□ 申海鵬 本刊記者

　　本著“良心事業，潤澤民生”的宗旨和“以技術為引領，以人才為依托，專注世界杯賽程預測，打造健康生活”的理念，北京良潤生物科技有限公司(以下簡稱“良潤生物”)一直致力於提升微生物快速檢測技術，研發多種優質產品。近日，良潤生物推出了檢測金黃色葡萄球菌腸毒素(簡稱“金葡腸毒素”)的新品——MicroFast®金葡腸毒素快速檢測卡，—款能夠檢測出5種腸毒素SEA/SEB/SEC/SED/SEE的國際領先產品，新產品的檢測原理是怎樣的?與傳統方法相比有哪些優勢?帶著眾多疑問，本刊記者采訪了北京良潤生物科技有限公司總經理劉磊先生。

　　記者：金葡腸毒素引起的食物中毒是一個世界性難題，能否介紹下該毒素的危害有哪些?主要存在於哪些食品中?

　　劉磊：金葡腸毒素是金黃色葡萄球菌分泌的一種具有超抗原活性的細菌毒素，易溶於水和鹽溶液，對熱很穩定，在100℃條件下煮沸30min仍具有致病性，而且能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用。依據腸毒素抗原性和等電點的不同，至今為止已發現金葡菌可產生A、B、C、D、E、F等多種腸毒素，其中以A型毒力最強，也最為常見約占75%，攝入1μg即能引起中毒。食物在受到金黃色葡萄球菌汙染，並且菌落總數在達到一定數量之後，在20～30℃條件下經2～4小時的繁殖就有可能產生金葡腸毒素，進食帶有此毒素的食物1～5小時後，會出現急性胃腸炎的症狀，其表現為惡心、嘔吐和腹瀉等，對於小孩、孕婦等體質相對比較弱的人群症狀比較明顯。雖然金黃色葡萄球菌在100℃下加熱30min會被殺死，但金葡腸毒素卻不會，它非常穩定，有時可能金黃色葡萄球菌沒有了但其腸毒素依然存在。金黃色葡萄球菌腸毒素的產生需要滿足兩個條件，首先隻有高蛋白食物才會容易產生;其次，金黃色葡萄球菌達到一定的數量一般為103以上才可能產生毒素。所以像奶及奶製品、肉及肉製品中都容易產生金黃色葡萄球菌腸毒素。

　　記者：傳統檢測金葡腸毒素的方法有哪些?

　　劉磊：在食品衛生檢驗工作中，有多種檢測金葡腸毒素的方法，最經典是動物學試驗，一般是對幼貓或幼猴腹腔注射或喂食肉湯培養物或嘔吐物，然後觀察其可能出現的異常生理和形態變化，一般在4h內發生嘔吐、腹瀉和體溫升高或死亡等現象，就表示有金葡腸毒素存在。該方法使用較早但容易出現假陽性現象，因此受到極大限製。免疫法也是較為常見的手段，如國外的酶聯免疫試劑盒、96孔板等，但是這些方法的樣品前處理過程比較繁瑣，消耗時間長，整個檢測過程就需要1.5小時以上的時間才能完成，極大地影響了時效性。

　　記者：據了解，貴公司最近針對金葡萄腸毒素的檢測研發出了一種快檢產品——Microfast®金葡腸毒素快速檢測卡，該檢測卡的原理是什麼?與傳統方法相比有哪些優勢?

　　劉磊：Microfast®金葡腸毒素快速檢測卡應用“雙抗體夾心法”的原理，納米金顆粒作為標記指示物，將一種抗體固定到NC膜上T線處，另外一種抗體標記了納米金顆粒。樣品中若有金葡腸毒素，就會與納米金顆粒標記的特異性單克隆抗體結合，並且同預包被於NC膜T線上的抗體結合，如此一來，就會形成一個“三明治”結構的結合，檢測卡顯示明顯的紅線，證明其結果為陽性;樣品中若沒有金葡腸毒素，金顆粒則不會聚集，檢測卡也不會出現紅線。通過肉眼直接觀察T線處是否變紅，便可判斷樣品中是否含有金黃色葡萄球菌，其檢測靈敏度低至1ppb。

　　酶聯免疫試劑盒與此原理相同，隻是將膠體金換成酶，酶可以催化“三明治”結構的底物顯色。而酶聯免疫法要經過加樣品、洗脫、加酶、再次洗脫、顯色等程序，因此操作步驟更多。相比而言，快速檢測卡操作簡單，耗時短，基本上是一步操作即可，所有的實驗在保證結果的情況下，步驟越少，效率越高。

