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甘露子提取物的不同提取方法及其體外抗氧化活性研究

2021-08-18 23:05:00 來源:

　　甘露子提取物的不同提取方法及其
　　體外抗氧化活性研究
　　劉洪岩，王 巍，劉曉敏
　　（長春工業大學人文信息學院，吉林長春 130122）
　　作者簡介∶劉洪岩（1982—），男，漢族，吉林長春人，本科，助理實驗師。研究方向∶天然藥物成分活性研究，藥品質量標準及藥品生產工藝研究。
　　王巍（1982—），女，漢族，吉林舒蘭人，碩士，副教授。研究方向∶化學製藥教學。
　　劉曉敏（1999—），女，漢族，內蒙古通遼人，本科在讀，研究方向∶天然藥物成分活性研究。
　　摘 要∶為探究甘露子提取物的體外抗氧化活性，本文將甘露子提取物用水提煎煮法、回流醇提法及超聲醇提法進行提取，然後采用薄層色譜法對水提物中糖類化合物進行定性檢測，黃酮類化合物通過其顏色反應專屬性實驗進行定性檢測，采用 DPPH和ABTS 自由基清除實驗對提取物進行體外抗氧化活性研究。結果表明，甘露子水提物和醇提物都具有體外抗氧化活性，其中超聲醇提法提取物的體外抗氧化活性優於回流醇提法、煎煮水提法。由於甘露子具有藥食同源性，本研究可為後續食品、保健品領域的開發奠定一定的基礎。
　　關鍵詞∶甘露子;提取方法;體外抗氧化活性
　　甘露子是唇形科植物甘露子的塊莖，又叫草石蠶、地蠶、 土人參。主要分布於長江附近各省，其具有祛風清熱、利水、 活血化瘀等功效，用於治療風熱感冒，黃疸等症狀，外用可 治療毒蛇咬傷。甘露子的主要化學成分為糖類、黃酮類化合 物，有良好的抗腫瘤、抗炎、抗疲勞，提高免疫力等藥理作用。
　　黃酮類化合物具有多種生物活性功能，其中抗氧化作用 尤為明顯。甘露子中含糖量豐富（鮮品中水蘇糖含量在13% 左右），水蘇糖是一種低聚四糖、穩定、甜度低、熱量低， 具有促進腸道菌群平衡生理功效『勾。由於國內對甘露子提 取物的抗氧化活性研究較少，因此本實驗通過煎煮水提法提 取糖類化合物，回流醇提法、超聲醇提法提取黃酮類化合物, 糖類化合物通過薄層層析法進行定性檢測，黃酮類化合物通 過其顏色反應專屬性實驗進行定性檢測。3種提取方法的甘 露子提取物通過ABTS和DPPH•清除率實驗兩種方法進行 體外抗氧化活性研究，確定甘露子提取物中水蘇糖和黃酮類 化合物的體外抗氧化活性。隨著生活水平的提高，具有抗氧 化活性等保健功效的食品藥品備受關注。為此，本文旨在對 甘露子提取物的體外抗氧化活性進行研究，以更好地開發利 用甘露子E
　　1材料與方法
　　1.1材料及試劑
　　鮮甘露子：挑選去除雜質，搶水洗，淋幹備用。
　　無水乙醇、過硫酸鉀、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、維生素C、 二苯基-2-三硝基苯胱、2-聯氮-二（3-乙基-苯並唾哩-6- 磺酸）二俊鹽、鎂粉、濃鹽酸、乙醇、三氯化鐵、濃硫酸、 乙酸乙醋、甲醇、冰醋酸、二苯胺、苯胺、丙酮、85%磷酸、 葡萄糖對照品、蔗糖對照品、棉籽糖對照品、水蘇糖對照品、 均為國產分析純。
　　1.2儀器
　　2 000 W電爐子（北京光明）、BHS-8220A型幹燥箱 （上海科技）、TZ-120S6型超聲波清洗器（方奧微電子）、 ZE-52型旋轉蒸發儀（山海雅榮）、DAA428S型電子天平（賽 多利斯）、W3新世紀紫外可見分光光度計（北京普析）、 PTZ-9C型酸度計（上海科技）＞ 200- 1 000 hL型移液器（大 龍興創）。
　　1.3實驗方法
　　1.3.1甘露子提取物的提取
　　①水提煎煮法。取新鮮甘露子0.5 kg,加4 000mL水提 煎煮3次，每次lh,合並醇提液，濃縮至每lg甘露子提 取物中含有10 g主藥。②回流醇提法。取鮮甘露子0.5 kg, 加90%乙醇800 mL回流提取3次，每次1 h,合並提取 液，回收溶劑，醇提液濃縮至每lg甘露子提取物中含有 10 g主藥。③超聲醇提法。取鮮甘露子0.5 kg,加90%乙醇 800 mL超聲提取3次，每次lh,回收溶劑，濃縮至每lg 甘露子提取物中含有10 g主藥。
　　1.3.2甘露子提取物中糖類化合物和黃酮類化合物的定性 檢測
　　（1）薄層層析法定性檢測甘露子提取物中糖類化合物。
