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摘　要：為建立超高效液相色譜法檢測秋葵籽油中苯並芘的含量，故采用分析方法——樣品以正己烷溶劑提取，過固相萃取柱，通過超高效液相色譜法檢測樣品含量。結果顯示，在該色譜條件下苯並芘的標曲線性r>0.9999，在洗脫液中加入1mL乙腈氮吹，回收率85.6%~94.5%，苯並芘的檢出限為0.2μg/kg，定量限為0.5μg/kg。因此得出結論，該方法操作簡單、效率高、回收率高、結果可靠，適用於秋葵籽油中苯並芘的含量檢驗。

關鍵詞：苯並芘 秋葵籽油 超高效液相色譜 固相萃取柱

秋葵籽油是從成熟的優質黃秋葵籽中提取出來的純天然高級食用油，因其富含維他命、蛋白質、卵磷脂及鈣、磷、鐵、鉀、鎂等礦物質，所以是一種營養豐富的高檔植物油。作為一種新型植物油，秋葵籽油不僅可以用於烹飪、糕點、罐頭食品等，還可以加工成人造奶油、烘烤油、調味油(有特殊香味)等以供食用。有報道稱，經常食用秋葵籽油可以促進人體血液循環，防止動脈硬化及動脈硬化並發症、高血壓、心髒病、心力衰竭、腎衰竭、腦出血，以及抗衰老、改善人腦記憶力，預防老年癡呆症、改善消化係統功能等。此外，人體對秋葵籽油中不飽和脂肪酸的消化吸收率較高，其不僅有助於減少胃酸、阻止發生胃炎及十二指腸潰瘍等，還具有潤腸功能，長期食用可以有效緩解便秘。在醫藥領域，秋葵籽油可作為燒傷藥、胃潰瘍藥、傷口愈合藥、止痙攣藥、神經鎮定劑等。正是因為秋葵籽油的營養價值和保健功能，所以引起了醫療、食品、農業等許多領域科學家的關注。采用氣相色譜法對秋葵籽的主要脂肪酸成分進行分析，得出其主要脂肪酸含量分別為：豆蔻酸0.2%、棕櫚酸30.6%、棕櫚油酸0.5%、硬脂酸4.2%、油酸23.8%、亞油酸30.8%、亞麻酸0.3%、花生酸0.6%，且香味香度約為芝麻油的4倍。但是秋葵籽油在生產加工及使用過程中經常處於高溫條件下，故可能引起有害物質苯並芘的產生。

苯並芘(Benzopyrene)是一種含苯環的稠環芳烴，其於環境中廣泛存在[1]，且在大氣中的含量已被列入環境監測的常規項目[2]。最初，苯並芘由煤焦油中分離得到;從煤煙、焦油、瀝青、香煙煙霧中都可以檢測出來，並且具有強烈的致癌作用——可以誘發肺癌等。根據苯環的稠合位置不同，可將苯並芘分為兩種——苯並[a]芘(1,2-苯並芘)和苯並[e]芘(4,5-苯並芘)，後者是前者的同分異構體，存在於煤煙和焦油中。人們日常生活中接觸到的大多是苯並[a]芘，英文縮寫為B[a]P，CAS號為50-32-8，化學式為C20H12，分子量為252.31。苯並[a]芘在常溫條件下的狀態是黃色粉末，熔點為179℃，難溶於水，微溶於甲醇、乙醇，易溶於苯、甲苯、二甲苯、丙酮、乙醚、氯仿、二甲基亞碸等有機溶劑。苯並芘在工業上無生產和使用價值，一般隻作為生產過程中形成的副產物隨廢氣排放。1933年，英國科學家J.W.Cook等人從瀝青中分離得到苯並芘純品，然後合成證明其化學結構，並進行動物實驗，最終誘導小鼠產生了皮膚癌。由此，苯並芘被確認為化學環境致癌物[3]。目前，針對苯並芘測定的相關文獻中多采用酶聯免疫吸附測定法[4]、膠體金法[5]、氣相色譜-質譜聯用法[6]、液相色譜-質譜聯用法[7]、液相色譜-熒光檢測法等[8-16]。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

安捷倫1290型超高效液相色譜儀(配熒光檢測器G1321B)，美國安捷倫科技有限公司;EclipsePlus-C18色譜柱(2.1×50mm，1.8μm);BaP-2固相萃取柱、Silica固相萃取柱，月旭科技;固相萃取儀，美國安捷倫科技有限公司;ML204T電子分析天平，梅特勒-托利多儀器上海有限公司;氮氣發生器LCMS30-1-E，英國Parker;氮吹儀N-EVAP 24，美國Organomation;多位渦旋振蕩器，廣東晉元;超聲波清洗器，中國昆山舒美;0.22μm有機濾膜，天津津騰公司。