　　國標規定某些食品中的致病菌不得檢出或限量檢出，但此限量值非常低。以沙門氏菌為例，假設其在某類食品中限量值為0.04cfu/g，但檢測方法靈敏度一般是103～104cfu/g，也就是說，當菌落數達到103～104cfu/g該檢測方法才能夠檢出，並得到比較穩定的結果。限量值與檢測方法產生了矛盾，二者有100萬的差距，此時就要對目標菌通過增菌的方法來彌補靈敏度的不足，讓如此少的菌數擴增變多之後，再進行檢測，這種方法可以間接地判斷細菌危害。相較細菌檢測而言，檢測細菌毒素則更為快速直接，毒素是細菌危害中較為嚴重的一種，很多群體性的世界杯賽程預測事件都由細菌毒素所引起。如某地方發生食物中毒，檢測部門可以帶著某毒素快速檢測卡到達現場，通過采集嘔吐物後使用檢測卡檢測的方式來判斷中毒事件是否由這類細菌所引起。而Microfast®金葡腸毒素快速檢測卡適用於產品原材料部門、產品監控部門、疾控部門等。

　　總體而言，Microfast®金葡腸毒素快速檢測卡的優勢有6點，一是時間短，使用方便快速，便於基層使用和現場使用，所有反應能在15分鍾內完成;二是成本相對比較低，不需要特殊的儀器設備;三是該方法應用範圍廣，可適應多種檢測條件;四是該方法準確，假陽性率低;五是該方法標記物穩定，標記樣品在4℃貯存1年以上，無信號衰減現象;六是該方法膠體金本身為紅色，不需要加入發色試劑，省卻了酶標的致癌性底物及終止液的步驟，對人體無毒害。

　　記者：MicroFast®金葡腸毒素快速檢測卡的準確性是如何保證的?

　　劉磊：首先，是對標準物質進行檢測，我們有非常多的金黃色葡萄球菌菌珠，並對它們進行產毒培養，然後進行相應的鑒定，從菌種裏篩選出可以產生腸毒素的菌株，再通過我們的檢測卡測試，也檢測出了產生腸毒素的菌株，與鑒定結果是一致的。其次，我們跟國外同類作用的檢測盒進行了對比，以保證準確性。另外，我們也和國乳中心進行積極的溝通，讓他們對我們的產品進行更係統詳細地評定。

　　記者：近期成立的中國食源性微生物檢測技術創新戰略聯盟中，貴公司成為第一屆理事會成員單位，您能否介紹下該聯盟成立的目的是什麼嗎?

　　劉磊：該戰略聯盟由軍事醫學科學院微生物流行病研究所研究員楊瑞馥教授擔任理事長，國家世界杯賽程預測 風險評估中心研究員劉秀梅教授擔任名譽理事長，連同檢測行業資深專家創辦的一個相對鬆散的學術性質組織，其宗旨是推動國內對微生物和檢測的重視。聯盟會對相關企業或用戶做一些微生物檢測方麵的培訓，給他們解釋一些在微生物檢測中較常見的關鍵問題。另外，國內微生物檢測尤其是快檢領域目前實力依然較為薄弱，該組織定期有成員之間的交流活動，並且很多資深專家也會對聯盟之內的企業進行技術性的指導，促進國內企業快檢領域的發展。

　　記者：目前貴公司有哪些用於微生物檢測的產品?可以檢測哪些項目?

　　劉磊：良潤生物專注於食品中微生物快速檢測的研究，目前有4個產品係列，第一個是致病菌快速增菌培養基，目的是讓致病菌快速生長，縮短增菌時間，可大大縮短整個檢測過程的時間。以沙門氏菌為例，目前我們在24小時內就可以得到陰性/陽性結果，比其他方法至少要縮短一天。第二是致病菌快速檢測卡，就是用免疫的方法來檢測致病菌。第三是微生物測試片，細菌在生長代謝的過程中，有一些酶參與，這些酶有可能是共性的也有可能是特異性的，對於共性酶，則檢測含有這些酶的菌落總數，對於特異性酶，隻有一類細菌含有此酶，通過檢測該酶的存在即可判斷是否有該類細菌。第四個產品係列是細菌毒素係列，金葡腸毒素產品是該係列的第一個產品。良潤生物產品係列為數不多，但我們專注於把每個產品做精做細，並通過持續地不斷地改進，使每一個產品都有其獨特的價值。