黃曲黴毒素B1（Aflatoxin B1，簡寫為AFB1）是二氫呋喃氧雜萘鄰酮的衍生物，含有一個雙呋喃環和一個氧雜萘鄰酮（香豆素），其劇毒且具有強致癌性，是迄今已發現的真菌毒素中最穩定的一種。從1993年開始，黃曲黴毒素被世界衛生組織（WHO）的癌症研究機構劃定為一類致癌物，是世界公認的三大強致癌物質之一。此外，黃曲黴毒素B1由於毒性最大，汙染最重，是黃曲黴毒素中危害最大的一種。
受黃曲黴毒素B1汙染的食物主要是花生、玉米、稻穀、小麥、花生油等糧油食品，且以南方高溫、高濕地區受汙染最為嚴重。目前，GB 2761-2011《 世界杯賽程預測國家標準 食品中真菌毒素限量》中對糧食穀物及其製品中黃曲黴毒素B1的最高限量為20μg/kg。GB 13078-2001《飼料衛生標準》中對不同種類的飼料中黃曲黴毒素B1的最高限量標準為10~50μg/kg。
目前，國標法測定黃曲黴毒素B1采用HPLC法，但是HPLC法需要使用大型的儀器設備，價格昂貴，操作過程複雜，時間較長，且無法在現場和基礎小型實驗室使用。除此之外，也有采取黃曲黴毒素酶聯免疫試劑盒或膠體金快速檢測試紙條用於大量樣品篩查的方法，此類方法操作簡便，檢測快速，成本也較低，但準確性和重複性較差，容易造成假陽性或假陰性。因此，市場上急需一種既簡便快速，又能準確定量的檢測方法，而熒光定量免疫層析正好可以滿足這種需求。本文通過對多種糧食穀物飼料樣品的實測，驗證了上海飛測生物科技有限公司（以下簡稱“上海飛測”）開發的黃曲黴毒素B1熒光定量快速檢測試紙條的技術性能。
實驗材料和方法
所需材料和設備
試劑除注明外，均為分析純；試驗用水均為UP水。
黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條（由被有熒光微球標記黃曲黴毒素B1抗體的乳膠墊、噴塗有黃曲黴毒素B1抗原的檢測線和噴塗有羊抗雞二抗的控製線的NC膜、樣品墊及吸收墊組成）、樣品提取液、樣品稀釋液、標準曲線ID卡及標準曲線條形碼，以上材料由上海飛測提供。
黃曲黴毒素B1及其他真菌毒素的標準品，購自Sigma公司。
大米、玉米、小麥、麵粉等樣品，從超市購得或從企業取樣。
麩皮，小麥、麵粉等飼料樣品，從飼料廠和企業取樣。
FD-100型熒光免疫定量分析儀和FD-5000型試紙條恒溫孵育器，上海飛測；低速離心機，上海盧湘儀離心機儀器有限公司；漩渦振蕩器，海門市其林貝爾儀器製造有限公司；電子天平：Sartorius。
試驗方法
樣品前處理：取具有代表性的待測樣品500g，用小型粉碎機粉碎1min後過20目篩，收集過篩的細小樣品。稱取1.0±0.02g過篩的樣品於10mL離心管中，加入5mL提取液，用漩渦混勻儀震蕩5min(或者搖床振蕩10min）後，4000RPM離心1min，取上清。
檢測過程：取50μL離心上清液加入500μL樣品稀釋液中，用漩渦混勻器混勻3~5s，然後取100μL加入到黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條的加樣孔中，置於37℃恒溫孵育器中溫育10min後，將試紙條插入熒光免疫定量分析儀中讀數，即為樣品的實際檢測濃度。當檢測值大於50μg/kg時，可用提取液將離心上清液稀釋5倍後再進行檢測，所得讀數值乘以對應的稀釋倍數即為最終的檢驗結果。
檢測結果分析
線性範圍與檢出限
在樣品提取液中，分別添加1.00μg/kg、2.50μg/kg、5.00μg/kg、10.00μg/kg、25.00μg/kg、50.00μg/kg的黃曲黴毒素B1標準品，用上海飛測生物黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條每個樣品檢測3次，以添加濃度為縱坐標，以熒光定量檢測試紙條的檢測結果為橫坐標，擬合曲線並計算線性相關係數。計算得出小麥的線性範圍：
1.00~50.00μg/kg（6點），回歸方程：y=1.042x+0.540,相關係數R ²=0.998（見圖1）。 取10個無汙染（陰性）小麥樣品、10個無汙染（陰性）玉米樣品和10個無汙染（陰性）大米樣品，用上海飛測生物黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條對每個樣品檢測3次，檢測限（LOD）為測定平均值加3倍標準偏差，定量限(LOQ)為測定平均值加10倍標準偏差。測試結果表明，黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條的LOD為0.29μg/kg，LOQ為0.91μg/kg。
準確性和重複性分析
在用國標法測定為0的不同種類空白樣品中分別添加黃曲黴毒素B1濃度為1.00，2.50，5.00，10.00，25.00，50.00μg/kg的標準品，然後按照黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條的檢測方法進行檢測。檢測結果見表1。 從表1可以看出，上海飛測所生產的黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條測試不同糧食穀物中黃曲黴毒素B1的添加回收率在92.89%~121.07%，3次重複的變異係數在14.56%以內。
與色譜方法的對比試驗結果
取大米、小麥、玉米、高粱、花生、麩皮、噴漿玉米、DDGS、豆粕受汙染樣品各1份，先采用國標液相色譜法進行測定，再使用上海飛測所生產的黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條進行測定，各測試3個平行樣。檢測結果見表2。 表2表明，在不同的糧食穀物飼料中，上海飛測所生產的黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條與液相色譜法的符合率為89.89%~112.65%，3次重複測定的的CV值在10.29%以內。
方法特異性
選擇其他5種常見的真菌毒素的標準品在陰性玉米中進行添加，添加的濃度為100μg/kg，然後用上海飛測的黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條進行測試，每個樣品測3次取平均值；結果顯示與赭曲黴毒素A，伏馬菌素B1，嘔吐毒素、T-2毒素、玉米赤黴烯酮交叉反應率均小於5%。實驗結果表明，黃曲黴毒素B1膠體金試劑條對伏馬毒素、赭曲黴毒素、黃曲黴毒素、玉米赤黴毒素幾乎無交叉反應，其方法特異性可以滿足檢測要求。檢測結果見表3。 結論
本實驗采用上海飛測所生產的黃曲黴毒素B1熒光定量檢測試紙條對不同的糧食穀物飼料樣本進行測試，該產品的最低檢出限（LOD）為0.29μg/kg，最低定量限(LOQ)為0.91μg/kg，線性範圍為1.00~50.00μg/kg，線性範圍內的添加回收率為92.89%~121.07%，3次重複的變異係數在14.56%以內。與其他真菌毒素的交叉反應率均小於5%。其準確性和可靠性均可以滿足歐盟和我國對黃曲黴毒素B1的分析標準的技術要求。該方法具有簡便快速、準確可靠、重複性好等特點，可用於不同糧食穀物飼料中黃曲黴毒素B1的快速定量檢測分析。