氰化物中毒犬隻樣品采樣要點

氰化物中毒犬隻樣品采樣要點

徐玲萍，程文聰，張芳芳

（台州市食品檢驗檢測中心，浙江台州 318000）

摘 要：采取氰化物中毒犬隻各個部位的樣本，采用異煙酸比色法測定組織中氰化物的含量。通過檢測發現，每一個部位的氰化物含量都不相同，胃中含量最高，其次是肝髒，肉組織中含量比較低。樣本的存儲溫度和時間對檢測值也有一定影響，冷凍冷藏保存的樣品測定數值比較穩定，氰化物在20 d內降解較慢，常溫保存樣品測定值與新鮮樣品測定值有明顯差異。因此針對使用氰化物等非法毒物捕殺的犬隻應采集胃部，樣本應存儲於冷藏冷凍環境中，並盡快送檢，才能保證出具的數據最有效可靠。

關鍵詞：狗肉；氰化物；采樣部位；存儲方式

一些地區有吃狗肉的習俗，隨著越來越多的狗肉被消費，市場上也有一些非法的狗肉來源，如用毒物撲殺的犬隻。氰化物是一種速殺型毒物，氫氰酸口服致死量為0.06 g，氰酸鹽為0.1～0.3 g。氰化物進入人體內能迅速與細胞色素氧化酶中的3價鐵結合，組織細胞無法利用血液中的氧而造成內窒息。中樞神經係統對缺氧尤為敏感，氰化物中毒的犬表現為不同程度的中樞性呼吸衰竭症狀。犬隻吸入高濃度的氰化氫氣體或吞服大量氰化物，可在數s至5 min內停止呼吸，呈“電擊樣”死亡[1]。由於其快速高效，氰化物常常被用作撲殺犬隻的主要毒物。氰化物在動物、人體內不易被分解，人食用被氰化物毒害的狗肉後，輕則出現頭痛、頭昏、惡心嘔吐、食欲不振等中毒症狀，嚴重的會因全身功能衰竭而死亡[2]。因而在對犬隻的氰化物檢驗中應該執行最為嚴謹的檢測規定。然而樣本的有效性是所有檢驗工作的前提和基礎。製定取樣計劃時，必須考慮檢測的目的、樣本的性質、檢測方法的特點等。取樣程序應該準確規範，選用適宜的取樣工具，熟練掌握取樣操作技術，有效防止交叉汙染。樣本的運輸和保存應該考慮周全，避免檢測目標物的損失或失效，做好正確的標識和記錄[3]。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

分光光度計（UV2600島津）；電子天平（奧豪斯，SA223S-CW）；移液槍（Eppendorf，1～5 mL），冰箱。

1.2 材料與試劑

（1）異煙酸-吡唑啉酮。稱取1.5 g異煙酸溶於24 mL氫氧化鈉（20 g/L）溶液中，加水定容至100 mL，另取0.25 g吡唑啉酮，溶於20 mL無水乙醇中，合並上述兩種溶液，搖勻。

（2）氯胺T。稱取1 g氯胺酮溶於水中，稀釋至100 mL。

（3）磷酸鹽緩衝溶液。稱取34.0 g無水磷酸二氫鉀和35.5 g無水磷酸氫二鈉，溶於水並稀釋至1 000 mL[4]。

乙酸、氫氧化鈉、乙酸鋅、酒石酸均為分析純。

1.3 樣品的製備

犬1、犬2、犬3、犬4、犬5和犬6共6條氰化物中毒犬隻為本次實驗對象。解剖犬隻，取每一隻犬的舌頭、胃、犬大腿肌肉、肝髒等5個部位的組織，依次分別勻漿，共形成30個樣品，馬上測定其氰化物的含量，並留取中毒犬隻胃及其內容物樣品待用。

稱取上述6條中毒犬隻的胃及其內容物樣品，每份５ g，分裝至試管內，密封，保存到4 ℃冰箱內，共6份樣品，於1 d、3 d、8 d、15 d、20 d和30 d後，分別測定其氰化物的含量。

稱取上述6條中毒犬隻的胃及其內容物樣品，每隻中毒犬取兩份，每份5 g，依次裝到試管內並密封，再依次保存到-20 ℃、25 ℃的壞境中，共形成12份樣品，於20 d後分別測定其氰化物的含量。

1.4 試驗方法

1.4.1　標準溶液的配製

吸取0 mL、0.3 mL、0.6 mL、0.9 mL、1.2 mL、1.5 mL和2.0 mL的1 mg/L氰標準溶液於25 mL比色管中，加水定容至10 mL。

1.4.2　樣品前處理

稱取樣品5 g於500 mL蒸餾瓶中，加蒸餾水浸沒樣品，加100 g/L乙酸鋅溶液20 mL，加入酒石酸2 g，迅速連接好蒸餾裝置，加熱蒸餾。將冷凝管下端插入10 g/L氫氧化鈉10 mL中，收集蒸餾液並用純水定容至50 mL，移取10 mL蒸餾液於25 mL比色管中。

