液相色譜串聯質譜法測定豆芽中2種植物生長調節劑

崔　敏

(榮成市檢驗檢測中心，山東榮成 264300)

摘　要：目的：建立了豆芽中4-氯苯氧乙酸(4-CPA)和6-苄基腺嘌呤(6-BAP)的液相色譜-質譜聯用儀的測定方法。方法：豆芽樣品經酸化乙腈提取，LC-C18柱淨化後，以甲醇和含5 mmol/L乙酸銨的0.1%甲酸的流動相，經C18色譜柱分離，在UPLC-MS/MS的多反應監測模式下進行定性定量分析。結果：在10～200 ng/mL，2種植物生長調節劑有良好線性關係(2≥99.7%)，回收率為84.3%～94.6%，精密度為2.6%～10.3%，4-CPA的檢出限和定量限分別為1.54 µg/kg和4.28 µg/kg，6-BAP的檢出限和定量限分別為0.237 µg/kg和0.459 µg/kg。結論：該方法前處理簡單快速、線性良好，回收率和精密度高，可以準確測定豆芽中4-CPA和6-BAP的含量，滿足國內外豆芽中對4-CPA和6-BAP限量的檢測需求。

關鍵詞：豆芽;液相色譜串聯質譜法;植物生長調節劑;4-氯苯氧乙酸;6-苄基腺嘌呤

豆芽是餐桌上常見的美食，含有蛋白質、維生素和粗纖維等豐富的營養物質，具有補充人體所需氨基酸、降低膽固醇、促進腸胃蠕動和消腫利尿等作用，深受人們喜愛[1-3]。近年來，不法商販為了縮短豆芽的生長周期和增加產量，在加工過程中使用了植物生長調節劑，促進植物細胞分裂、生長以及豆芽下胚軸增粗，抑製軸長和根部萌發，以達到加粗豆芽頸部生長的目的[4-6]。人們食用後，能引起惡心、嘔吐等胃部不良反應，損害人體皮膚、食道、胃黏膜等，給人們的身體健康造成巨大危害[7-9]。市場監督管理局、農業部、國家衛生和計劃生育委員會發布了《關於豆芽生產過程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物質的公告》(2015年第11號)，明確規定在豆芽生產過程中禁止使用4-氯苯氧乙酸和6-苄基腺嘌呤等物質[10]，並將其列為食品監管領域重點工作，在每年的國家世界杯賽程預測監督抽檢實施細則中均有體現。基於豆芽中植物生長調節劑的測定(BJS 201703)方法[11]，采用QuEChERS離心管淨化樣品時，會損失部分樣品提取液，影響試驗準確度，因此本研究建立了LC-C18固相萃取柱淨化法，淨化提取液時抽幹萃取柱，損失極少，且操作簡單快速，能夠準確測定豆芽中4-CPA和6-BAP的含量。

1　試驗部分

1.1　試劑與藥品

4-CPA和6-BAP為有證標準物質(北京壇墨質檢科技股份有限公司);甲醇、乙腈(歐普森(Oceanpak)色譜純);甲酸、乙酸銨、無水硫酸鎂、無水乙酸鈉(國藥集團化學試劑北京有限公司);實驗室用水符合GB/T 6682規定的一級水。

1.2　儀器與設備

三重四級杆液相色譜-串聯質譜儀：TSQ Quantum Ultra EMR System，美國賽默飛世爾科技公司;電子分析天平：AR224CN，±0.000 1 g，上海天平儀器廠;高速冷凍離心機：CF16RXⅡ，日本日立;全自動均質器：AH-40，睿科;渦旋混合器：Vortex I，IKA;氮吹儀：MTN-5800，天津奧特賽恩斯儀器有限公司;超純水係統：重慶摩爾水處理設備有限公司的MOL PW500EDI;C18色譜柱：thermo，hypersil gold(C18) 100 mm×2.1 mm，1.9 µm;LC-C18固相萃取柱：CNW，6 mL/500 mg。

