液相色譜-原子熒光法測定水產食品中的甲基汞

李鵬飛

(山西省食品藥品檢驗所，山西太原 030031)

摘　要：本文參照GB 5009.17—2014，建立了液相色譜-原子熒光法(LC-AFS)測定水產食品中甲基汞的檢測方法。實驗表明，在0.5～10.0 ng/mL，甲基汞的峰麵積與濃度線性關係較好，相關係數為0.996 5，方法檢出限為0.006 mg/kg，加標回收率為85.7%～98.9%，為2.1%～3.5%，精密度與穩定性良好，可以滿足水產食品中甲基汞的分析要求。

關鍵詞：水產食品;甲基汞;液相色譜-原子熒光法

汞是一種具有生物蓄積性與持久性的劇毒物質[1]。在元素汞、無機汞與有機汞3種形態中，甲基汞的毒性最大，其易被人體吸收且難降解排出，對人體健康危害極大[2]。水生生物吸收水體中的汞，形態會隨著水生食物鏈的傳遞發生轉化並不斷富集放大，魚蝦等水產食品成為人類攝入汞的主要風險來源，日本的水俁病事件即是甲基汞的食源性危害引發，所以加強對水產食品中甲基汞的風險評估非常重要[3-4]。目前，甲基汞形態的檢測方法主要有GC-AFS法、LC-ICP-MS法、HPLC-CV-AFS法和LC-AFS法等，GC-AFS法衍生處理步驟煩瑣，LC-ICP-MS法、HPLC-CV-AFS法成本較高，運行維護複雜，LC-AFS法前處理簡單、分析成本低。因此，本文結合實驗室條件設備，參照GB 5009.17—2014[5]中第二法建立了LC-AFS法測定水產食品中的甲基汞的方法。

1　材料與方法

1.1　材料與試劑

大蝦(購自某超市);GBW08675甲基汞溶液標準物質、GBW(E)081524乙基汞溶液標準物質(均由中國計量科學研究院提供);甲醇為色譜純;硝酸、鹽酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀、硼氫化鉀、乙酸銨、-半胱氨酸鹽酸均為分析純;實驗用水為一級超純水。

1.2　儀器與設備

SA-20液相色譜儀，AFS-8230原子熒光光度計(北京吉天儀器);AR224CN電子天平(美國奧豪斯);超聲波提取器;冷凍離心機等。

1.3　實驗方法

準確稱取均勻樣品1 g於15 mL塑料離心管中，加入5 mol/L的鹽酸溶液10 mL，放置過夜。於室溫下超聲水浴提取1 h，再於4 ℃的冷凍離心機中以8 000 r/min轉速離心15 min。準確吸取2.0 mL上清液至10 mL刻度試管中，逐滴加入6 mol/L的氫氧化鈉溶液調節樣液pH為2～7。加入10 g/L的-半胱氨酸溶液0.1 mL，用超純水定容至刻度，過0.45 μm有機係濾膜，上機待測，同時做空白試驗。稱取與試樣處理相同的試樣量，按照與試樣處理相同的操作步驟進行空白試驗。

1.3.1　標準溶液配製

(1)標準儲備液配製。準確吸取1 mL甲基汞溶液標準物質用超純水稀釋定容至50 mL容量瓶中，配製成濃度為

1 000 ng/mL的甲基汞標準儲備液。準確吸取1.31 mL甲基汞溶液標準物質用超純水稀釋定容至100 mL容量瓶中，配製成濃度為800 ng/mL的乙基汞標準儲備液。

(2)標準工作係列配製。準確吸取0.2 mL甲基汞儲備液(1 000 ng/mL)、0.25 mL乙基汞儲備液(800 ng/mL)於10 mL容量瓶中，用流動相稀釋定容，配製成甲基汞、乙基汞濃度均為20 ng/mL的混合標準溶液。分別吸取0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL和1.00 mL混合標準溶液至7支10 mL刻度管中，用流動相定容至2 mL，配製成濃度為0.5 ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、4.0 ng/mL、6.0 ng/mL、8.0 ng/mL、10.0 ng/mL的混合標準工作係列溶液。

1.3.2　儀器參考條件

(1)液相色譜條件。色譜柱：C18分析柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);C18預柱(10 mm×4.6 mm，5μm);流動相：5%甲醇+0.06 mol/L乙酸銨+0.1% -半胱氨酸;流速：1.0 mL/min;進樣體積：100 μL。

(2)原子熒光條件。光電倍增管電壓：285 V;原子化器高度：8 mm;燈電流：35 mA;載氣流量：500mL/min。

2　結果與分析

2.1　線性範圍及檢出限

將配製的標準工作係列溶液在上述儀器條件下測定，以甲基汞標準係列點濃度為橫坐標，對應的色譜峰麵積為縱坐標，繪製標準曲線。甲基汞在0.5～10.0 ng/mL範圍內線性關係較好，其曲線方程為=40 918-12 433，相關係數為0.996 5。以3倍信噪比(/=3)計算檢出限為0.111 ng/mL，根據國標方法GB 5009.17—2014計算得此方法檢出限為0.006 mg/kg，滿足水產食品中甲基汞的分析要求。

2.2　回收率與重複性

準確稱取18份陰性大蝦樣品，分別添加低、中、高3種濃度水平的標準溶液，按照上述試樣處理與儀器條件將低、中、高各個濃度水平平行測定6次，計算方法的回收率與重複性，結果見表1。該方法的回收率為85.7%～98.9%，重複性為2.1%～3.5%。

2.3　精密度與穩定性試驗

取濃度為10.0 ng/mL的混合標準工作溶液在上述儀器條件下連續測定6次，根據色譜峰麵積計算得為4.8%，表明該方法精密度良好。取濃度為10.0 ng/mL的混合標準工作溶液，分別在0 h、12 h、24 h時上機測定，峰麵積依次為648 857.0、672 194.1、638 807.4，表明該方法穩定性良好。

3　結論

本文參照GB 5009.17—2014，建立的LC-AFS法測定水產食品中甲基汞的檢測方法，標準曲線的線性關係良好，方法的檢出限、回收率、重複性與穩定性等符合相關標準規範的要求，能夠滿足實驗室對水產食品中甲基汞的檢測需求，可為市場監管部門加強魚蝦等水產食品中甲基汞風險監測提供技術支持。

參考文獻

[1]曾慶文,江暉,李丹,等.利用AFS和LC-AFS測定魚肉中的總汞與甲基汞[J].分析試驗室,2015,34(11):1259-1262.

[2]肖亞兵,崔穎,陳文碩,等.液相色譜-原子熒光法測定魚肉中有機汞形態[J].食品研究與開發,2014(21):120-122.

[3]薑帥,李學偉,秦秀榮,等.淺談食品中甲基汞的測定[J].信息周刊,2019(5):473.

[4]李浩洋,汪海濱,鄧建,等.LC-AFS法測定水產飼料中的甲基汞[J].食品工業,2019,40(4):322-325.

[5]中華人民共和國國家衛生健康委員會,國家市場監督管理總局.世界杯賽程預測國家標準食品中總汞及有機汞的測定:GB 5009.17—2014[S].北京:中國標準出版社,2016.