北京萊伯泰科儀器股份有限公司/康銳

前言：
黃曲黴毒素對人和動物健康具有極大的危害，其中以黃曲黴毒素B1毒性最大，屬特劇毒的 毒物範圍。引起人的中毒主要是損害肝髒，發生肝炎肝硬化，肝壞死等，急性中毒嚴重者會出現水腫昏迷，以至抽搐而死。黃曲黴毒素是目前發現的最強的致癌物質，主要誘使動物發生肝癌，也能誘發胃癌、腎癌、直腸癌及乳腺、卵巢、小腸等部位的癌症。
本文建立了SepLine-S4全自動固相萃取儀測定食用油中的黃曲黴毒素B1的方法。係統的密閉性及溶劑回收功能，可保護操作人員免受有毒有害物質的危害。同時降低了實驗室工作量，提高了工作效率，保證結果的平行性和準確性，具有較高的回收率。

1. 實驗部分：

1.1儀器與試劑
SepLine-S4 全自動固相萃取儀（萊伯泰科有限公司，美國）；
ACQUITY UPLC 超高效液相色譜儀，配備熒光(FLR)檢測器 （沃特世，美國）；
黃曲黴毒素B1標準溶液，濃度2.0μg/ml，溶於苯-乙腈（98:2）溶液；
甲醇（色譜純），超純水；
Aflatoxin B1 Columns (1ml) 免疫親和柱（Beacon，美國）。
1.2標準物質的處理
1.2.1標準儲備液：移取1.5ml黃曲黴毒素B1標準溶液，用甲醇定容在10ml容量瓶中，配置成300ng/ml的標準儲備液，於4℃冰箱中避光保存。
1.2.2標準使用液：移取標準儲備液0.2ml，用甲醇-水（1:1）溶液定容在10mL容量瓶中，配置成6ng/ml的標準使用液，現配現用。


1.3 樣品的處理
1.3.1樣品的提取
選取市售的菜籽油，香油各一份。另有已知含黃曲黴毒素B1的花生油一份（含量已知）。
稱取5g食用油於50ml離心管中，加入25ml甲醇-水（7:3）溶液，渦旋震蕩約1min，待震蕩均勻後超聲提取10min。將提取液通過濾紙過濾，吸取5ml濾液至SepLine進樣瓶，再加入10ml的水，混合均勻等待淨化上樣。
1.3.2加標樣品的提取
同樣稱取1.3.1中選用的菜籽油及香油5g，向離心管中加入1ml黃曲黴毒素B1的標準使用液(加標標準為1.2ng/g)，之後的提取過程與1.3.1完全一致。
1.3.3樣品的淨化
將Aflatoxin B1免疫親和柱的兩端蓋子去掉，傾倒出裏麵的保護液，放入SepLine萃取柱架中。注意隨用隨放，不可提前倒掉保護液使柱子幹掉。
固相萃取方法編輯如下：

步驟	溶劑	體積(ml）	流速(ml/min)	幹燥時間(sec)	是否收集
上樣	Sample	12.0	1.0	0.0	N
淋洗	甲醇-水（3:7）	2.0	1.0	0.0	N
淋洗	水	10.0	1.0	30.0	N
洗脫	甲醇	1.0	1.0	10.0	Y
洗脫	水	1.0	1.0	60.0	Y

經SepLine固相萃取儀淨化後的樣品，再經過濾膜過濾，待檢測。
1.4 UPLC檢測條件
色譜柱：C18 (250mm×4.6mm,5μm)；
柱溫：35℃；
流動相：甲醇-水（1:1）
流速：0.5ml/min；
FLR檢測器激發波長：360nm；發射波長：440nm；
進樣量：5μL。

2. 結果與討論

2.1 黃曲黴毒素B1標準使用液（6ng/ml）的液相色譜圖

2.2菜籽油樣品色譜圖
2.3菜籽油加標樣品色譜圖

2.4香油樣品色譜圖

2.5香油加標樣品色譜圖

206已知黃曲黴毒素B1含量的花生油樣品色譜圖


2.7計算菜籽油和香油樣品的加標回收率及相對偏差，回收率均在86.88%～102.08%之間，RSD均在5%以下，具體見下表：

樣品	黃曲黴毒素B1的加標回收率（%）				標準偏差
	一	二	三	平均
菜籽油	97.91	102.08	95.21	98.40	3.52%
香油	95.00	86.88	90.21	90.70	4.50%

已知黃曲黴毒素B1含量的花生油檢測結果為：

樣品	黃曲黴毒素B1的濃度（ng/g）				已知含量(ng/g)	偏差
	一	二	三	平均
花生油	22.74	23.17	22.82	22.91	23.00	0.39%

結論：
本方法采用SepLine全自動固相萃取儀，利用Aflatoxin B1免疫親和柱對菜籽油、香油及花生油進行提取淨化，采用配備熒光檢測器的UPLC檢測黃曲黴毒素B1，平均回收率達到90%以上，RSD均小於5%。實驗過程自動化程度高，平行性好，結果數據理想，且能最大限度的保護操作人員免受有毒有害物質的危害，能夠完全滿足食用油中黃曲黴毒素的檢測要求。

參考文獻：

1. GB/T 18979-2003 食品中黃曲黴毒素的測定 免疫親和層析淨化高效液相色譜法和熒光光度法
2. GB 5009.24-2010世界杯賽程預測國家標準 食品中黃曲黴毒素M1和B1的測定
3. GB/T 5009.23-2006 食品中黃曲黴毒素B1、B2、G1、G2的測定