1.3　試驗方法

1.3.1　溶液的配製

(1)混合標準中間液的配製。4-CPA標準溶液和6-BAP標準溶液，含量均為100 µg/mL，準確吸取1 mL 2種標準溶液於10 mL容量瓶中，甲醇稀釋定容，配製成10 µg/mL的混合標準中間液;準確吸取10 µg/mL的混合標準中間液1 mL，於10 mL容量瓶中，甲醇稀釋定容，將其變成質量濃度為1 µg/mL的混合標準中間液。

(2)含1%甲酸的乙腈溶液配製。量取10 mL甲酸，加入乙腈稀釋至1 000 mL，混勻。

(3)含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液配製。稱取0.385 4 g乙酸銨，用水溶解並稀釋至1 000 mL，加入1 mL甲酸，混勻。

1.3.2　樣品前處理

(1)提取。準確稱取均質試樣10.0 g(精確到0.1 g)置於50 mL的聚丙烯離心管中，加入20 mL含1%甲酸的乙腈溶液，高速勻漿提取2 min，加入4 g無水硫酸鎂和1 g無水硫酸鈉，立即渦旋混合1 min，以10 000 r/min離心5 min使乙腈和水相分層。

(2)淨化。LC-C18固相萃取柱，使用前用水和甲醇各6 mL活化，精確量取上層乙腈溶液4 mL於LC-C18固相萃取柱中，氮吹管接收淨化液，並抽幹萃取柱，於45 ℃氮氣吹幹，甲醇定容至1 mL，過0.22 µm有機濾膜上機測定。

1.3.3　標準曲線的繪製

準確稱取空白試樣10.0 g(準確到0.1 g)置於50 mL的聚丙烯離心管中，進行前處理，作為空白基質提取液。分別精確量取混合標準中間液(1 µg/mL)0 µL、10 µL、20 µL和40 µL，及標準混合中間液(10 µg/mL)10 µL、15 µL和20 µL，用空白基質提取液定容至1.0 mL，作為混合標準工作液，濃度依次為0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL和200 ng/mL，臨用時現配[11]。

1.3.4　儀器條件

色譜條件：C18色譜柱柱溫：30 ℃，流動相：溶劑A(含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液)，溶劑B(甲醇);流速：0.25 mL/min;梯度洗脫條件：0～1 min 5%B，1～3 min 5%～95%B，3～7.1 min95%B，7.1～8 min 95%B，8～10 min 5%B。

質譜條件：ESI源，多反應監測(MRM)，氬氣為碰撞氣;毛細管溫度(℃)：350，鞘氣(Arb)：45，輔助氣(Arb)：10，噴霧電壓(V)：3 000，離子掃描模式：負離子掃描模式。

2　結果與討論

2.1　質譜條件優化

取1 µg/mL的4-CPA和6-BAP混合標準中間液，在液相質譜聯用儀ESI-模式下掃描，優化質譜條件，選擇信號強度理想的母離子和子離子作為定性定量離子，篩選結果見表1。取100 ng/mL的4-CPA和6-BAP混合標準工作液，上機驗證目標物出峰效果，4-CPA和6-BAP的總離子流圖結果見圖1，出峰時間分別為5.78 min和5.66 min，離子豐度比分別為34.1%和49.0%。

2.2　標準工作液曲線

4-CPA和6-BAP的係列混合標準工作液均為

0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL，40 ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL和200 ng/mL，上機檢測，外標法定量。結果數據分析，出現3個母離子，分別是質核比(m/z)為184.905的4-CPA、質核比(m/z)為187.000的4-CPA和質核比(/)為224.070的6-BAP，線性回歸方程分別為：Y=729.645+769.358X、Y=3 779.49+2 249.89X和Y=1 991.1+5 621.12X，相關係數2為0.999 9、0.999 4和0.997 5，呈現線性良好，見圖2。

