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超高相液相色譜-串聯質譜法測定鮮豬肉中8種磺胺類藥物殘留

2021-11-29 16:10:41 來源: 世界杯賽程預測 導刊

超高相液相色譜-串聯質譜法測定鮮豬肉中8種磺胺類藥物殘留
王 玲，林柯璐
（四川省德陽市食品藥品安全檢驗檢測中心，四川德陽 618000）
摘 要：磺胺類抗生素是目前畜牧業中常用的一種抗菌藥物，而磺胺類抗生素在豬肉當中殘留積累，在被人體吸收後，會對人體產生毒副作用。因此，對鮮豬肉中磺胺類抗生素殘留進行檢測具有十分重要的現實意義。本文采用超高相液相色譜-串聯質譜法測定了鮮豬肉中8種磺胺類藥物殘留，並對德陽市場和超市的30份鮮豬肉進行磺胺類抗生素殘留的檢測。結果表明，30份樣品檢測結果全部合格，利用該方法對磺胺類藥物進行定性和定量分析，具有操作簡單、方法穩定等優勢，可滿足檢測和監管要求。
關鍵詞：鮮豬肉；磺胺類藥物殘留；超高效液相色譜-質譜法
磺胺類藥物為人工合成的抗菌藥，具有抗菌譜較廣、性質穩定、使用簡便等優點，在畜牧業得到了廣泛應用，養殖戶在畜牧養殖的過程當會使用大量的磺胺類抗生素，牲畜被人類食用後，會對人類的身體健康造成一定的負麵影響。因此，對各種畜牧產品，尤其是鮮肉類的產品進行磺胺類抗生素殘留檢測，是對消費者生命健康的保障，是一項十分重要的工作。
磺胺類藥物殘留的常用檢測方法主要有酶聯免疫法、高效液相色譜法、液相色譜質譜法等[1]。液質聯用以液相色譜作為分離係統，質譜為檢測係統，樣品經液相係統進入質譜係統，被離子化後，經質譜的質量分析器將離子碎片按質量數分離，經檢測器得到質譜圖。液質聯用體現了色譜和質譜優勢的互補，將色譜對複雜樣品的高分離能力與質譜具有高選擇性、高靈敏度及能夠提供相對分子質量與結構信息的優點結合起來，廣泛應用在藥物分析、食品分析和環境分析等眾多領域。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
Agilent 1290高效液相色譜儀、Agilent 6420質譜儀、優普UPT-II-10T型超純水儀、湘儀H1850R高速冷凍離心機、梅特勒托利多MS205DU電子天平、上海榮亞RE-300旋轉蒸發儀、奧特賽恩斯MTN-5800A氮吹儀、IKA VORTEX渦旋儀、KQ-700DV數控超聲儀以及九陽破壁機。
磺胺類標準品：BePure標準品磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺喹惡啉、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪（濃度100 μg/mL），成都雅源科技C18填料、正己烷（色譜純，諾爾施）、乙腈（色譜純，諾爾施）、正丙醇和甲酸（GR級，成都科龍化工試劑）。
1.2 標準儲備液
分別精確吸取濃度為100 μg/mL磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺喹惡啉、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲氧噠嗪標準溶液各1.0 mL於
20 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度線，得5 μg/mL混合標準儲備液，-18 ℃保存。再用甲醇逐級稀釋成100 ng/mL得混合標準儲備液。
1.3 標準工作液配製
分別稱取5.00 g空白陰性樣品於50 mL離心管中，處理方法同樣品處理方法一致，製的基質溶液。精確吸取適量上述100 ng/mL儲備液於1.5 mL進樣瓶中，用空白基質溶液定容至1.0 mL，配置成5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、
40 ng/mL、80 ng/mL的混合標準濃度係列。
1.4 實驗方法
1.4.1 樣品前處理
精確稱取試樣2 g置於研缽中，加入6 g C18填料，研磨30 s，裝於50 mL聚四氟乙烯離心管中，加入25 mL乙腈-水溶液，渦旋振蕩1 min，超聲10 min，於6 000 r/min離心5 min，將乙腈層轉移至另一離心管中，離心後沉澱物重複提取一次，合並乙腈溶液，待淨化[2]。
提取液中加入25 mL乙腈飽和正己烷溶液，振搖5 min，將乙腈溶液移入雞心瓶中，加入10 mL正丙醇，45 ℃水浴減壓蒸發至近幹，氮吹至幹後，加入1 mL流動相初始比列溶液，超聲，溶解殘渣，加入乙腈飽和正己烷渦旋、離心，取底層溶液過濾，上機待測。
1.4.2 色譜條件
