摘 要：本研究采用分光光度法，以蘆丁為對照品，乙醇回流提取平臥菊三七莖中總黃酮。通過對提取溫度、提取時間、乙醇濃度和料液比進行單因素及正交試驗。結果表明，最佳提取工藝條件：提取時間3h、料液比1g：30mL、溫度80℃、乙醇濃度90%，此時黃酮得率為4.243%。

　　關鍵詞：平臥菊三七 莖 黃酮 提取 得率

　　平臥菊三七(Gynura procumbens (Lour.) Merr)為菊科三七屬植物，別名蛇接骨、樹三七、石三七等。是一種攀援草本，莖匍匐，呈淡褐色或紫色，且有條棱。我國的平臥菊三七多產於廣東、海南、貴州、雲南[1]，近年來，江西省也開始大麵積種植。平臥菊三七是一種藥食兩用的植物，也是十分具有開發潛力的食品和保健品新資源。平臥菊三七有諸多生理活性，如抗氧化、抑菌、降低三高等[2-6]，被認為“全身都是寶”，其根和莖更是中成藥上佳的原材料。研究表明，其莖枝的活性成分主要有：黃酮類、三萜苷元類、甾醇類化合物以及香草醛、丁香醛、對羥基苯甲酸、對羥基桂皮酸、原兒茶酸等酚酸類化合物[7]。但是，對於其莖中活性物質的提取還未曾見報道。因此，為提高其綜合利用價值，本研究以平臥菊三七的嫩莖為材料，采用單因素和正交試驗對其中總黃酮的提取工藝進行了研究及優化，以期為平臥菊三七的綜合利用及產品的開發提供參考依據。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料與試劑

　　平臥菊三七嫩莖，產自江西省。采摘時其嫩度以人的指甲能夠掐斷為宜，采後去掉葉片及其他雜物，經曬幹粉碎後，冷藏待用;蘆丁標準品，購自天津市福晨化學試劑廠;其餘試劑均為分析純。

　　1.2 主要試驗儀器

　　UV-2100型可見光分光分度計，尤尼柯(上海)儀器有限公司;Adventurer AR2140電子天平，OHAUS CORP USA;HH-4數顯恒溫水浴鍋，國華電器有限公司。

　　1.3 試驗方法

　　1.3.1 平臥菊三七莖的預處理

　　將待用的平臥菊三七莖粉過40目篩後，再用石油醚脫色脫脂3h，然後放入通風櫥中風幹至恒重，得到樣品。

　　1.3.2 平臥菊三七莖中總黃酮提取工藝流程

　　平臥菊三七莖→預處理→乙醇溶液加熱回流提取→過濾→定容→測吸光度→計算黃酮得率。

　　1.3.3 蘆丁標準曲線的製作[8]

　　精密稱取於120°C幹燥至恒重的蘆丁標準品10mg，加80%乙醇溶解，定容至25mL容量瓶中，搖勻。準確吸取標準品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL，各加入幹燥的10mL容

　　量瓶中，加5%的NaNO2溶液0.3mL，放置6min後，加10%的Al(No3)3溶液0.3mL，放置6min再加4%的NaOH溶液4mL，加水至刻度，搖勻，放置15min，分別在510nm處測定其吸光度。以溶液濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪製標準曲線(見圖1)，並確定回歸方程：y=0.0089x-0.0001,R2=0.9922。

　　1.3.4 平臥菊三七莖中總黃酮提取方法設計[9]

　　以乙醇溶液為溶劑，采用加熱回流提取法，根據試驗條件按照一定的提取時間、提取溫度、料液比、乙醇濃度進行單因素試驗，並在單因素試驗的基礎上進行L9(34)正交試驗以優化。通過比色法檢測平臥菊三七莖中總黃酮的含量。

　　1.3.5 提取液黃酮濃度的測定和黃酮得率的計算

　　準確稱取10g平臥菊三七莖粉末置於回流燒瓶中，加入適當體積分數的乙醇溶液適量，置於水浴鍋中，在一定溫度下回流提取一定時間，過濾後準確吸取濾液1mL，置於10mL容量瓶中，之後按照標準曲線的操作方法進行，測定吸光度後確定總黃酮濃度，進而計算出提取液中總黃酮的質量。並按下式計算黃酮得率：

　　1.3.6 驗證試驗

　　為確定最佳提取條件的重複性及穩定性，在最佳條件下重複3次提取試驗，並計算總黃酮得率。

　　2 結果與分析

　　2.1 平臥菊三七莖中黃酮提取的

　　單因素試驗結果

　　2.1.1 乙醇濃度對黃酮得率的影響

　　由圖2可知，當乙醇濃度在50%～90%的範圍內，隨著乙醇濃度的遞增，有利於黃酮類物質的的溶出;當乙醇濃度達到90%時，黃酮得率達到最高水平;隨後乙醇濃度繼續升高，黃酮得率反而略有下降，這可能是由於物料中的其他醇溶性物質也溶出，這些成分與黃酮類物質有競爭作用，導致黃酮得率下降[10]。因此，總黃酮提取的最佳乙醇濃度為90%。

