2022-02-16 11:30:28 來源: 世界杯賽程預測 導刊
陳振中
(中科檢測技術服務(廣州)股份有限公司,廣東廣州 510000)
摘 要:為測定常見食品中乳酸、富馬酸的含量,建立了常見食品中乳酸、富馬酸提取及反相高效液相色譜的測定方法。本實驗選用葡萄酒、含乳飲料、糕點為基質,添加乳酸、富馬酸標準品混勻,用水浸泡超聲提取、稀釋至刻度,搖勻,5 000 r/min離心10 min,上清液過0.45μm 無機濾膜後,以高效液相色譜反相C18柱分離,通過PDA二極管陣列檢測器檢測。檢測結果顯示,以上3種基質用該測定方法檢測的平均回收率分別為乳酸97.7%、95.5%、99.1%,富馬酸96.3%、95.5%、97.9%;相對標準偏差分別為乳酸1.1%、1.5%、4.4%,富馬酸1.2%、1.0%、0.3%。
關鍵詞:常見食品;乳酸;富馬酸;反向高效液相色譜法;PDA二極管陣列檢測器
富馬酸即名延胡索酸,富馬酸可作為酸度調節劑、酸化劑、抗氧化助劑、醃製促進劑和香料使用。本品有強緩衝作用,保持水溶液pH在3.0左右,並對抑菌防黴有重要作用,同時有澀味,是酸味極強的固體酸之一,吸收率低,有助於延長粉末製品等的保存期。當富馬酸變為富馬酸鈉後,水溶性及風味均更好。乳酸有很強的防腐保鮮功效,可用在果酒、飲料、糕點等食品中具有調節pH值、抑菌、延長保質期、調味、保持食品色澤和提高產品質量等作用,食品中加入一定量的乳酸,可保持產品中的微生物的穩定性、安全性,同時使口味更加溫和[1]。
現行有效的高效液相色譜法檢測食品中的富馬酸、乳酸的方法一般局限在飼料、果汁、農產品等,鮮有運用高效液相色譜法同時測定食品中的富馬酸、乳酸的方法。本實驗建立了常見食品中乳酸、富馬酸提取及反相高效液相色譜的測定方法,選用含乳飲料、葡萄酒、糕點為基質,添加乳酸、富馬酸標準品混勻,用水浸泡、稀釋至刻度,搖勻,5 000 r/min離心10 min,上清液過0.45 μm無機濾膜後作為樣液,然後以高效液相色譜反相C18柱分離,通過PDA二極管陣列檢測器檢測[9]。
1 材料與方法
1.1 材料與試劑
供試含乳飲料(原味椰子果粒酸奶飲品,廣州市貝奇飲料有限公司生產);供試葡萄酒(菲芃莊園葡萄酒,廣州市聖羅倫酒業有限公司生產);供試糕點(核桃包,廣州包多寶食品有限公司生產);乳酸標準品(含量89.9%,英國LGC公司);富馬酸標準品(含量99.2%,英國LGC公司);磷酸二氫銨(分析純,廣州化學試劑廠);超純水(電阻率為18.2 MΩ·cm)。
1.2 儀器與設備
Alliance e2695高效液相色譜係統(美國Waters公司);2998 PDA Detector光電二極管陣列檢測器(美國Waters公司);Uranus C18色譜柱(4.6 mm×250 mm×5 μm,廣州菲羅門科學儀器有限公司),電子分析天平(GH-252,廣州市艾安得儀器有限公司);超聲波清洗機(GT-2013QTS,廣東固特超聲股份有限公司);低速離心機(KA-1000,上海安亭科學儀器廠);Cascada I 超純水儀(美國PALL公司)。
1.3 實驗方法
1.3.1 乳酸、富馬酸標準溶液配製
秤取乳酸標準品55.6 mg、富馬酸標準品50.4 mg,分別加水轉移至50.0 mL容量瓶中,定容至刻度,配置成濃度均為1.0 mg/mL的乳酸、富馬酸標準儲備溶液。分別吸取適量乳酸、富馬酸標準儲備溶液於50.0 mL容量瓶中,配製成6個不同濃度混標(包括空白試樣)。乳酸標準曲線濃度範圍:0 μg/mL、8.33 μg/mL、25.00 μg/mL、50.00 μg/mL、100.00 μg/mL、250.00 μg/mL;富馬酸標準曲線濃度範圍:0 μg/mL、0.083 3 μg/mL、0.250 0 μg/mL、5.000 0 μg/mL、10.000 0 μg/mL、25.000 0 μg/mL。
乳酸、富馬酸在上述濃度範圍內呈線性關係。線性回歸方程分別為:乳酸Y=16.733-11.673、富馬酸Y=8.180-5.590。相關係數分別為:乳酸R=0.999 97、富馬酸R=0.999 98
