《世界杯賽程預測 導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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高效液相色譜法檢測玉米製品和堅果製品中的黃曲黴毒素

2017-11-22 10:34:40來源:

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□ 孟之航 徐州市第一中學
□ 鬱倩 徐州市疾病預防控製中心
摘 要:目的是了解市售玉米製品和堅果製品中的黃曲黴毒素汙染狀況。方法為結合免疫親和樣品前處理技術,采用高效液相色譜法測定市售玉米製品、堅果製品中的4種黃曲黴毒素。檢測了25份市售玉米製品和24份堅果製品,結果顯示,其中玉米製品的陽性率為36%,堅果製品中未檢出。結論得出,目前市售食品中黃曲黴毒素汙染問題主要存在於玉米及其製品中,汙染程度雖不高,但由於黃曲黴毒素的強烈致癌作用,還是應該引起重視。
關鍵詞:液相色譜法 黃曲黴毒素 檢測
黃曲黴毒素(Aflatoxins,簡稱AFT)是由曲黴屬中的黃曲黴和寄生曲黴所產生的有毒代謝產物,目前已經發現的黃曲黴毒素有B1、B2、G1、G2、M1、M2等17種。1993年,AFT被世界衛生組織的癌症研究機構劃定為一類致癌物 [1]。據估算,全世界每年約有25%的穀物受到黴菌毒素影響 [2]。近20年的監測數據表明,乳品等動物源性食品中黃曲黴毒素的汙染率居高不下 [3]。隨著人們的 世界杯賽程預測意識不斷提高,黃曲黴毒素的檢測已經引起社會的廣泛關注和政府的高度重視,檢測方法將向簡便、快捷、靈敏度高的方向發展。黃曲黴毒素廣泛存在於黴變的玉米製品、花生製品、大米、堅果製品及乳製品等食品中,對人和動物均具有很強的致癌作用和毒性,是誘發肝癌的重要物質之一。為了解易受到黃曲黴毒素汙染的食品中黃曲黴毒素的汙染狀況,探討其對人體存在的潛在風險,本研究結合免疫親和樣品前處理技術及高效液相色譜法測定市售玉米製品、堅果製品中的黃曲黴毒素。
1 材料與方法
1.1 儀器設備
Agilent 1100液相色譜儀,熒光檢測器(G1321B FLD);電動振蕩器:IKA調速多用振蕩器(KS 501);漩渦振蕩器:IKA MS 3;固相萃取儀:SUPELCO。
1.2 材料和試劑
甲醇、三氟乙酸、正己烷、乙腈均為色譜純;黃曲黴毒素B1、B2、G1、G2混合標準品(1μg/mL,Sigma公司);黃曲黴毒素免疫親和柱(美國Beacon)。
1.3 色譜條件
色譜柱:4.6×250mm,5μm,C18;柱溫:30℃。
流動相:乙腈-水,梯度洗脫,梯度條件見表1;流速:1.0mL/min。
表1 梯度洗脫條件
時間/min 乙腈/(%) 水/(%)
0.00 15.0 85.0
6.00 17.0 83.0
8.00 35.0 65.0
14.00 25.0 75.0

熒光檢測器:激發波長:360nm;發射波長:440nm;進樣量:25μL。
1.4 樣品處理
1.4.1 樣品提取及淨化
將樣品打磨碎後準確稱取25.0g於250mL具塞錐形瓶中,加5.0g氯化鈉及甲醇-水(7+3)至125.0mL,用均質器高速攪拌提取2min。過濾後準確移取15.0mL濾液,並加入30.0mL水稀釋,用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,備用。移取15.0mL樣品提取液,按照免疫親和柱使用說明書,通過親和柱的淨化和濃縮。最後準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,收集洗脫液於試管中,供檢測使用。
1.4.2 樣品衍生
將試管中收集的洗脫液用氮氣吹幹(在60℃下),加入200μL正己烷和100μL三氟乙酸,密閉混勻30s後,在40±1℃烘箱中衍生15min。氮氣吹幹,準確加入200μL 85%乙腈,溶解,振蕩器上混勻,1000r/min離心15min,取上清液至自動進樣瓶中,供測定用。
1.5 工作曲線的製備
吸取適量的標準使用液,使其成一係列,60℃下氮氣吹幹,注意氮吹要溫和,衍生化方法同1.4.2。
1.6 樣品的測定
黃曲黴毒素出峰順序為:AFTG1、AFTB1、AFTG2、AFTB2,以每種黃曲黴毒素標準係列的濃度對峰麵積繪製標準曲線。試樣根據保留時間定性,根據峰麵積定量。
2 結果
2.1 黃曲黴毒素B1、B2、G1、G2標準譜圖
應用上述條件,分析了4種黃曲黴毒素混合標準品,黃曲黴毒素按照G1、B1、G2、B2的順序出峰,所得色譜圖如圖1所示。
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2.2 方法的檢出限
在本實驗條件下,取不同濃度的黃曲黴毒素混合標準溶液進行測定,以3倍信噪比計算目標物組分的檢出限量,B1、B2、G1、G2檢出限分別為:0.2、0.05、0.2、0.05μg/kg。
2.3 方法的準確度和精密度
在一份空白花生樣品中,分別加入0.05、0.10、0.25μg 3種濃度的B1、B2、G1、G2,各平行測定6次,進行準確度和精密度測定的實驗,結果見表2。其加標回收率在82.00%~94.47%之間,RSD在1.50%~6.45%之間。
2.4 堅果製品中黃曲黴毒素檢測結果
本項研究共采集並檢測了24份堅果製品,分別為開心果、杏仁、鬆仁等堅果類食品,所檢樣品均未檢出黃曲黴毒素B1、黃曲黴毒素B2、黃曲黴毒素G1、黃曲黴毒素G2。
2.5 玉米粉(碴)中黃曲黴毒素檢測結果
本項研究共采集並檢測了25份市售玉米製品,分別為幹玉米粒、玉米粉、玉米片,均無黴變現象,共檢出9份樣品含有黃曲黴毒素,陽性率36%,其中一份樣品超出國家允許限量標準。
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3 討論
結果顯示,玉米製品的黃曲黴毒素汙染情況較為普遍,36.0%的玉米製品受到黃曲黴毒素汙染,4種毒素中以AFTB1陽性率和濃度最高,AFTB2、AFTG1和AFTG2依次降低,每種毒素的陽性率比前一種降低20%左右,變化比較平穩。4種黃曲黴毒素中,AFTB1的陽性率和濃度都最高,是AFTS的主要組成成分。總體而言,AFTB2、AFTG1和AFTG2的汙染水平依次降低。
本研究顯示,目前市售食品中黃曲黴毒素汙染問題主要存在於玉米及其製品中,汙染程度雖不高,但由於黃曲黴毒素的強烈致癌作用,還是應該引起重視。糧食收獲後,要加強保管,嚴格控製黴菌生長條件,嚴格防黴。改善貯藏條件,抑製黴菌生長。為保障 世界杯賽程預測,政府部門在做好田間管理的同時,還應加強日常的監督檢查,使抽檢監測工作穩定化、常規化、連續化,指導百姓安全食用,讓人們食得放心,食得健康。
參考文獻:
[1] 勞文豔,林素珍.黃曲黴毒素對食品的汙染及危害[J].北京聯合大學學報,2011,25(1):64-69.
[2] 胡娜,許楊.組合實驗設計用於黃曲黴毒素汙染控製的研究[J].糧食儲藏,2006(3):39-42.
[3] 段文仲,呂紅英,龐津霞.動物源性食品中黃曲黴毒素汙染控製研究[J].現代農業科技,2009(7):206-208.
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