為了解山東地區市售家禽產品中獸藥殘留現狀，為山東省 世界杯賽程預測保障提供有效信息，本次調查選取了山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個城市的大型超市和農貿市場為采樣點，利用酶聯免疫試劑盒對采集的324份雞肉、鴨肉樣本中的四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類等獸藥殘留進行篩查，並根據《動物性食品中獸藥最高殘留限量》對檢測結果進行判定。結果顯示，檢測的324份樣本的獸藥殘留檢出率為5.56%，其中超標率為2.47%，4類藥物均有檢出，氯黴素藥物殘留現象最明顯，超標率為1.85%；鴨胸肉檢出率最高（7.41%），雞腿肉超標率最高（4.00%）；臨沂市檢出率最高，達到9.84%，濰坊市超標率最高，達到5.56%。經統計，農貿市場的檢出率和超標率顯著高於大型超市。通過對試劑盒靈敏度、準確度和精密度以及檢出樣本確證結果驗證發現，試劑盒檢測結果準確，與國標方法檢測結果一致。通過本次調查可以看出，山東省家禽產品獸藥殘留現象依舊存在，需要加強對家禽產品獸殘的監測與管理，酶聯免疫試劑盒具有較高的準確度，操作方法比儀器方法便捷，推薦作為初篩手段用於大批量家禽產品獸藥殘留現場快速檢測。
前言
山東省是家禽飼養大省，肉雞、肉鴨、蛋類總產量約占全國的15%，家禽產品出口量占全國的60%以上。國家統計局相關數據顯示，2016年山東全省家禽存欄量達到6.57億隻，禽蛋產量達440.6萬噸，分別比2015年增長了6.8%和3.9%。在2016年5月發布的《山東省家禽業轉型升級實施方案》中提到，計劃到2020年山東省禽肉產量達到285萬噸。
隨著家禽養殖業的迅速發展，在養殖過程中任意加大用藥劑量和療程，不遵守休藥期違規用藥現象已屢見不鮮。2012年爆發的“速成雞”、“藥雞門”事件以及2013年爆發的禽流感等，都給山東的家禽養殖業造成了不小的打擊，在山東省食藥監局近期公布的食品抽檢信息中，有5批次雞肉被檢出禁用藥物或藥物殘留超標，其中檢出強力黴素超標達10倍之多。家禽產品中殘留的藥物，經食物鏈的作用會在人體內富集，從而對人類健康造成嚴重危害。家禽產品質量安全不僅事關人民健康，對山東省家禽養殖業的可持續發展以及家禽產品的國際競爭力均有影響。因此，深入了解山東省家禽產品中獸藥殘留現狀，對提升該省家禽產品獸藥殘留的監控力度具有現實的指導意義。加強家禽養殖戶規範獸藥使用和獸藥殘留控製，提高家禽產品品質，對保證居民吃上“放心禽肉”、“放心蛋”極為重要。
本研究麵向山東省5大城市，以雞肉、鴨肉等家禽產品為研究對象，針對四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類等獸藥，分析不同種類藥物殘留情況、不同動物及組織的殘留量等數據。該研究有助於山東省 世界杯賽程預測管理部門了解 獸藥殘留種類、評估動物源性食品的質量安全水平，提高消費者的世界杯賽程預測 意識。
1材料與方法
1.1 材料與試劑
乙腈（色譜純，國藥集團化學試劑有限公司），乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細化工有限公司），正己烷（分析純，天津市富宇精細化工有限公司），水（符合GB/T 6682-2008規定的二級水），四環素類藥物標準品（美國Sigma公司），氯黴素標準品（美國Sigma公司），金剛烷胺標準品（美國Sigma公司），喹諾酮類藥物標準品（美國Sigma公司）。
四環素類酶聯免疫試劑盒、氯黴素酶聯免疫試劑盒、金剛烷胺酶聯免疫試劑盒及喹諾酮類酶聯免疫試劑盒由北京維德維康生物技術有限公司提供。
1.2儀器
