□ 北京萊伯泰科儀器股份有限公司 供稿

　　本文介紹的方法采用PrepElite-GVS(濃縮係統-GPC凝膠淨化係統-SPE分離係統)全自動樣品前處理平台對牛奶樣品進行GPC和C18固相萃取柱淨化，並采用液相色譜串聯質譜分析檢測其中的3種硝基咪唑類藥物殘留，3種硝基咪唑類藥物殘留的回收率均在60%～85%之間，RSD均小於7%。

　　在樣品前處理過程中，往往包括很多步驟，並且步步相連。萊伯泰科(LabTech)經過多年在樣品前處理領域的大力開拓，大力推出有機分析樣品前處理整體解決方案——全自動樣品前處理平台，平台由三部分組成(濃縮係統-GPC凝膠淨化係統-SPE分離係統)，這不但能滿足單一步驟的實驗需求，而且可以實現多個產品的在線聯機，大大簡化繁瑣的樣品前處理流程，降低實驗室工作量，提高工作效率，保證結果的平行性和準確性，同時係統的密閉性及溶劑回收功能，也可保護操作人員免受有毒有害物質的危害。平台廣泛應用於環境、食品檢測、農產品檢測、生命科學等領域。

　　硝基咪唑類藥物(Nitroimidazoles)是帶有硝基的咪唑化合物，其性狀為白色或淡黃色結晶，弱堿性，能和酸結合成鹽，遇光易分解，易溶於甲醇，微溶於水，主要用於預防和治療家禽的滴蟲病、豬的出血性下痢及厭氧菌感染，並具有促生長作用，但是該類藥物對哺乳動物具有致癌、致畸、致突變作用和遺傳毒性。常見硝基咪唑類藥物包括甲硝唑(Metronidazole)、氯甲基硝唑(5-Chloro-1-methyl-4-nitroimidazole)和苯並咪唑(5-Nitrobenzimidazole)等。這些藥物在動物體內通過C2側鏈的氧化而被快速代謝，代謝物與原藥具有相似的潛在毒性。歐盟、北美和中國等都禁止了硝基咪唑在食品動物中的使用。因此建立動物食品中尤其是牛奶中硝基咪唑類藥物殘留的檢測方法具有重要意義。

　　本文使用PrepElite—GVS全自動樣品前處理平台使牛奶中硝基咪唑類藥物殘留檢測繁瑣的前處理過程自動化，大大簡化了人工操作，並且有較理想的結果。

　　實驗

　　儀器與試劑

　　PrepElite-GVS: AutoClean全自動凝膠滲析色譜淨化係統，附凝膠色譜柱Bio-Beads SX3,20×300mm;Sepline全自動固相萃取係統;LiqVap全自動定量濃縮係統(萊伯泰科有限公司);

　　LC-MS/MS 8030(島津);

　　C18固相萃取柱(LabTech，1000mg/6mL);

　　硝基咪唑類藥物標準品：甲硝唑(純度≥99.5%)，苯並咪唑(純度≥98%)，氯甲基硝唑(純度≥97.5%);

　　乙酸乙酯(分析純和色譜純),環己烷(分析純)，乙腈(分析純);氯化鈉(分析純)，磷酸氫二鉀(分析純)，無水硫酸鈉(分析純)，甲醇(色譜純)，所用水均為超純水。

　　標樣和樣品處理

　　標準溶液的配置

　　標準儲備液：分別稱取10.0mg標準品，用甲醇溶解並定容於10mL容量瓶中，該溶液濃度為1mg/mL，避光保存於-20℃。

　　混合標準中間液：分別吸取儲備液1mL於10mL容量瓶中，用甲醇定容，該溶液濃度為100μg/mL。

　　混合標準工作液：用流動相比例水∶甲醇(85∶15)稀釋混合標準中間液到合適的濃度。

　　樣品配置

　　在超市購買新鮮的牛奶，以待實驗用。

　　樣品提取方法

　　吸取牛奶試樣5.0mL，置於50mL離心管，加5mL乙腈，並用20mL乙酸乙酯進行提取，超聲10min，離心，收集上清液;再加入20mL乙酸乙酯重複提取一次。合並收集液，用無水硫酸鈉脫水，過濾紙。氮吹近幹濾液，乙酸乙酯∶環己烷(1∶1)定容，供GVS淨化。

　　樣品淨化方法

　　在PrepElite-GVS全自動樣品前處理平台軟件上編製硝基咪唑類藥物的淨化方法。

　　GPC餾分收集液在LiqVap定量濃縮近幹並用甲醇置換(濃縮至5mL)。係統自動進行C18固相萃取：柱活化，上樣體積4mL，洗脫體積15mL、氮氣吹幹。SPE上樣液和洗脫液在LiqVap濃縮近幹，並用水∶甲醇(85∶15)置換，過濾膜，進LC-MS/MS檢測。

　　LC-MS/MS的條件

　　液相色譜條件：色譜柱：VP-ODS 150×2mm，2μm;柱溫：35℃;流動相：A-0.1%甲酸水溶液，B-甲醇;流速0.25mL/min，等度洗脫程序，A∶B(85∶15)。進樣量：10μL。

　　質譜條件：電噴霧離子源正離子模式(ESI+);監測模式：多反應監測模式(MRM)參數，見表1;脫溶劑管：250℃，加熱模塊：400℃;霧化氣流速2L/min，幹燥氣流速5L/min。硝基咪唑類藥物標液(200 ppb)GVS淨化後的TIC譜圖，見圖2。

　　結果與討論

　　牛奶樣品中硝基咪唑類藥物加標進GVS的回收率及RSD

　　采用加標樣品(加標濃度0.2mg/L)，經提取、GVS淨化處理，並用LC-MS/MS分析，計算加標回收率及相對標準偏差。3種硝基咪唑類藥物的回收率均在60%～85%之間，RSD均小於7%，見表2。

　　結論

　　本方法對牛奶樣品提取，並采用PrepElite-GVS(濃縮係統-GPC凝膠淨化係統-SPE分離係統)全自動樣品前處理平台進行GPC和C18固相萃取柱淨化，並采用LC-MS/MS檢測其中的硝基咪唑類藥物殘留，3種硝基咪唑類藥物的回收率均在60%～85%之間，RSD均小於7%。實驗過程自動化程度高，操作簡單，結果顯示數據理想，可用於常規的牛奶中硝基咪唑類藥物殘留的檢測。