　　①配製對照液。精密稱量葡萄糖、蔗糖、棉籽糖、水蘇糖對 照品，分別加純化水溶解，配製成濃度為5mg/mL的對照 液。②配製供試液。甘露子提取物分別稀釋成5 mg/mL的 供試品。③配製顯色劑。取5 mLH3PO4^ 25mL丙酮、0.5 g 二苯胺、0.5 g苯胺混合搖勻。④點樣。各取20jiL對照液 和供試品點在矽膠G板上。⑤展開。以乙酸乙醋-MaOH- 水-HAc（3 ： 2 ： 1 ： 2）為展開劑，展開，取出，晾幹， 噴以顯色劑在薄層上，於105 P烘箱內加熱至斑點顯現，取出在日光下檢視叫
　　(2)甘露子提取物中黃酮類化合物定性檢測。①供試 液的製備。3種提取方法下提取液1 mL,分別加10 mL乙 醇，搖勻，備用。②HCl-Mg反應。量取供試液0.5 mL, 1 mLMeOH,在加0.1 gMg充分進行振搖，加入3滴HC1, 搖勻。③絡合反應。取供試液0.5 mL, 1 mLMeOH,加 入l%FeC132滴，搖勻。④濃H2SO4反應。量取供試液 0.5 mL, 1 mLMeOH,加濃H2SO4 2滴，搖勻。⑤強堿溶液 反應。取供試液0.5 mL, 1 mLMeOH,加4%的NaOH溶液 1 mL,搖勻閔。
　　1.3.3甘露子提取物體外抗氧化活性實驗
　　供試液配製：精密量取各方法下甘露子提取物，分別加
　　MeOH配製成100 mg/mL的樣品溶液，然後稀釋成1 mg/mL、 10 mg/mL、20 mg/mL-. 30 mg/mL 和 40 mg/mL 的樣品溶液。
　　(1) DPPH自由基清除實驗。①配製DPPH反應液。取 3.0 mgDPPH, 60 mL MeOH,超聲5 min溶解，避光放置備用。 ②空白吸光度測量■取2mLDPPH反應液於比色皿中，加ImL MeOH搖勻，在519 nm波長處測量吸收光度值A„。
　　③供試品吸光度測量。取2mLDPPH反應液於比色皿中， 加ImL供試液搖勻，避光0.5 h,在519 nm波長處測量吸收光度值A,測量3次平行實驗。ROS清除率(%)=(A„-A)/
　　A0xlOO%[6]o
　　(2) ABTS自由基清除實驗。①配製ABTS原液。取 0.012 2 g ABTS,用3 mL純化水溶解，搖勻。②配製 K2S2O8原液。稱取0.003 g K2S2O8,加4.3 mL純化水溶解， 搖勻■③配製ABTS反應液。取上述兩種原液各3 mL混合 均勻，避光反應12h,用磷酸鹽緩衝液(pH7.4)稀釋10倍， 避光備用。④空白吸光度測量。取2.4 mLABTS反應液加
　　入比色皿中，加0.6 mLMeOH搖勻，在734 nm波長處測量吸收光度值A。⑤供試品吸光度測量。取2.4 mLABTS反 應液加入比色皿中，加0.6 mL供試液搖勻，避光0.5 h,在 734 nm波長處測量吸收光度值A,測量3次平行實驗。⑥ROS 清除率(%)=內辦)/4/100%口。
　　2結果與分析
　　2.1甘露子提取物的提取
　　實驗通過煎煮水提、回流醇提、超聲醇提得到甘露子提 取物，各提取方法的提取物密度見表1。
　　2.2甘露子提取物中糖類化合物和黃酮類化合物的定性 檢測
　　本實驗通過薄層層析法定性檢測甘露子裏水提物中是否 有糖類化合物，釆用理化定性檢測甘露子醇提物中是否含有 黃酮類化合物。由圖1知，煎煮水提法甘露子提取物中糖類 化合物的定性檢測可知，甘露子的水提取物薄層色譜法呈陽 性，從而證實煎煮水提甘露子提取物中含有葡萄糖、蔗糖、 棉籽糖、水蘇糖。由表2知，通過甘露子提取物中黃酮類化 合物定性檢測結果，證實了含有黃酮類化合物。
　　2.3甘露子提取物體外抗氧化活性實驗
　　本實驗通過ABTS和DPPH•清除率兩種方法進行甘 露子提取物體外抗氧化活性實驗，利用VitC進行陽性實 驗對照，水提物利用水蘇糖進行對照實驗，驗證甘露子水 提物、醇提物是否有抗氧化活性，並比較水提物、醇提物 清除自由基活性的大小。由圖2知，通過經典抗氧化物質
　　Vite陽性對照實驗，驗證了水提和醇提甘露子提取物體外 抗氧化活性的有效性，結果表明，甘露子水提物、醇提物 都具有體外清除自由基活性，超聲醇提物清除自由基活性 優於其他方法提取物清除活性，隨著濃度增大清除能力增 強。綜上所述，甘露子水提物與醇提物都具有體外抗氧化 活性。
　　3結論
　　本文首次釆用DPPH和ABTS對甘露子水提提取物和醇 提提取物進行體外抗氧化活性研究。實驗結果證實了水提物 和醇提物對自由基都有良好的清除能力。相同濃度甘露子水 提物清除自由基的能力低於醇提物清除能力，超聲醇提法優 於回流醇提法，且濃度的增加清除能力增強。綜上所述，甘 露子提取物具有良好的體外抗氧化活性，為後續釆用秀麗線 蟲進行體內抗氧化活性研究奠定實驗基礎，也可將其藥理活 性開發應用到食品和保健品中。
　　參考文獻
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