ELISA基本原理與常見類型

　　該檢測法的基本原理是將相關抗原或抗體提前結合到某種固相載體表麵，在檢測過程中，受檢樣品與酶標抗原或抗體會按照相應的程序與結合在固相載體上的相關抗原或抗體產生反應，生成新的抗原或抗體複合物。當反應結束後固相載體上酶標抗原或抗體被結合量(即免疫複合物)和標本中待檢抗體或抗原的量成一定比例。隨後將反應液中的其它物質清除後，加入相關酶反應底物，固相載體上的酶會直接將底物催化為有色產物。最後，通過對有色產物進行定性或定量分析即可確定待檢樣品中相關物質的含量。ELISA技術常見類型：(1)雙抗體夾心法：該檢測法適合檢測擁有多個抗原決定簇的抗原，但由於農藥分子通常為半抗原，即隻有一個抗原決定簇，因此，不適合農藥檢測。(2)簡接ELISA法：對抗體無嚴格要求，隻需改變包被抗原便能檢測相應的抗體。(3)競爭ELISA法：可檢測抗原，也可檢測抗體。待測抗原(抗體)與酶標抗原(抗體)通過與固定化抗體(抗原)間的競爭，獲得與檢測目的抗原(抗體)結合的機會。

　　ELISA法在食品農藥殘留檢測中的應用

　　目前，有機磷農藥是我國農業生產中最常用的農藥，常見類型包括甲胺磷、敵敵畏、氧樂果、對硫磷、敵百蟲等。大部分為高毒類農藥，通過降低生物體內膽堿酯酶活性，引起遲發性神經毒性，從而達到消滅害蟲的目的。農藥殘留在人體內蓄積後可造成慢性中毒，具體表現為神經功能紊亂、精神錯亂等。王華等研製出競爭酶聯免疫檢測試劑盒，可用於檢測果蔬中含有的甲胺磷含量，最低檢測限為0.01g/ml，線性檢測範圍在0.01～100g/ml[2]。該試劑盒具有非常高的特異性，且回收率至少在93%以上，在4℃條件下可保存半年以上。

　　這是一種仿生殺蟲劑，模擬天然除蟲菊素結構達到殺蟲的目的。這類農藥的用量僅次於有機磷農藥。若長期食用含有擬除蟲菊酯類農藥的食物容易引起慢性中毒。通過碳二亞胺法把相關半抗原與牛血清偶聯製成免疫原，形成聯苯菊酯的競爭間接酶聯免疫檢測法。在合適的條件下，此法的檢出限值可降到(0.016±0.002)mg/L，並和其它菊酯類農藥不會發生交叉反應。此類農藥對人體的危害與有機磷農藥比較相似。吳慧明等開發了一種直接ELISA試劑盒，可用於檢測土壤中殘留的克百威含量，其最低檢測限位0.01mg/L，線性檢測分為在0.01～10mg/L之間[3]。另外，現已研製出定量定性檢測速滅威的間接競爭ELISA法，對此種農藥的檢出限在0.08～0.10g/ml之間，檢測線性範圍在1～10000g/L。

　　蘇丹紅是一種工業染色劑，成本低，被非法用作食品添加劑，常見於辣椒粉與鹹鴨蛋中。這給公眾造成了極大的恐慌。目前，已研製出基於單克隆抗體的間接競爭性酶聯免疫吸附法，對蘇丹紅有非常高的靈敏度，操作簡單，適合大批量檢測，成本低。鹽酸克倫特羅(即“瘦肉精”)曾被廣泛用於畜牧養殖業，以提高瘦肉率。目前，通過競爭酶聯免疫法能快速檢測出豬尿、豬肝內的“瘦肉精”殘餘量，可重複使用，成本低廉。

　　關於ELISA的研究盡管隻有短短的幾十年，但在農藥殘留分析方麵的成果已非常顯著。不僅形成了對多種農藥的ELISA檢測技術，並且還研製出用於不同農藥檢測的ELISA試劑盒。這些試劑盒具有操作方便、快捷、準確、靈敏等優點，常用於現場食品檢測。與其它檢測法相比，ELISA技術擁有很多優勢，但仍存在一些不足，比如，對試劑選擇性較高，無法同時分析多種成分，對結構相似的化合物可能出現交叉反應。