轉基因食品的檢測方法
外源蛋白質檢測法快速且具有一定的靈敏度,也能進行半定量,尤其是試紙條法,不需要特殊的儀器設備,適用於現場檢驗或初篩。但外源蛋白質檢測法有三方麵的局限性:(1)由於抗原抗體反應的專一性,每種轉基因產品都要開發和建立專門的檢測試劑和方法,而轉基因產品種類繁多,要建立所有轉基因產品的蛋白質檢測法工作量很大;(2)對於加工過的轉基因食品,其蛋白質很容易被破壞,從而影響檢測結果的準確行;(3)有些插入基因還具有表達部位特異性,這些金銀的表達並不像DNA那樣存在轉基因作物的任何部位,甚至有的轉基因產品的插入基因根本不表達或表達量很低。這些都會影響檢測結果。
外源DNA的檢測
目前對於外源基因的檢測主要是通過對轉入的外源基因進行PCR擴增,然後進行紫外或熒光檢測。PCR技術全稱“聚合酶鏈反應技術”,是一種在體外由引物引導的DNA聚合酶催化的聚合反應,能在短時間內準確地將目的序列大量複製。在轉基因食品檢測方麵,主要是用於從DNA即基因水平來鑒定被測食品。由於它的快速、靈敏、費用低、檢測僅需微量的DNA並且可以同時檢測多個樣品,正成為這一領域日趨成熟的方法之一。定性PCR轉基因食品重組DNA的基本機構包括啟動子、目的基因、終止子和標記基因。由於目的基因種類繁多,所以先用轉基因食品最常用的轉錄啟動子CaMV35S、轉錄終止子NOS及抗生素抗體基因NPTII三個序列來設計引物進行PCR反應,對結果陽性者可再檢測目的基因。定量PCRPCR反應具有高度特異性和敏感性,但對實驗技術的要求很高,其結果易受許多因素的幹擾而產生誤差,一般PCR隻用作轉基因食品的定性篩選檢測。針對所存在的問題,研究人員在實驗設計中引入內部參照反應,以消除檢測時的幹擾,並與已知含量的序列GMO標準樣的PCR結果進行比較,從而可以半定量地檢測待測樣品的GMO含量。PCR-ELISA這是一種將PCR的高效性與ELISA高特異性結合在一起的檢測方法,它利用地高辛或生物素等標記引物,將PCR擴增產物與固相板上特異的探針結合,再加入抗地高辛或生物素的酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最後使底物顯色,在酶標儀上讀取數值。利用PCR-ELISA法對轉基因大豆檢測,靈敏度比歐盟推薦的PCR方法高5倍~10倍。它快速方便,避免了有毒物質EB的使用,適合大批量自動檢測。
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