試樣溶液及標準溶液各加酚酞1滴，用乙酸（1+20）調至紅消失，再用2 g/L氫氧化鈉溶液調至近紅色，然後加5 mL磷酸鹽緩衝溶液，37 ℃水浴10 min，再加入0.25 mL氯胺T溶液，搖勻放置5 min，加入5 mL異煙酸-吡唑啉酮溶液，加水稀釋至刻度，加塞振蕩混合均勻，在37 ℃恒溫水浴鍋中放置40 min，取出用1 cm比色杯以零管調節零點，於波長638 nm處測吸光度[5-6]。

2 結果與分析

2.1 采樣部位和測定值的關係

分析測定結果發現，肉中氰化物檢出量最低，舌頭氰化物檢出量是肉中的1.9倍，肝髒氰化物檢出量是肉中的10.8倍，胃中氰化物檢出量是肉中的46.8倍，胃中氰化物檢出量最高，具體如表1和圖1所示。

氰化物在犬隻各組織中的分布情況和氰化物的中毒機理有明顯的關係。氰化物中毒非常快速，且致死量很低。毒物進入犬隻體內後，還沒有被完全消化和吸收，即可引起犬隻中毒死亡，所以在胃部殘留了大量的氰化物。肝髒雖然是解毒器官，但慢性中毒時，毒物蓄積會比較明顯。氰化物在肝髒中殘留量的影響因素比較複雜，不同的犬隻其相對含量差異較大，但是均比肉中含量高。所以針對氰化物等在食品生產銷售中非法使用的物質的檢測，若采集肌肉等器官送往檢測機構檢測，結果往往是未檢出。市場監督管理部門無法準確辨別犬隻是否為氰化物所毒殺，不法分子將有機可乘。這也是市場上氰化物毒殺犬隻屢禁不絕的一個重要原因，給消費者帶來了巨大的威脅[7-8]。

2.2 存儲溫度和測定值的關係

冷凍保存和冷藏保存的樣品測定值與樣品的采集當天的數據沒有明顯的差異，而常溫保存的樣品其測定值明顯偏底，僅為采樣當天的6%～35%，見表2和圖2。

本試驗證明樣品應該保存在冷藏和冷凍的環境中，氰化物在冷藏或冷凍的環境中20 d內能保證較為穩定的含量值，如長時間放置在常溫的環境中，測定的數據將會偏低，不能真實反應送檢的樣品的實際含量。在常溫的環境中，樣品有明顯的腐臭味，顏色變黑，胃及內容物的混合物中氰化物以氫氰酸、氰化鉀、有機氰化物等形式存在，微生物能降解一部分氰化物，氫氰酸在高溫環境中也從樣品中溢出，導致測定結果明顯偏低，對於含量本來不高的樣品，可能無法檢測出來，樣品也失去了其代表性。樣品由采樣人員采集後，如何進行有效的保存和運輸，也就是確保分析目標物不損失和降解，是由樣本的本質和分析方法決定的。如對儲存的溫度、空氣、光照等條件的有效控製。針對氰化物樣品的環境條件的要求，采樣單位應配備冷鏈設施。

2.3 檢測時間和測定值的關係

在冷藏（4 ℃）條件下，不同放置時間的毒犬隻胃中氰化物的測定結果顯示，相對偏差為5.5%～11.8%，數據的差異性不明顯。由圖3也清楚顯示冷藏的環境中樣品中氰化物並沒有隨著時間的變化發生明顯的下降趨勢，比較穩定。檢測過程中樣品穩定性給檢測結果的可靠性帶來了有利的因素，另外，氰化物在低溫的環境中降解速度較慢，使食用該樣品的危險因素長期存在[9]。

樣品從采集完成到送檢檢測機構，其中有運輸和存儲的時間，檢測機構從受理樣品到開始檢測也存在時間差。合理安排和控製檢測時間，是影響樣品測定結果的重要因素，也是確保數據有良好複現性的重要前提。試驗結果表明在冷藏條件下氰化物測定從采樣到檢測時間控製在20 d內，測定結果差異不顯著。

3 結論

樣品具有代表性、真實性是食品檢驗中對樣品的基本要求，這是保證檢驗結果準確可靠的重要前提。很多檢驗工作者在其論文中闡述了樣品管理在檢驗檢測工作中的重要性，及如何取保樣品有效性的方法。科學規範地采集氰化物中毒犬隻樣本尤為重要。在對氰化物中毒的犬隻取樣過程中，應注意氰化物在全身的分布情況，選取有代表性的部位進行送檢，胃部、肝髒中含量較多，肌肉和口腔等殘留較少。

樣品在采集後保存條件的控製也是檢驗流程的重要組成部分。本試驗設置了冷凍、冷藏和常溫3個不同的存儲條件，對其結果差異性進行了分析研究，發現冷藏和冷凍保存的樣品數據穩定，常溫下保存樣品氰化物含量有明顯的降解。本試驗中，在對所有樣本冷藏保存20 d內含量變化趨勢監測中沒有發現明顯波動，可見此穩定下氰化物降解較為平穩緩慢，降解率在12%之內。所以氰化物中毒的犬隻樣本應該保存在冷藏或冷凍的條件下，並在20 d內完成實驗室檢測，有助於確保檢測結果的準確可靠[10-11]。

參考文獻

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[M]．北京:中國民主法治出版社,2015．

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[11]朱雲華.淺談檢驗檢測實驗室的樣品管理[J].中國食品,2018(12):139-140.