1.3.2 高效液相色譜條件
色譜柱:Uranus C18色譜柱4.6 mm×250 mm×5 μm;流動相:1 mol/L磷酸二氫銨溶液,磷酸調節pH=2.5;流速:0.6 mL/min;檢測波長:210 nm;柱溫:40 ℃;進樣體積:10 μL。
1.3.3 樣品前處理
取有代表性樣品500 g混合均勻,裝入潔淨容器內密閉並標明標記,於4 ℃保存。秤取樣品約5 g(精確到0.000 1 g)於50 mL容量瓶中,25 mL超純水水浸泡1 h,超聲提取1 h,稀釋至刻度,搖勻,5 000 r/min離心10 min,上清液過0.45 μm無機濾膜後作為樣液,供HPLC測定。
1.3.4 流動相pH值相關性實驗
配製1 mol/L磷酸二氫銨溶液並用磷酸調節pH值,分別配製成pH=2.0、pH=2.5、pH=3.0的1 mol/L磷酸二氫銨溶液,分別以此作為流動相上機檢測,其他色譜條件不變。收集乳酸、富馬酸標樣保留時間、峰寬、分離度,分析兩者與流動相pH值的相關性,選擇最優流動相pH值進行後續
實驗。
1.3.5 方法檢出限實驗
選用信噪比法確定方法檢出限。分別稱取500.0 g3種基質樣品各3份,並分別添加乳酸、富馬酸標準物質10.0 mg、0.10 mg;50.0 mg、0.50 mg;100.0 mg、1.00 mg,每種基質樣品中乳酸、富馬酸樣品濃度水平分別為20.0 mg/kg、0.20 mg/kg;100.0 mg/kg、1.00 mg/kg;200.0 mg/kg、2.00 mg/kg。稱取適量樣品前處理後上機檢測,確定本實驗室對本方法的檢出限。
1.3.6 方法回收率與重複性實驗
稱取葡萄酒、含乳飲料、糕點3種基質樣品500.0 g各兩份,樣品中分別添加乳酸、富馬酸標準物質125.0 mg,1.25 mg樣品濃度水平為乳酸250.0 mg/kg、富馬酸2.50 mg/kg。按照本文樣品前處理方法提取及淨化處理樣品得到1.0 mL樣液 ,用高效液相色譜分析。
2 結果與分析
2.1 流動相pH值相關性
實驗數據如表1所示。由表1可知,當流動相pH=2.5、pH=3.0時,分離度(R)分別為3.183、7.821,均>2,有較好分離度。當流動相pH=2.5時,所有待測物完全出峰所需時間適中,且分離度(R)>2,所以後續實驗流動相pH均選擇pH=2.5。標準樣中目標物的色譜圖見圖1;葡萄酒、含乳飲料、糕點3種基質中目標物色譜圖分別見圖2~4。
2.2 方法檢出限
本文主要選用信噪比法進行研究。峰高及基線最大波動值數據如表2。由表2可知,乳酸濃度水平為100.0 mg/kg、富馬酸度水平為0.020 mg/kg時,信噪比明顯,分別為5倍、2倍,所以本實驗以乳酸濃度水平100.0 mg/kg、富馬酸度水平0.020 mg/kg為方法檢出限,與行業標準《進出口果汁中乳酸、檸檬酸、富馬酸含量檢測方法 高效液相色譜法》(SN/T 2007—2007)方法檢出限相近,符合要求。
2.3 方法回收率與重複性實驗
用高效液相色譜分析,每種基質樣品重複測定6次,進行加標回收和精密度實驗,結果計算=實驗數據如表3所示。本次實驗樣品基質空白為0,樣品濃度水平為乳酸250.0 mg/kg、富馬酸2.50 mg/kg,葡萄酒、含乳飲料、糕點3種樣品基質平均添加回收率分別為乳酸97.7%、95.5%、99.1%,富馬酸96.3%、95.5%、97.9%;相對標準偏差分別為乳酸1.1%、1.5%、4.4%,富馬酸1.2%、1.0%、0.3%,結果表明該方法精密度、重現性良好。
3 結論
本方法具有較低的檢出限,較好的靈敏度與重現性,能夠簡單、快速、靈敏地對常見食品基質中的乳酸、富馬酸實現較好地分離、定性與定量,適用於常見食品基質中乳酸、富馬酸含量的測定,適用於常見食品基質中乳酸、富馬酸含量檢測。
參考文獻
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