摘　要：連續兩年在市場、餐飲業隨機抽取150份動物性食品進行氯黴素檢測，采用高效液相色譜串聯三重四極杆質譜（LC-MS-MS）測定，比較與綜合了檢測方法GB/T 22338、農業部781號公告-2-2006及GB/T 20756。對操作步驟進行簡化，同時提高檢測時效，該方法的檢出限為0.07μg/kg，線性範圍為0.5~100ng/mL（r=0.99993），回收率達99%，相對標準偏差RSD為2.6%。兩年內檢測結果顯示仍存在使用氯黴素現象，共有5批樣品檢測出氯黴素，不合格率達3.3%，為確保餐飲業中動物性食品的安全，需加強獸藥殘留的監管，抵製動物性食品中抗生素的濫用。
關鍵詞：動物性食品 氯黴素 檢測

1 引言
氯黴素能使白細胞減少，對人體造血係統的毒性極大，特別是會殺傷顆粒性白細胞，從而影響紅細胞的成熟，並容易引起再生障礙性貧血症，可損害視力，引起急性中毒性表皮鬆懈症，使眼瞼粘連及產生角膜瘢痕。此外，氯黴素對老年人、新生兒、早產兒以及肝腎功能不全人群的影響更大 ^[1]。
隨著經濟生活水平的提高，人們對食品的質量要求也隨之提高，並逐漸認識到抗生素飼料添加劑在經濟效益的背後存在較大弊端。因此，大部分發達國家和地區禁用抗生素，而我國農業部公告第235號《動物性食品中獸藥最高殘留限量》附錄4也規定氯黴素及其鹽、酯（包括琥珀氯黴素）在所有動物性食品中是禁止使用的藥物，並不得檢出 ^[2]。

2 實驗
2.1 樣品、儀器、標準品及試劑
2.1.1 樣品：購置於市場，分別隨機抽取畜禽生肉、水產品、蜂蜜共80批，餐飲業隨機抽取熟肉加工製品70批。
2.1.2 儀器：高效液相色譜串聯三重四極杆質譜LC-MS-MS（高效液相色譜，日本島津公司；質譜，美國AB公司）；色譜柱C18（4.6mm×150mm×5μm，美國安捷倫公司）。
2.1.3 標準品：標準品名稱及來源，見表1。
2.1.4試劑：實驗用水為二次蒸餾水；氯化鈉、正己烷、乙腈為分析純；甲醇、乙酸乙酯為色譜純。 2.2儀器條件
2.2.1高效液相色譜條件
進樣量：10μL；柱溫：40℃；流速：0.8mL/min，流動相和梯度比例，見表2。 2.2.2質譜條件：
離子源：ESI；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：MRM。 2.3 對照品製備與樣品處理
2.3.1 對照品製備
氯黴素標準工作液：準確量取標準溶液，用甲醇+水（3+7）稀釋至刻度，製成濃度為100ng/mL的標準工作溶液。
氯黴素D-5標準工作液：準確量取內標溶液，用甲醇+水（3+7）稀釋至刻度，製成濃度為100ng/mL的內標工作液。
標準曲線的製備：精密量取上述標準溶液工作液，用基質溶液稀釋至1.0mL，製成氯黴素濃度分別為0.5、1.0、5.0、10.0、50.0和100ng/mL，氯黴素D-5內標濃度為20.0ng/mL，氯黴素濃度檢出限濃度為0.5ng/mL。
2.3.2 樣品處理
取試樣5.0g置於50mL塑料離心管中，加氯黴素D-5內標工作液200μL，加入乙腈10mL和4％氯化鈉溶液10mL，渦旋振蕩30min提取。離心10min轉速4500r/min，取上清液到新的50mL塑料離心管中。在新的塑料離心管中加正己烷5mL，渦旋振蕩3min，4500r/min，離心5min，棄去正己烷液，反複幾次直至去除樣品中脂肪。加乙酸乙酯溶液6mL，渦旋振蕩5min，4500r/min，離心5min，將乙酸乙酯層轉移至15mL玻璃離心管中，經氮氣吹幹，加甲醇+水（3+7）1mL，渦旋5min使之溶解，於12000rpm下離心3min，經0.22μm濾膜過濾，取濾液進樣測定。 ^[3-5]
3 結果
3.1 質譜條件的優化
針筒直接進樣質譜儀，用全掃描方式將氯黴素和D5-氯黴素的標準溶液注入離子源中，找到目標化合物的分子離子峰。進行二級質譜，掃描二級質譜圖（圖1）找到碎片離子信息，目標化合物的質譜參數CE電壓、DP電壓、EP電壓等進行優化，達到質譜條件最佳。 ^[6] 3.2 樣品前處理優化
本實驗選用正己烷去除樣品中脂肪，乙酸乙酯提取樣品中的氯黴素，進行渦旋和離心，氮氣吹幹。

