【微生物】黴菌和酵母菌及其檢驗

2019-01-31 15:15:04來源：

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一、黴菌和酵母菌介紹：

黴菌和酵母菌及其檢驗酵母菌是真菌中的一大類，通常是單細胞，呈圓形,卵圓形、臘腸形或杆狀。

黴菌也是真菌，能夠形成疏鬆的絨毛狀的菌絲體的真菌稱為黴菌。

黴菌和酵母廣泛分布於自然界並可作為食品中正常菌相的一部分。長期以來，人們利用某些黴菌和酵母加工一些食品，如用黴菌加工幹酪和肉，使其味道鮮美;還可利用黴菌和酵母釀酒、製醬;食品、化學、醫藥等工業都少不了黴菌和酵母。但在某些情況下，黴菌和酵母也可造成中腐敗變質。由於它們生長緩慢和競爭能力不強，故常常在不適於細菌生長的食品中出現，這些食品是pH低、濕度低、含鹽和含糖高的食品、低溫貯藏的食品，含有抗菌素的食品等。由於黴菌和酵母能抵抗熱、冷凍，以及抗菌素和輻照等貯藏及保藏技術，它們能轉換某些不利於細菌的物質，而促進致病細菌的生長;有些黴菌能夠合成有毒代謝產物-黴菌毒素。黴菌和酵母往往使食品表麵失去色、香、味。例如，酵母在新鮮的和加工的食品中繁殖，可使食品發生難聞的異味，它還可以使液體發生混濁，產生氣泡，形成薄膜，改變顏色及散發不正常的氣味等。因此黴菌和酵母也作為評價食品衛生質量的指示菌，並以黴菌和酵母計數來製定食品被汙染的程度。目前已有若幹個國家製訂了某些食品的黴菌和酵母限量標準。我國已製訂了一些食品中黴菌和酵母的限量標準。

二、黴菌和酵母菌的計數方法

黴菌和酵母的計數方法，與菌落總數的測定方法基本相似。主要步驟為：

將樣品製作成10倍梯度的稀釋液，選擇3個合適的稀釋度，吸取1mL於平皿，傾注培養基後，培養觀察，計數。

對黴菌的計數，還可以采用顯微鏡直接鏡檢計數的方法。

具體檢測標準參見：

GB4789.15-2016，《中華人民共和國國家標準食品衛生微生物檢驗黴菌和酵母計數》

三、說明：

1.樣品的處理。為了準確測定黴菌和酵母數，真實反映被檢食品的衛生質量，首先應注意樣品的代表性。對大的固體食品樣品，要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料，再混合磨碎。如樣品不太大，最好把全部樣品放到滅菌均質器杯內攪拌2min。液體或半固體樣品可用迅速顛倒容器25次來混勻。

2.樣品的稀釋：為了減少櫚稀釋倍數的誤差，在連續遞增稀釋時，每一稀釋度應更換一根吸管。在稀釋過程中，為了使黴菌的孢子充分散開，需用滅菌吸管反複吹吸50次。

3.培養基的選擇：在黴菌和酵母計數中，主要使用以下幾種選擇性培養基。

馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養基(PDA)：黴菌和酵母在PDA培養基上生長良好。用PDA作平板計數時，必項加入抗菌素以抑製細菌。

孟加拉紅(虎紅)培養基：該培養基中的孟加拉紅和抗菌素具有抑製細菌的作用。孟加拉紅還可抑製黴菌菌落的蔓延生長。在菌落背麵由孟加拉紅產生的紅色有助於黴菌和酵母菌落的計數。

高鹽察氏培養基：糧食和食品中常見的曲黴和青黴在該培養基上分離效果良好，它具有抑製細菌和減緩生長速度快的毛黴科菌種的作用。

4.傾注培養。每個樣品應選擇3個適宜的稀釋度，每個稀釋度傾注2個平皿。培養基熔化後冷卻至45℃，立即傾注並旋轉混勻，先向一個方向旋轉，再轉向相反方向，充分混合均勻。培養基凝固後，把平皿翻過來放溫箱培養。大多數黴菌和酵母在25-30℃的情況下生長良好，因此培養溫度25~28℃。培養3d後開始觀察菌落生長情況，共培養5d觀察記錄結果。

5.菌落計數及報告：選取菌落數10~150之間的平板進行計數。一個稀釋度使用兩個平板，取兩個平板菌落數的平均值，乘以稀釋倍數報告。固體檢樣以g為單位報告，液體檢樣以mL單位報告。關於稀釋倍數的選擇可參考細菌菌落總數測定。

6.黴菌直接鏡檢計數法：對黴菌計數，可以采用直接鏡檢的方法進行計數。

四、黴菌判斷依據

在顯微鏡下，黴菌菌絲具有如下特征：

平行壁：黴菌菌絲呈管狀，多數情況下，整個菌絲的直徑是一致的。因此在顯微鏡下菌絲壁看起來象兩條平行的線。這是區別黴菌菌絲和其他纖維時最有用的特征之一。

橫隔：許多黴菌的菌絲具有橫隔，毛黴、根黴等少數黴菌的菌絲沒有橫隔。

菌絲內呈粒狀：薄壁、呈管狀的菌絲含有原生質，在高倍顯微鏡下透過細胞壁可見其呈粒狀或點狀。

分枝：如菌絲不太短，則多數呈分枝狀，分枝與主幹的直徑幾乎相同，有分枝是鑒定黴功得出可靠的特征之一。

菌絲的頂端：常呈鈍圓形。

無折射現象。

凡有以上特征之一的絲狀均可判定為黴菌菌絲。

觀察視野中有無菌絲，凡符合下列情況之一者為陽性視野。