢測。
關鍵詞：茶葉；HPLC；兒茶素類；咖啡因
茶多酚具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、調血脂和降血糖等藥理作用,被廣泛應用於食品、醫藥保健品、功能性飲料和化妝品中[1-3]。兒茶素是茶多酚的主成分，也是其主要的藥理活性物質，占茶多酚含量的60%～80%[3-5]。
1 材料和方法
1.1 儀器與試劑
Agilent 1260超高效液相色譜儀（配紫外檢測器）（美國Agilent公司）；超聲波振蕩器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；渦旋混合儀（上海精科實業有限公司）；純水淨化儀（杭州永潔達淨化科技有限公司）；甲醇為色譜純（美國大地公司）；甲酸為分析純（上海安譜實驗科技股份有限公司）。
1.2 方法
1.2.1 流動相的配製
①流動相A（0.1%甲酸水）。1 000 mL水中加入1 mL的甲酸，超聲脫氣備用。②流動相B（0.1%甲酸甲醇）。1 000 mL甲醇中加入1 mL的甲酸，超聲脫氣備用。
1.2.2 標準溶液配製
（1）標準儲備溶液的配製。準確稱取兒茶素（C）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG）和咖啡因（CAF）0.100 0 g（精確到0.000 1 g）於50 mL容量瓶中，用甲醇溶解並定容至刻度，配製成濃度約為2.0 mg/mL的標準儲備液。
（2）標準混合工作溶液的配製。用甲醇溶液稀釋兒茶素及咖啡因的混合標準儲備溶液，得到適量質量濃度的混合標準工作溶液。
1.2.3 色譜條件
安捷倫C18（4.6 µm×250 mm）色譜柱；柱溫30 ℃；流速0.8 mL/min，進樣量20 µL，紫外檢測器檢測，檢測波長：280 nm，流動相條件如表1所示。
1.2.4 提取方法
稱取1.0 g均勻磨碎的試樣於50 mL離心管中，加入在75 ℃中預熱過的70%甲醇溶液30 mL，用玻璃棒充分攪拌均勻濕潤，立即移入75 ℃水浴中，浸提30 min，期間不間斷攪拌幾次，取出，冷卻至室溫。用70%甲醇溶液定容至50 mL，搖勻，濾液過0.45 µm濾膜，上機待測。

2 結果與分析
2.1 檢測波長的選擇
選取一定濃度的混合標準工作溶液，用二極管陣列檢測器在200～400 nm的波長範圍內進行掃描，5種兒茶素分別在210 nm和280 nm處有兩個最大吸收波長，咖啡因在280 nm處有最大吸收波長。鑒於梯度洗脫時，在210 nm的波長下檢測時，基線漂移比較明顯，故本方法采用280 nm為檢測波長。
2.2 流動相添加劑的選擇
本文在相同的色譜條件下，選取一定濃度的混合標準工作溶液進行進樣分析，綜合考慮6種物質的出峰時間、峰形和分離度等因素，故本文選擇甲酸為流動相添加劑。
2.3 提取方法的選擇
對同一茶葉樣品在相同的色譜條件下，分別用傳統加熱浸提法和超聲浸提法在70%甲醇溶液下提取30 min。結果表明，經過相同時間的提取，傳統的加熱浸提法提取率明顯高於超聲浸提法，故本方法選用加熱浸提法。
2.4 提取時間的選擇
稱取同一茶葉樣品，在相同的色譜條件下，用70%的甲醇溶液在75 ℃的水浴中分別提取10 min、20 min、
30 min、40 min、50 min和60 min。結果表明，加熱浸提時間從30 min開始，提取率開始緩慢下降（詳見表圖1）。因此，本實驗選取30 min為最佳提取時間。
2.5 方法線性關係、精密度和重現性
EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF在0.2～2.0 mg/mL的範圍內線性良好，相關係數為0.999 11～0.999 95，為0.24%～0.57%，回收率為95.9%～100.6%（詳見表2）。本方法簡單、準確、重現性好，可用於茶葉中兒茶素類和咖啡因的定量檢測。

3 結論
本研究以茶葉中EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF為研究對象，采用酸性流動相梯度洗脫同時測定了茶葉中5種主要兒茶素和咖啡因的含量。實驗結果表明，茶葉中的EGC、C、EC、EGCG、ECG和CAF經70%甲醇溶液在75 ℃加熱浸提30 min，能夠充分被提取。本方法簡單、準確、重複性好且成本低廉，可用於茶葉中咖啡因和兒茶素的
檢測。
參考文獻
[1]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局,中國國家標準化管理委員會.茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法:GB/T 8313—2008[S].北京:中國標準出版社,2008.
[2]王麗麗,陳鍵,宋振碩,等.茶葉中茶多酚檢測方法研究進展[J].茶葉科學技術,2013(4):6-12.
[3]張曉夢,倪豔,李先榮.茶多酚的藥理研究進展[J].藥物評價研究，2013,36(2):157-160．
[4]王增明,郭慶東,謝芳,等.HPLC測定茶多酚中兒茶素類及咖啡因含量[J].中國藥學雜質,2011,46(21):1674-1676．
[5]劉小喬,李忠岐,高靜,等.茶多酚中兒茶素類的HPLC分析[J].光譜實驗室,2012,29(5):2611-2615．
作者簡介：胡旭倩（1992—），女，浙江義烏人，本科，工程師。研究方向：世界杯賽程預測檢測。