　　2.1.2 料液比對黃酮得率的影響

　　如圖3所示，料液比在1∶20～1∶30之間時，隨著料液比的增大，黃酮得率是增加的;料液比為1∶30時，黃酮總得率達到最高，以後溶劑量再增大，黃酮得率並未未繼續增加，故1∶30為最佳的料液比。

　　2.1.3 提取時間對黃酮得率的影響

　　由圖4可以看出，在1～3h內，隨著提取時間的延長，黃酮得率逐漸增加;當提取時間為3h時，得率達到最高。若繼續延長提取時間，得率反而下降，故選擇3h為最佳提取時間。

　　2.1.4 提取溫度對黃酮得率的影響

　　圖5表明，在80℃之前時，隨著溫度的升高，黃酮得率逐漸增大，80℃時黃酮的得率達到最高。此後，隨著溫度的繼續升高，得率下降，可能因為黃酮類物質在高溫下被氧化破壞，影響了浸提效果。故最佳的提取溫度為80℃。

　　2.2 平臥菊三七莖中黃酮提取的正交試驗結果

　　綜合考慮多因素相互作用對平臥菊三七莖中總黃酮提取得率的影響，並根據單因素試驗結果，采用L9(34)正交設計對其莖中總黃酮提取條件進行優化，試驗結果見表1。方差分析結果見表2。

　　由表1可知，極差RC>RA>RB>RD，即表明對平臥菊三七莖中黃酮的提取得率的影響大小順序依次是提取時間、乙醇濃度、料液比、提取溫度。在正交實驗中得到的最佳提取條件為A2B2C2D2，即提取時間為3h、料液比為1∶30、溫度為80℃、乙醇濃度為90%。黃酮平均得率為4.245%。

　　由表2可知：乙醇濃度、料液比、提取時間這三者對平臥菊三七莖中黃酮提取的得率影響極顯著，而提取溫度對其影響顯著。

　　按照正交表中A2、B2、C2、D2的條件進行了驗證試驗，共做了3個平行，得到總黃酮得率的均值為4.243%，與之前的試驗結果吻合良好，說明該工藝條件較為可靠，並具有穩定的再現性。

　　3 結論

　　以平臥菊三七的嫩莖脫脂幹燥粉為試驗材料，用乙醇回流加熱提取法進行提取，通過4個單因素及L9(34)正交試驗，得到總黃酮提取的最優工藝條件。從極差分析和方差分析來看，對平臥菊三七莖中總黃酮提取得率的影響主次順序依次為提取時間、乙醇濃度、料液比、提取溫度。最優提取條件為：乙醇濃度90%，料液比為1g：30mL、提取溫度為80℃、提取時間3h。在此條件下，平臥菊三七莖中總黃酮的平均得率約為4.243%。

　　參考文獻

　　[1] 宇楓.雲南中草藥選[M].福州：福建科學技術出版社，2008：133-134.

　　[2] 鄭國棟，帥麗喬娃，黎冬明，等.平臥菊三七提取及抗菌作用的研究[J].食品科技，2014，39(4)：218-221.

　　[3] 閔伶俐，唐源江.菊三七屬植物研究進展[J].中藥材，2004,8(1)：28～29.

　　[4] Akowuah G A,Chin J H.The effect of extraction temperature on total phenols and antioxidant activity of Gynura procumbens leaf[J].Pharmacognosy Magazine，2009,5 (17)：81-85.

　　[5] 鄭國棟，鍾樹生，張慶峰，等.平臥菊三七對小鼠血糖及血脂的影響[J].現代食品科技，2013，29(12)：2800-2804.

　　[6] Kim M J,Lee H J,Wiryowidagdo S,et al.Antihypertensive effects of GYnura procumbens extract in spontaneously hypertensive rats[J].Journal of Medicinal Food，2006，9(4)：587-590.

　　[7] 韓華，閆雪瑩，匡海學，等.接骨木的研究進展[J].中醫藥信息，2008，25(6)：14-16.

　　[8] 鄭國棟，林樂珍，黎冬明.微波輔助提取平臥菊三七中總黃酮的工藝研究[J].江蘇農業科學，2015，43(8)：279～281.

　　[9] 王欽德，楊堅.食品試驗設計與統計分析[M].北京：中國農業大學出版社.2003:102-148;330-336.

　　[10] 查甫本，陳向明.山核桃外果皮黃酮提取條件的研究[J].合肥學院學報，2009，19(3)：68-72.