BILON-WX08型高速電動勻漿機（上海比朗儀器製造有限公司）；電子天平ER-182A（日本A＆D公司）；HQ-60型恒溫振蕩儀（北京方正生物科技發展有限公司）；TDL-40C型高速離心機（上海安亭科學儀器廠）；GM-2100型氮氣吹幹儀（日本 EYELA公司）；Thremo-F2型微量移液器（美國Thermo）；TSQ Quantum Ultra液相色譜質譜聯用儀（美國Thermo）。
1.3樣本收集
2017年1~3月，選擇山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個主要城市作為采樣區域，每個城市內隨機選擇2個人口較為集中的居民區，從每個居民區周邊隨機選擇采購頻率較高的超市和農貿市場各1個作為采樣點。根據山東省當地居民日常飲食習慣，分別采購雞肉類（雞胸、雞腿）、鴨肉類（鴨胸、鴨腿）兩類4種家禽產品。20個采樣點共采集樣本324份，其中，雞胸85份、雞腿75份、鴨胸81份、鴨腿83份；泰安市采樣70份、青島市采樣75份、聊城市采樣64份、臨沂市采樣61份、濰坊市采樣54份。 1.4方法
1.4.1 酶聯免疫快速檢測試劑盒檢測：利用酶聯免疫試劑盒對收集的324份家禽產品樣本中的四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類的殘留含量進行初篩，分別按照四環素類酶聯免疫試劑盒、氯黴素酶聯免疫試劑盒、金剛烷胺酶聯免疫試劑盒及喹諾酮類酶聯免疫試劑盒說明書規範檢測。
經酶聯免疫快速檢測試劑盒初篩後，高於最大殘留限量（MRL）的樣本利用國家標準檢測方法規定的液相色譜串聯質譜法（LC-MS/MS）進行確證。
1.4.2 液相色譜串聯質譜（LC-MS/MS）檢測：對酶聯免疫分析方法檢出陽性的樣本，參考國家標準方法GB/T 22338-2008《動物源性食品中氯黴素類藥物殘留量測定》、GB/T 21317-2007《動物源性食品中四環素類獸藥殘留量檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法與高效液相色譜法》、GB/T 21312-2007《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法》、DB32/T 1163-2007《雞肝中金剛烷胺殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》進行檢測確證。
1.4.3 評判依據：統計檢測結果後，將結果與農業部235號公告《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規定的最大殘留限量進行比較，判斷樣本獸藥殘留是否超標。其中，國家禁止在動物性食品中使用的藥物，一旦被檢出，即判為超標；對於國家在動物性食品中限量使用的藥物，當檢測結果高於其MRL時，判為超標。
樣本的檢出率和超標率計算公式分別為（1）、（2）。
檢出率： p1=含有某種（類）獸藥的動物性食品檢出個數/檢測動物性食品總數×100% ··············（1）。
超標率：p2=含有某種（類）獸藥的動物性食品超標個數/檢測動物性食品總數×100% ··············（2）。
1.4.4 統計分析：采用SPSS 19.0係統軟件對樣本數據進行統計和顯著性分析，p＜0.05為差異有統計學意義。
2結果與分析
2.1家禽產品獸藥殘留檢出情況分析
在收集的324份家禽產品樣本中，有18份樣本檢出獸藥殘留，檢出率為5.56%，其中有8份樣本檢測結果超標，超標率為2.47%。這說明家禽產品獸藥殘留現象依舊存在，需要繼續加強對家禽產品質量安全的監管與檢測。
2.2 獸藥殘留種類分析
據統計，四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物均有殘留檢出，其中氯黴素檢出率最高，達到1.85%，這可能與氯黴素在環境中易殘留，且方法靈敏度高有關。四環素類和喹諾酮類藥物雖有殘留檢出，但是並未超過MRL，表明在動物飼養過程中飼喂了四環素類和喹諾酮類藥物，可能屠宰時並未嚴格遵循休藥期規定，導致藥物代謝不完全，存在藥物殘留。 2.3不同組織樣本中各藥物的檢出情況
