高效液相色譜法測定保健食品中一新型他達拉非類似物的含量

2021-08-18 22:05:23 來源:

　　楊麗蓉12，趙海鵬2，齊衍超2，陳燕2，楊釗1.3

　　（1.青島大學藥學院，山東青島 266071;2.濰坊市檢驗檢測中心，山東濰坊 261000;

　　3.青島市食品藥品檢驗研究院，山東青島 266071）

　　摘要∶目的∶應用高效液相色譜法測定了保健食品中非法添加的一新型他達拉非類似物（ 3-羥丙基去甲基他達拉非）的含量。方法∶采用島津 Shim-pack GIST C1。色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相A為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙

　　腈（60∶20 ∶20），流動相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8;46;46）、梯度洗脫，檢測波長230 nm，結果·3-羥丙基去甲基他達拉非濃度在11.53～92.24μg/mL範圍內線性關係良好（r=1.000 0），平均回收率（n=6）為99.08??結論∶建立了保健食品中3-羥丙基去甲基他達拉非含量測定的方法。

　　關鍵詞∶3-羥丙基去甲基他達拉非;保健食品;HPLC

　　近年來，部分不法分子將磷酸二酯酶5抑製劑 (Phosphodiesterase 5, PDE-5)類化合物非法用於提高免疫力、緩解體力疲勞的保健食品中，以獲取暴利叫這類非法添加的化學物質若長期使用，非但起不到強身健體效果，甚至會損害人體健康[2]«國家食品藥品監督管理局頒布的現行檢驗標準中涉及11種PDE-5選擇性抑製劑[3],為規避檢査, 不法生產者釆取添加標準外的物質囹。

　　本文釆用HPLC-DAD進行緩解體力疲勞類保健食品中非法添加篩査時，發現有1個未知結構的他達拉非類似物，經過正相矽膠薄層色譜分離純化得到目標物後，用HPLC- MS/MS得到其相對分子質量和結構碎片，結合高分辨質譜、核磁共振氫譜數據及文獻資料電經標準品對比確認，最終鑒定了目標物的結構為 6-(benzo[d][ 1,3]dioxol-5-yl)-2-(3- hydroxypropyl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydropyrazino[ 1, 2，:1,6] pyrido[3,4-b]indole-l,4-dione(結構式如圖 1 所示)。本實驗釆用高效液相色譜法實現了對保健食品中該物質的定量檢測。

　　1資料與方法

　　1.1 一般資料

　　高效液相色譜儀(Ultimate3000型，Thermo)；超聲波清洗器(KQ-700VDE型，昆山超聲儀器有限公司)；XSE- 205DU 電子天平(METTLER TOLEDO )»

　　甲醇(色譜純)，乙臘(色譜純)，三乙胺(國藥集團化學試劑有限公司，99.0%),磷酸(國藥集團化學試劑有限公司，85.0%) , 3-羥丙基去甲基他達拉非對照品(加拿大 TLC藥物標準品有限公司，商品名：Tadalafil Impurity 37, 純度：99.4%)；保健食品(批號：20190425)為濰坊市奎文區市場監督管理局提供的樣品。

　　1.2方法

　　1.2.1色譜條件

　　Ultimate3000型高效液相色譜儀，色譜柱：島津Shimpack GIST Ci8 色譜柱(4.6 mmx250 mm, 5 gm)；進樣量： 10 gL；柱溫：35 °C；檢測波長：230 nm,二極管陣列檢測器；流動相A為磷酸三乙胺溶液(取三乙胺7 mL用水稀釋至 1 000 mL,用磷酸調pH至2.8)-甲醇-乙臘(60 : 20 : 20), 流動相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙臘(8 : 46 : 46), 梯度洗脫；1 - 12 min,流動相A為100%； 25〜30 min, 流動相B為100%； 31〜36 min,流動相A為100%；流速： 1.0 mL/mino

　　1.2.2溶液的製備

　　(1)供試品溶液製備。精密稱取lg供試品，置於50mL 容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15 min,用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液即得。

　　(2)對照品溶液製備。精密稱取3-羥丙基去甲基他達拉非對照品9.28 mg(純度為99.4%),於100 mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，製成質量濃度為92.24 ng/mL 的對照品溶液。

　　2結果與分析

　　2.1線性關係

　　精密吸取1.2.2 (2)對照品溶液2.5 mL、5.0 mL, 10.0 mL 和15.0 mL,分別至20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，按“1.2.1”色譜條件進行測定，以濃度為橫坐標、峰麵積為縱坐標，計算得線性方程為Y=33.677X+14.4，r=1.0000，,表明3-羥丙基去甲基他達拉非濃度在11.53〜92.24 ug/mL範圍內與峰麵積呈良好線性關係。

　　2.2精密度試驗

　　取同一供試品溶液，按“121”項下色譜條件下連續進樣6次，3-羥丙基去甲基他達拉非含量的RSD為0.3%。

　　2.3加樣回收率試驗

　　精密稱取已知含量的同一批保健食品(20190425)6份各 0.5 g,分別加入3-羥丙基去甲基他達拉非對照品溶液10 mL (濃度為0.115 3 mg/mL)按1.2.2 (1)製備供試品溶液，按 “1.2.1”色譜條件進行測定，進行回收率考察，平均回收率為 99.08%, RSD為1.10%(戶6),表明本方法測定3-羥丙基去甲基他達拉非準確率較高(表1)。

　　2.4樣品含量測定

　　按1.2.2 (1)方法製備供試品溶液，按"1.2.1”項條件進行測定，計算3-羥丙基去甲基他達拉非的含量，20190425 號樣品含量為2.12mg/g。

　　3討論與結論

　　本實驗針對最新發現的一種新型他達拉非衍生物3-羥基丙基去甲基他達拉非，釆用高效液相色譜法實現了對保健食品中該物質的定量檢測。該方法填補了現行標準對保健食品中非法添加該物質檢測的空白，為完善食品中非法添加化學藥品數據庫，保障人們飲食安全提供了技術支持。

　　參考文獻

　　[1]倪瓚，張崇生,UPLC-MS/MS法測定補腎抗疲勞中成藥及保健食品中非法添加的9種PDE-5抑製劑及其衍生物[J], 中南藥學,2018,16(9):1295-1299.

　　[2]蔡振世，徐端瓊，盧文斌.補腎壯陽類保健品中非法添加物檢測方法在國內的研究進展[J],海峽藥學2016,28(7): 61-64.

　　[3]國家食品藥品監督管理局.藥品補充檢驗方法和檢驗項目批準件(批準件編號 2009030)[EB/OL].(2009-12-07)[2021-03-17]. h蝦://www.doc88.com^>918909627440Lhtml?t=l.

　　[4]黃芳，吳惠勤，黃曉蘭，等.高效液相色譜-串聯質譜法同時測定保健品及中成藥中非法添加的17種壯陽類化學藥 [J],色譜,2016,34(3):270-278.

　　[5]申國華，劉曉普.中成藥中非法添加他達拉非新型衍生物的檢測及結構鑒定[J].中國現代應用藥學>2020,37(2): 192-196.

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