安捷倫C18色譜柱（2.1 mm×50 mm，5 μm）；柱溫：30 ℃；進樣體積：10 μL；流速：0.3 mL/min；流動相：0.1%甲酸-水（A），甲醇（B），乙腈（C）；梯度洗脫：0～5 min，A：78%～70%，B：20%，C：2%～10%；5～8 min，A：70%～40%，B：20%，C：10%～40%。
1.4.3 質譜條件
離子源：EI；電離模式：電噴霧正離子；采集方式：MRM；離子噴霧電壓：4 000 V；幹燥氣溫度：300 ℃；幹燥氣流速：11 mL/min；磺胺類藥物多反應監測質譜優化結果見表1，優化圖譜見圖1。
2 結果與分析
2.1 實驗條件優化
2.1.1 前處理條件優化
處理過程中比較了乙腈-水、甲醇-水、乙腈、甲醇4種溶劑的提取效果，選用乙腈-水回收率最高且能達到回收率要求，目標物峰形較好，分離度良好，表明乙腈-水的提取效果最優。試驗中采用加入正己烷和不加正己烷做對比，得出加入正己烷溶液後除油效果佳，且樣品最後過濾時溶液較澄清[3]。
2.1.2 液相條件優化
溫度會影響色譜峰的出峰時間，隨著溫度的增加，色譜峰的出峰時間提前，使得檢測時間縮短，但是當溫度過高，時間前移較多時，多種目標物同時檢測時峰會重疊，從而影響分離度。試驗中在25 ℃、30 ℃、35 ℃ 3種液相柱溫下進樣測定，得出在30 ℃時峰的分離度最好，流出時間短，峰形對稱尖銳，所以色譜柱溫度選擇為30 ℃。流動相比較了純水、0.1%甲酸水溶液。由於水溶液中加入甲酸，有利於磺胺類藥物的離子化，為陽離子的形成提供質子，同時甲酸質子化色譜柱內的矽羥基，降低了磺胺類藥物與羥基形成氫鍵的可能性，從而改善峰形，減少峰拖尾現象。
2.1.3 質譜條件優化
在正離子模式下進行母離子的掃描，確定子離子，設定一定範圍內的一組錐孔電壓，選出最優的錐孔電壓，在最優電壓下，優化碰撞能量，通過子離子信號豐度，選出最優的碰撞能量，確定目標物的最優質譜條件[4]。
2.2 標準曲線及線性範圍
豬肉基質複雜，應用高相液相色譜-串聯質譜進行測定時，基質對藥物產生基質效應，對目標物有增強或抑製效應[5]。因此，為了減小基質效應，本試驗采用基質表準曲線進行定量。用陰性豬肉樣品空白基質溶液配製濃度為
5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL的混合標準溶液進行測定。以濃度為橫坐標，相應峰響應值為縱坐標繪製標準曲線，線性良好，相關係數為0.997 6～0.999 9。
8種磺胺類藥物線性範圍、相關係數、回歸方程見表2。
2.3 方法準確度
以陰性豬肉樣品作為空白樣品，在空白樣品中加入混合標準溶液，設3個添加濃度，每個添加濃度設置6個重複，以每個濃度的6個重複樣品的回收率評價方法的準確度。添加水平為5 μg/kg、20 μg/kg、50 μg/kg，陰性豬肉樣品的加標回收率在70.7%～101.3%，符合分析要求，見表3。
2.4 精密度
以陰性豬肉樣品作為空白樣品，在空白樣品中加入混合標準溶液，設3個添加濃度，每個添加濃度設置6個重複，以6次測試結果的相對標準偏差評價方法的精密度，添加水平為5 μg/kg、20 μg/kg、50 μg/kg，陰性豬肉樣品濃度的相對標準偏差在1.2%～3.9%，符合分析要求，見表3。
表3 添加回收率實驗結果表（n=6）
2.5　實際檢測驗證試驗
在試驗優化的最優檢測條件下，對菜市場和超市購買的30份豬肉樣品進行磺胺類藥物殘留的檢測，均未超過GB 31650—2019標準中磺胺類藥物的殘留限量100 μg/kg的規定。
4 結論
超高相液相色譜-串聯質譜法是一種綜合性檢測技術，結合了液相色譜的高效分離能力與質譜的高靈敏度特點，其色譜柱可多次重複利用，並且檢測結果快速、準確，本文實驗結果表明將超高相液相色譜-串聯質譜法應用於食物中殘留藥品檢測，可以滿足對大分子化合物的分離要求，值得進一步在 食品檢測行業推廣應用。
參考文獻
[1]馮才偉,朱君紅,王會玲,等.酶聯免疫法測定豬肉中磺胺類藥物的殘留[J].四川畜牧獸醫,2012,39(2):27-29.
[2]陳振桂,占春瑞,郭平,等.高效液相色譜法同時測定水產品中13種磺胺類藥物殘留的研究[J].食品科學,2007(10):448-451.
[3]王浩,郭啟雷,殷曉燕,等.液相色譜-串聯三重四極杆質譜對牛奶中10種磺胺類藥物殘留的同時測定[J].分析測試學報,2008(增刊1):137-139.
[4]楊傑程,劉丁溪,郭擾擾,等.動物性食品中磺胺類藥物殘留檢測方法的研究進展[J].畜牧與獸醫,2019,51(6):134-139
[5]鄧櫻花,李林,張洪權,等.高效液相色譜-熒光檢測法測定雞肉中5種磺胺類藥物殘留[J].華中第二師範學院化學與生命科學學院,2014,48(1):53-57.
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