膠體金三線定量法,革新的黴菌毒素檢測方法
□ 卜慶婧 中檢柏泰生物技術(北京)有限公司
膠體金技術又稱側流向免疫層析技術,是以膠體金作為示蹤標記物應用於樣品中待測物檢測的一種免疫檢測技術,可用於樣品中待測物質的快速定性或定量檢測,是一種穩定、靈敏的檢測方法。該方法操作簡單,無需專業培訓,幾分鍾即可完成檢測,非常適用於現場快速檢測。目前,膠體金免疫層析技術在黴菌毒素檢測中的應用已經非常廣泛,但由於隻有一條檢測線和一條質控線,通常隻能進行定性檢測,無法準確定量。針對這一情況,美國Charm公司的科學家對定性黴菌毒素檢測條進行了改進,增加了一條檢測線,首創三線定量檢測條,即包括兩條檢測線和一條質控線,同時結合讀數儀,可實現準確定量。Charm Rosa黴菌毒素定量檢測係統采用的就是三線定量法。
圖1 嘔吐毒素流程圖
Charm Rosa黴菌毒素檢測
係統組成
Charm Rosa(Rapid One Step Assay)黴菌毒素檢測係統由檢測條、孵育器和讀數儀三部分組成。其中檢測條采用3線設計,包括2條檢測線(T線)和1條質控線(C線),這樣便於準確定量,並增加了動態檢測範圍,因此檢測範圍較其它膠體金檢測條更寬。另外,檢測條采用封閉包裝,即可防潮,又可防止檢測條因暴露在空氣中而被汙染,並且不同檢測項目的檢測條顏色不同,因此非常便於區分。孵育器為保溫裝置,能夠促進樣品流動並確保反應溫度在合適範圍內,該孵育器可自動倒計時,孵育結束後發出“嗶嗶”聲。讀數儀中有內置標準曲線,可讀取定量檢測結果。三線定量檢測條及讀數儀中內置的標準曲線矩陣是準確定量的保證。
Charm Rosa黴菌毒素檢測
係統的檢測原理
試樣提取液中的黴菌毒素與檢測條中的膠體金微粒發生反應,黴菌毒素與膠體金微粒的結合物及膠體金微粒在側流作用下移動,當到達檢測線時,包被的抗原與膠體金微粒結合發生呈色反應,其顏色深淺與試樣中黴菌毒素的含量相關。用讀數儀測定檢測條上檢測線和質控線顏色深淺,根據顏色深淺和讀數儀內置的標準曲線即可計算出試樣中黴菌毒素含量。
Charm Rosa黴菌毒素檢測
係統的優點
樣品處理簡單快速:以嘔吐毒素為例,準確稱取10.00g試樣於提取容器中,加入20.0mL蒸餾水或去離子水,密閉,振蕩提取1~2min,靜置後用濾紙過濾,或取1~1.5mL混合液於離心管中,離心1min。取濾液或離心後上清液100μL於另一離心管中,加入1.0mL稀釋緩衝液,充分混勻,待測。
圖2 charm黴菌毒素係統圖片
結果準確:2012年,國家糧食局標準質量中心組織多家省級糧食質量監測中心對4種Charm Rosa黴菌毒素(黃曲黴毒素B1、嘔吐毒素、玉米赤黴烯酮、赭曲黴毒素A)檢測條進行了測試。測試過程中分別采用ROSA測試條與高效液相色譜標準方法對9組陽性樣品進行檢測,采用配對T檢驗法比較兩種方法的檢測結果是否存在顯著性差異。經計算,4個項目的液相色譜參考值與ROSA測定值之間均無顯著差異。
以高效液相色譜法的測定結果作為認定值,將ROSA快速測試條的測定結果與之比較,按正確度(%)=檢測值/認定值×100%計算,黃曲黴毒素B1、嘔吐毒素、玉米赤黴烯酮、赭曲黴毒素A的平均準確度分別為99%、106%、117%和95%,均在糧油檢測行業標準規定的範圍內。
總結而言,Charm Rosa黴菌毒素檢測係統具有以下特點。首先前處理簡單,製備樣品過程所需時間短,檢測速度快,5分鍾即可完成對真菌毒素的定量測定,這也是其他手段無可比擬的,此係統是業內最齊全、最完整的黴菌毒素檢測項目之一。此外,本係統率先推出黴菌毒素水提取技術(WET),無需使用有機溶劑和黴菌毒素標準品,減少了實驗對工作人員健康的傷害。最重要的一點是此係統檢測結果與國標方法具有較高的一致性,為國家糧食局糧油檢測行業標準LS/T 6111-2015《糧油檢驗 糧食中黃曲黴毒素B1測定 膠體金快速定量法》、LS/T 6112-2015《糧油檢驗 糧食中玉米赤黴烯酮測定 膠體金快速定量法》、LS/T 6113-2015《糧油檢驗:糧食中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇測定:膠體金快速定量法》、LS/T 6114-2015《糧油檢驗 糧食中赭曲黴毒素A測定:膠體金快速定量法》中所采用的方法。該產品經過USDA-GIPSA(美國農業部-美國穀物檢驗、批發及畜牧場管理局)和FG IS(聯邦穀物檢測局)認證,可廣泛用於實驗室、糧倉、農產品收購站等各種場合真菌毒素的檢測。
Charm Rosa黴菌毒素5分鍾快速定量檢測係統小巧便攜。為了滿足現場快速檢測的需求,中檢柏泰生物技術(北京)有限公司還可提供黴菌毒素檢測整體箱,整體箱中包括從樣品製備到完成檢測所需的所有儀器設備,真正實現現場快速檢測。該係統在全球應用非常廣泛,被譽為全球四大糧倉的ADM、邦吉(Bunge)、嘉吉(Cargill)、路易達孚(Louis Dreyfus)均采用Charm Rosa黴菌毒素檢測係統進行黴菌毒素的檢測。在國內,該係統被廣泛應用於糧油收儲單位、檢測機構及糧油飼料生產企業,如中儲糧、糧油質量檢測中心、中糧、大北農、新希望六和等都是Charm Rosa黴菌毒素檢測係統的用戶。
Charm公司簡介
Charm公司成立於1978年,總部位於美國馬薩諸塞州,其創始人Stanley E. Charm博士是牛奶中抗生素快速檢測試劑的發明者,公司研發人員多畢業於麻省理工大學。公司自成立以來一直致力於 世界杯賽程預測、水質和環境快速檢測產品的開發,其產品包括黴菌毒素、獸藥殘留、農藥殘留、微生物、堿性磷酸酶、商業無菌等快速檢測產品,其中Charm Rosa/EZ抗生素殘留檢測係統、Charm Rosa黴菌毒素檢測係統、EPIC商業無菌檢測係統在國內外應用非常廣泛。
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