分別對雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉的藥物殘留情況進行分析，結果發現，鴨胸肉中的四環素類藥物檢出率最高，達到3.70%；雞腿肉中氯黴素超標率最高，達到2.67%；雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉4種樣本藥物殘留基本一致，說明這4種藥物在雞胸肉、雞腿肉、鴨胸肉、鴨腿肉中的殘留代謝情況相似。 2.4 不同采樣地區藥物檢出情況分析
結果顯示，山東省泰安市、青島市、聊城市、臨沂市、濰坊市5個采樣區域均有獸殘檢出、超標現象，其中臨沂市獸殘檢出率最高，達到9.84%；濰坊市樣本超標率最高，達到5.56%。 2.5 樣本來源藥物檢測情況分析
結果顯示，超市出售的雞肉、鴨肉獸藥檢出率明顯低於農貿市場的檢出率，獸殘超標樣本均來自於農貿市場。由此可見，超市出售的動物性食品獸藥殘留情況要優於農貿市場出售的動物性食品，因此，本研究建議購買動物性食品應盡可能到正規超市。 2.6 酶聯免疫試劑盒靈敏度驗證
為保障檢測結果的準確性，對檢測所用酶聯免疫試劑盒的靈敏度、準確度和精密度進行驗證。同時，與儀器方法在檢出樣本中的檢測值比較，驗證試劑盒的實用性。
2.6.1 檢出限驗證 ：通常以檢出限（Limit Of Detection，LOD）作為靈敏度的驗證指標，利用20份空白雞肉類（雞胸、雞腿）、鴨肉類（鴨胸、鴨腿）樣本，驗證四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物試劑盒的檢出限。檢出限計算公式為平均值加3倍標準差。由表6可知，氯黴素、四環素類、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物在家禽產品樣品的檢出限分別約為：0.1、3.0、0.5、2.0μg/kg，達到國家限量要求，部分檢出限優於LC-MS/MS方法。 2.6.2 準確度和精密度驗證：在空白樣本中分別添加1、2、4倍檢出限的四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類藥物標準品溶液，每個添加量樣品重複實驗10次，並且連續3d重複實驗，分別計算每個樣本的檢測值、平均回收率和批內、批間的相對標準偏差。由表7可知，四環素類、氯黴素、金剛烷胺、喹諾酮類4種藥物在家禽產品樣品的平均添加回收率為67%~110%；批內、批間相對標準偏差（RSD）均小於15%，說明酶聯免疫試劑盒的準確度良好、精密度高。 2.6.3 與國家標準方法比較：對酶聯免疫試劑盒檢出的樣本進行對應的國家標準方法驗證，結果顯示，兩種方法檢測結果一致，顯著性差異分析顯示，P值為0.102(P＞0.05)，說明兩種方法的檢測結果無顯著性差異，進一步證實了酶聯免疫試劑盒的準確性。此外，與LC-MS/MS相比，酶聯免疫試劑盒反應迅速，操作簡單，便於在現場大批量樣本檢測中推廣。 2.7 討論
經調查發現，山東省家禽產品獸藥殘留現象依舊存在，有必要加強對家禽產品獸殘的檢測管理。酶聯免疫試劑盒具有較高的準確度，推薦作為初篩手段用於大批量家禽產品獸藥殘留的現場快速檢測。
導致獸藥殘留的原因是多方麵的，可能與家禽飼養過程中濫用藥物或休藥期違規屠宰有關。由於家禽產品在居民膳食中所占比例較大，應當提高警惕。相關部門應加強對獸藥使用的監管力度，加強源頭監管，嚴格規範獸藥的安全生產和使用，確保畜產品的質量安全。同時，應與時俱進改進檢驗技術，加強檢測體係的建設，提高基層單位的獸藥殘留檢測能力，擴大檢測範圍，將殘留危害降低到最小程度。