3.3 標準曲線、檢出限及回收率
用標準溶液溶解基質樣品來製備標準曲線，繪製標準曲線進行定量，消除基質效應對結果的影響。得曲線方程y=3.44348e ⁴x±10951.42692，相關係數=0.99993，見圖2。 本實驗的樣品稱樣以5.0ｇ計，定容體積按1mL計，結合標準曲線氯黴素的檢出限濃度為0.5ng/mL，儀器測試信噪比如圖3所示，本實驗檢出限為0.07ug/kg。 ^[7] 稱取空白試樣後同時分別加入0.03、0.1mL氯黴素標準工作液100ng/mL，各平行5份同樣品處理，實際加入標準品的量為0.6、2.0μg/kg，計算見表4。 4 結論
4.1 方法簡化
本實驗簡化了提取步驟，提高了檢測效率；同時優化檢測方法，達到最佳檢測條件，得到結果為該方法的最低檢出限為0.07ug/kg， 靈敏度得到提高，線性範圍擴大，為0.5~100ng/mL（r=0.99993），回收率達99%，相對標準偏差RSD為2.6%。滿足了對動物性食品氯黴素監督檢測的要求，提高了檢測時效。

4.2 檢測數據結果分析
樣品購置於市場，分別隨機抽取畜禽生肉，其中牛肉20批、豬肉10批、雞肉10批、水產品20批、蜂蜜及蜂產品20批，共80批；從餐飲業隨機抽取熟肉加工製品共70批，其中牛肉加工製品20批、豬肉加工製品20批、雞肉加工製品20批、鴨肉加工製品10批。檢測結果顯示，其中牛肉1批、雞肉1批、蜂蜜1批、雞肉加工製品2批檢測出氯黴素殘留量，共計5批樣品不合格，不合格率達3.3%。從上述情況看，氯黴素殘留量控製依舊是 世界杯賽程預測重大問題，檢出率較高的為雞肉類樣品中氯黴素殘留，禽類養殖業中使用氯黴素較為廣泛，其他類產品也存在含有氯黴素殘留，因此應從源頭加強畜禽等養殖業中獸藥使用監管，同時在企業生產和餐飲業加工中應注重加工原料的把關。 ^[8]
參考文獻：
[1] 熊琳，李維紅等，肉製品中藥物殘留風險因子概述[J]. 世界杯賽程預測質量檢測學報，2016年4月第7卷第4期:1572-1577.
[2] 農業部235號公告-2002，動物性食品中獸藥最高殘留限量[S].
[3] 農業部781號公告-2-2006，動物源食品中氯黴素殘留量的測定高效液相色譜-串聯質譜法[S].
[4] GB/T 22338-2008，動物源性食品中氯黴素類藥物殘留量測定[S].
[5] SN/T 1864-2008，進出口動物源性食品中氯黴素殘留量的檢測方法液相色譜-串聯質譜法[S].
[6] 馬曉年等，超高效液相色譜串聯三重四極杆質譜測定蜂蜜中氯黴素殘留[J].世界杯賽程預測 質量檢測學報，2017年10月第8卷第10期：3898-3902.
[7] 張厚森等，高效液相色譜－串聯質譜測定熟肉製品中磺胺嘧啶和氯黴素藥物殘留[J].分析科學學報，2013年8月第29卷第4期：527-530.
[8] 勇豔華等，熟肉製品中氯黴素的監測與分析[J].糧食加工，2010年09期：154-155.