苯並芘標準物質，Dr.Ehrenstorfer;分析純二氯甲烷、分析純正己烷，天津市科密歐化學試劑有限公司;色譜純乙腈，上海安譜實驗科技股份有限公司;實驗用水為Milli-Q Advantage A10超純水，美國Millipore公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準曲線的繪製

使用十萬分之一的天平稱取1mg苯並芘標品，用色譜純乙腈定容至100mL，配製成濃度為10μg/mL的標準儲備液;吸取1mL標準儲備液用色譜純乙腈定容至100mL，配製成濃度為100ng/mL的中間標準工作液，然後用色譜純乙腈稀釋成5個不同濃度的標準係列工作液，濃度分別為0.5、1、5、10、20ng/mL;采用超高效液相色譜儀對該係列標準溶液進行上機檢測，並建立標準工作曲線。

1.2.2 液相色譜條件

液相色譜柱：EclipsePlus-C18色譜柱(2.1×50mm，1.8μm);色譜柱柱溫：35℃;流動相：乙腈︰水=88︰12;流速：0.3mL/min;進樣量：5μL;熒光檢測器：激發波長275nm，發射波長415nm

1.2.3 樣品前處理

提取步驟：準確稱樣(0.400g)→加入正己烷(5mL)→振蕩混勻(20min)→超聲提取(20min)→待淨化。

SPE淨化步驟：將Silica矽膠柱串聯在BaP-2固相萃取柱上→活化(5mL二氯甲烷、5mL正己烷)→上樣(將淨化液加入到串聯柱上，並用2mL正己烷潤洗盛放樣品的離心管，確保完全上樣)→淋洗1(5mL正己烷淋洗整個串聯柱，然後棄去Silica矽膠柱)→淋洗2(5mL正己烷淋洗BaP-2固相萃取柱)→洗脫(5mL二氯甲烷，收集洗脫液)→定容(洗脫液中加入1mL乙腈，40℃條件下氮吹至近幹，用乙腈定容至1mL，渦旋0.5min，經0.22μm濾膜過濾，供UPLC測定)。

2 結果與分析

2.1 線性關係

在“1.2.2”條件下對“1.2.1”係列標準品進行測定，以質量濃度為橫坐標，以峰麵積為縱坐標，繪製標準曲線，計算回歸方程，結果見表1、圖1。

圖 1 苯並芘線性範圍

2.2 精密度試驗

在“1.2.1”中選擇濃度為5ng/mL的苯並芘標準溶液，連續進樣6次，記錄峰麵積。苯並芘峰麵積的RSD為0.9%，說明儀器精確度較好，見表2。

2.3 回收率試驗

按照GB 5009.27-2016的方法,采用分子印跡柱洗脫後直接氮吹。由於二氯甲烷的揮發性太強而容易將目標物帶走，故試驗在洗脫液中加入1mL乙腈以防止目標物損失。取陰性樣品，苯並芘的3個添加水平分別為2、10、20μg/kg，加入對應體積的標準品後靜置過夜，按照“1.2.3”的前處理方法處理樣品，然後上機測定，結果見表3。

2.4 檢出限和定量限

根據信噪比S/N=3和S/N=10確定目標物的檢出限和定量限，苯並芘的檢出限為0.2μg/kg，定量限為0.5μg/kg。

圖 2 超高效液相色譜圖(5ng/mL)

3 討論

苯並芘是一類對人類健康危害較大的致癌物，其汙染問題長期受到社會關注。秋葵籽中苯並芘產生的來源主要包括以下幾點：①新鮮采摘的秋葵籽晾曬在柏油路上，瀝青隨著高溫融化並與秋葵籽慢慢混合;②苯並芘廣泛存在於環境中且親脂性極強，並易在種植、收獲及加工等環節受到汙染;③秋葵籽在高溫下反複烘烤和蒸炒，可能因燒焦而產生苯並芘[17-18]。

本試驗利用超高效液相色譜法檢測秋葵籽中的苯並芘含量，出峰時間早，節省檢測時間，不僅分離度滿足試驗需求，更可以節省流動相中的乙腈，故實用性較強。秋葵籽油是一種高檔植物油，隨著生活水平的提高，人們越來越追求飲食健康，因此，加強對秋葵籽中苯並芘的檢測能夠為人們放心食用秋葵籽油提供數據支持。

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