《世界杯賽程預測 導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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液相色譜串聯質譜法檢測雞蛋中磺胺類藥物

2019-07-18 15:59:58來源:世界杯賽程預測 導刊

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□ 倫麗麗 江蘇美正生物科技有限公司

磺胺類藥物(SAs)是指具有對氨基苯磺酰胺結構的一類化學藥物的總稱,被廣泛用於畜禽生產中以防治細菌感染。在養殖密度較大的家禽行業中,使用磺胺類藥物防治細菌感染的做法尤為普遍,因此禽蛋中存在著磺胺類藥物殘留的風險。

目前,我國相關的動物源性食品中磺胺類藥物的檢測方法已有相關標準,但對雞蛋中儀器檢測的報道文獻較少。本文建立了雞蛋中16種磺胺類藥物的超高效液相色譜串聯質譜檢測方法,其靈敏度高、穩定性好,能夠滿足對雞蛋中磺胺類藥物殘留的檢測要求。

1 實驗部分

1.1 試劑與耗材

磺胺乙酰、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺二惡唑、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲惡唑、磺胺吡啶、磺胺地索辛、磺胺甲氧噠嗪、磺胺二甲基異噁唑、苯甲酰磺胺、磺胺喹惡啉、磺胺鄰苯甲氧嘧啶,德國DR.E公司。

乙腈、甲醇、甲酸等,均為色譜純(國藥)。

將標準品用甲醇配製成單標母液,並配製10μg/mL混合儲備液於-20℃保存,使用時現配為係列標準工作液。

雞蛋購於超市,經液質分析確認均為陰性樣本。

1.2 儀器設備

ACQUITYTM型超高效液相色譜儀、Waters Xevo TQS四極杆質譜儀(配電噴霧離子源)、ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1mm×100mm,1.7μm),美國Waters公司;離心機;純水儀;氮吹儀。

1.3 試驗

1.3.1 前處理方法優化

本實驗比較了乙腈、1%甲酸乙腈作為提取溶劑,對事先添加25μg/kg混標溶液的空白雞蛋樣本進行提取,並進行提取溶劑優化試驗;比較了渦旋振蕩提取、渦旋振蕩+超聲配合提取,對事先添加25μg/kg混標溶液的空白雞蛋樣本進行萃取,同時進行提取方法優化試驗;比較了10g無水硫酸鈉加入與否對結果的影響;最終確定最優的前處理條件。

1.3.2 優化後的前處理方法

稱取樣品2g,加入混合內標工作液100ng、無水硫酸鈉10g、12mL1%甲酸乙腈,渦旋振蕩2min,超聲提取10min;7000rpm離心5min,取上清,60℃水浴氮吹至幹。然後,加入5mL正己烷進行淨化,並加入2mL初始流動相進行複溶,棄去上層液體,取下層溶液0.22μm濾膜待上機測定。

1.3.3 液相條件

色譜柱:A cquity UPLC BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm);流動相A:2mmol乙酸銨-0.1%甲酸;流動相B:乙腈。

圖1 不同提取溶劑對磺胺類藥物回收率的影響

1.3.4 質譜條件

電離子模式:ES+;毛細管電壓:1.2kV;萃取錐孔電壓:60V;RF透鏡電壓:50V;離子源溫:600℃;脫溶劑溫度:600℃;錐孔氣流速:150L/h;脫溶劑氣流速:1000L/h;碰撞氣流速:0.15mL/min;采集模式:MRM;各種藥物優化母離子和子離子及對應聚焦電壓和碰撞電壓值見表2。

圖2 不同提取方法對磺胺類藥物回收率的影響

1.3.5 定量測定

按照儀器的色譜條件和質譜條件,將混合標準工作液及樣品液等體積進樣測定,磺胺二甲異惡唑、磺胺喹惡啉和磺胺間二甲氧嘧啶以氘代磺胺間二甲氧嘧啶為內標;磺胺二甲異嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺間甲氧嗜啶、磺胺甲氧噠嗪、碳胺甲惡唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺對甲氧嘧啶、碳胺甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶和磺胺氯噠嗪以氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶為內標;磺胺氯吡嗪采用外標法定量。

1.3.6 方法線性和靈敏度試驗

試驗采用空白雞蛋樣品,經1.3.2方法處理,在1.0~50μg/kg濃度範圍內分別添加不同梯度磺胺類藥物混標溶液,分別配製1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0μg/kg基質加標溶液,通過檢測峰麵積繪製峰麵積-濃度標準曲線,同時將處理好的空白雞蛋樣品逐級稀釋至標準溶液。

1.3.7方法的回收率試驗

試驗選取空白雞蛋樣品,分別添加濃度為2.0、10.0、25.0μg/kg低、中、高3個水平混標溶液,每個濃度做6個平行,按照1.2.2方法進行添加回收試驗,通過測定回收率和RSD來評估方法的準確度和精密度。

圖3 是否加入淨化劑對磺胺類藥物回收率的影響

2 結果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

結果表明,以1%甲酸乙腈為提取液時,除了磺胺氯吡嗪外的其他15種磺胺類藥物的回收率與乙腈作為提取劑的回收率均有所提高,結果見圖1。

2.2 提取方法的選擇

試驗結果表明,將渦旋振蕩提取與超聲提取結合的提取方法,其回收率明顯優於單純的渦旋振蕩提取法,結果見圖2。

2.3 淨化劑對結果的影響

試驗結果表明,加入淨化劑後,提取液外觀更為澄清,回收率更好,結果見圖3。試驗最終選擇10g無水硫酸鈉作為淨化劑。

2.4 線性方程及靈敏度試驗

結果表明,1.0~50μg/kg範圍內線性關係良好,相關係數均大於0.99;將處理好的空白雞蛋樣品逐級稀釋標準溶液,按照10倍信噪比確定方法的LOQ;為了便於配置混標溶液且在滿足檢測要求的前提下,將16種藥物的定量限定於2.0μg/kg,結果見表3。

2.5 回收率和精密度試驗

從表4可以看出,16種磺胺類藥物的回收率在75.53%~125.23%,RSD在0.08%~14.98%,說明本方法準確度、精密度均能滿足雞蛋中磺胺類藥物的檢測要求。

3 結論

檢測準確性是對儀器檢測方法的第一需求,而前處理方法是儀器檢測方法中較為複雜且非常重要的環節。本文通過對提取劑、提取方法、淨化與否的優化,建立了同時檢測雞蛋中16種磺胺UPLC-MS-MS的檢測方法。

本方法的樣品經過振蕩和超聲混合提取、加入淨化劑淨化,提取率高、淨化效果好,並以超高效液相色譜串聯質譜進行檢測。該方法靈敏度高、穩定性好、回收率均保持在比較滿意的水平,能夠滿足同時檢測雞蛋中多種磺胺類藥物殘留的要求,為製定禽蛋中磺胺類藥物檢測標準提供了技術參考。

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