摘 要：本文對濕米粉中菌落總數不確定度進行評定，確定每批樣品中菌落總數的置信區間。對20份不同批次濕米粉的檢驗數據利用貝塞爾公式計算合並樣本標準差的方法，采用A類不確定度評定。本研究的擴展不確定度為0.0520(以對數計)，此方法適合於菌落總數檢驗結果的評定。本研究建立的方法可以對濕米粉的菌落總數進行不確定度評定，也適合各大類食品樣品檢驗中菌落總數的不確定度評定。

　　關鍵詞：濕米粉 菌落總數 不確定度

　　測量不確定度的定義是表征合理地賦予被測量之值分散性，與測量結果相聯係的參數[1]。GB/T 27025-2008《檢測和校準實驗室能力的通用要求》[2]中明確規定：檢測實驗室應具有並應用評定測量不確定度的程序。某些情況下，檢測方法的性質會妨礙對測量不確定度進行嚴密的計量學和統計學上的有效計算。這種情況下，實驗室至少應努力找出不確定度的所有分量且作出合理評定，並確保結果的報告方式不會對不確定度造成錯覺。因此，不確定度評定應該是實驗室質量管理體係的重要組成部分，在常規的實驗室工作中應包含對檢測結果的不確定度評定。但目前不確定度評定大多在理化實驗室中開展，微生物檢驗中不確定度評定雖然有一些報導，但在實驗室工作中實際應用並不多。基於食品抽樣中基本按大類抽樣來進行評價，如熟肉製品、非發酵性豆製品、現榨果汁、濕米粉等等，且實驗中一般都是每份樣品進行兩次平行測定，現按照GB4789.2-2010[3]對濕米粉中菌落總數測定結果的不確定度進行評定，並確定樣品中菌落總數的置信區間，為其它大類食品檢測結果的不確定度評定提供參考。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料與儀器

　　平板計數瓊脂(北京陸橋技術有限責任公司)，樣品來源於市場上監督抽樣。生化培養箱(SPX-150型，揚州惠科電子有限公司，控溫範圍：0℃～60℃)、立式壓力蒸汽滅菌器(LMQ.C/3260J，山東新華醫療器械股份有限公司)。

　　1.2 檢驗方法[3]

　　稱取25g樣品置盛有225mL生理鹽水的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1～2min，製成1∶10的樣品勻液。用1mL無菌吸管吸取1∶10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注於盛有9mL稀釋液的無菌試管中，振搖試管或換用1支無菌吸管反複吹打使其混合均勻，製成1∶100的樣品勻液。同法操作，製備10倍係列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管或吸頭。根據對樣品汙染狀況的估計，選擇2～3個適宜稀釋度的樣品勻液，在進行10倍遞增稀釋時，吸取1mL樣品勻液於無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。及時將15～20mL冷卻至46℃的平板計數瓊脂培養基傾注平皿，並轉動平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固後，將平板翻轉，

　　36℃±1℃培養48h±2h。結果可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。

　　2 結果

　　2.1 濕米粉菌落總數檢測結果

　　隨機抽取本科室檢測的20份不同批次的濕米粉數據，每份樣品做兩個平行，得到每個樣品的菌落總數，采用合並樣本標準差進行計算。檢驗結果和計算過程見表1。

　　2.2 不確定度來源及分析

　　測量不確定度一般由若幹分量組成，其中一些分量可根據一係列測量值的統計分布為A類不確定度評定;另一些分量基於經驗或其他信息獲得的概率密度函數，為B類不確定度評定[1]。同一種化學物質有均一性，但不同的微生物在一起培養過程中表現不一定相同，明顯顯現出不均一性。尤其是不同微生物之間有互生、拮抗等相互作用，即一方給另一方提供生長因子，或相互提供生長因子，或一方產生抑菌物質抑製另一方[4]。因此，按化學物質檢測建立數學模型去找出產生不確定度的分量是不現實的。但也遵循一定的原則，在菌落總數檢驗過程中，樣品的稱量、加稀釋液、混勻、遞增稀釋、培養溫度、時間、菌落計數等都會引入誤差，產生不確定度。但由於微生物的特殊性，在實驗中，往往是平行操作的不同平皿，計數結果也會有很大差異，因此，本實驗僅考慮由測量結果散發引入的不確定度分量，采用A類不確定度評定。

　　2.3 不確定度的評定

　　微生物菌落總數的測定與一般化學成分測定不同，當菌落總數達到3個稀釋度時，同一樣品平行操作的結果會有數千甚至數萬的差異(見表1)，稀釋度越高，差異越大。因此，直接對檢驗結果取對數後，再計算出其標準不確定度。根據貝塞爾公式，可以得到檢驗結果對數值的合並樣本標準差：

　　s(lgxk)：第k個樣品標準差平方。

　　m：樣品數量;

　　n：樣品重複檢驗次數。

　　因樣品為平行檢驗所以標準不確定度為：

　　2.4 擴展不確定度計算

　　取置信概率為95%，根據自由度，查t分布表，得到k=2.09，則U=k×u(lgxk)=2.09×0.02488=0.0520。

　　即置信概率為95%時，其測量結果取值區間分布於lgxi±0.05200之間,這個取值區間適合於這20個樣品中任何一個樣品的測量。以第1個樣品為例，樣品菌落總數為5.4444±0.0520，分布於5.4964～5.3924範圍內，取反對數後，菌落總數結果分布於310000cfu/g～250000cfu/g之間，同樣可計算出其餘樣品菌落總數的置信區間(見表1)。

　　3 小結

　　3.1 本文分析了濕米粉中菌落總數檢驗的不確定度評定方法與結果。由於菌落總數檢驗結果的散發性較大，直接計算合並樣本標準差不適合，將檢驗結果取對數後，用貝塞爾公式計算合並樣本標準差，再求不確定度更方便，並且適合於每個樣本。同樣，利用同類樣品的日常檢驗數據，用合並樣本標準差求檢驗結果的不確定度，從而得出菌落總數的置信區間，再對樣品的檢驗結果進行判斷。

　　3.2 不確定度計算是一個紛繁複雜的過程，步驟繁瑣，容易出錯，可利用Excel的編程和計算功能，建立通用的適合實驗室測量不確定度計算模型，並隨著樣品批次的不斷增加，其檢驗結果可隨時加入到合並樣本中，即將日常檢驗數據動態填入便可得到測量不確定度，這樣必能大大減少工作量，提高工作效率。

　　參考文獻

　　[1] 國家質量監督檢驗檢疫總局JJF1059.1-2012測量不確定度的評定與表示[s].北京：中國質檢出版社，2013.

　　[2] 中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局中國國家標準化管理委員會GB/T 27025-2008檢測和校準實驗室能力的通用要求[s].北京：中國標準出版社，2008.

　　[3] 中華人民共和國衛生部.GB 4789.2-2010世界杯賽程預測國家標準食品微生物學檢驗菌落總數[s].北京：中國標準出版社，2010.

　　[4] 李誌明.影響菌落總數測定結果的特殊因素[J].中國衛生檢驗雜誌，2008，18(2)：371-384.