2.3　回收率和精密度

豆芽樣品中，加入4-CPA和6-BAP混合標準溶液，選擇在10 µg/kg，20 µg/kg，100 µg/kg進行3水平回收試驗，每個水平6個平行，回收率和精密度結果如表2所示，平均回收率為84.3%～94.6%，為2.6%～10.3%。

2.4　檢出限和定量限

空白基質中加入4-CPA和6-BAP標準品進行前處理，上機測定，扣除基線後，以信噪比S/N=3時對應的含量為檢出限，信噪比S/N=10時對應的含量為定量限，結果顯示4-CPA的檢出限和定量限分別為1.54 µg/kg和4.28 µg/kg，6-BAP的檢出限和定量限分別為0.237 µg/kg和0.459 µg/kg。

3　結論

本文對豆芽中4-CPA和6-BAP的液相質譜聯用檢測法的前處理過程、液相色譜和質譜條件進行了優化，選擇甲醇活化後的LC-C18固相萃取柱淨化樣品，操作簡單、快速且準確度高。質譜條件優化後，篩選出了4-CPA和6-BAP響應強度較高的離子作為定量定性離子，其離子豐度比為分別為34.1%和49.0%，允許的相對偏差範圍為±25%[12]，可以有效提高檢測的準確性。結果顯示該方法前處理簡單快速、線性良好，回收率和精密度高，可以準確測定豆芽中4-CPA和6-BAP的含量，滿足國內外豆芽中對4-CPA和6-BAP限量的檢測需求。

參考文獻

[1]馬雪豐.高效液相色譜法測定豆芽中4-氯苯氧乙酸鈉殘留量[J].南方農業,2016,10(16):27-30.

[2]葉佳明,王京,鍾世歡,等.高效液相色譜-串聯質譜法測定豆芽中6種植物生長調節劑的殘留[J].農產品加工,2018(4):39-42.

[3]胡祥娜,顧亞萍,林慧純,等.高效液相色譜串聯四極杆質譜法同時測定豆芽中7種藥物殘留[J].食品科學,2014,35(20):253-257.

[4]楊婕,黃少文,孫遠明,等.4-氯苯氧乙酸鈉對豆芽生長的影響及其殘留分析[J].食品工業科技,2015,36(15):104-108.

[5]李娜,盧娜,邵輝,等.超高效液相色譜-串聯質譜法快速測定豆芽中6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸鈉、2,4-滴和赤黴素[J].天津農業科學,2020,26(4):1-5.

[6]張亞蓮,柳菡,王歲樓,等.高效液相色譜-串聯質譜法測定豆芽中8種藥物殘留[J].分析測試學報,2015,34(2):164-170.

[7]柳菡,吳斌,殷耀,等.高效液相色譜-串聯質譜法測定芽苗類蔬菜及其來源豆類中4種非法添加物的殘留量[J].色譜,2013,31(1):22-26.

[8]趙浩軍,楊吉玉,陳朋雲,等.QuEChERS-超高效液相色譜-串聯質譜法同時測定豆芽中6-苄基腺嘌呤和4-氯苯氧乙酸的含量[J].世界杯賽程預測質量檢測學報,2020,11(14):4732-4736.

[9]張婧雯,郭春海,葛世輝,等.固相萃取-超高效液相色譜串聯質譜法同時測定豆芽中6-苄基腺嘌呤、赤黴素和4-氯苯氧乙酸的殘留量[J].中國食品衛生雜誌,2014,26(5):441-445.

[10]佚名.國家食品藥品監督管理總局 農業部 國家衛生和計劃生育委員會關於豆芽生產過程中禁止使用6-苄基腺嘌呤等物質的公告[J].中國食品衛生雜誌,2015,27(3):276.

[11]佚名.總局關於發布食品中西布曲明等化合物的測定等3項食品補充檢驗方法的公告[J].中國食品衛生雜誌,2017,29(2):217.

[12]上海市食品藥品檢驗所.BJS 201703 豆芽中植物生長調節劑的測定[EB/OL].(2017-07-07)[2021-10-09].https://www.doc88.com/p-3035672754514.html.