超高效液相色譜法測定茶葉中的兒茶素

2021-08-15 21:40:35 來源:

　　超高效液相色譜法測定茶葉中的兒茶素

　　崔利輝 '.胡娜 2，李璐琦

　　（1.楊淩職業技術學院，陝西楊淩 712100;2.銅川市食品藥品檢驗檢測中心，陝西銅川727000;

　　3.西北農林科技大學生命科學大型儀器共享平台，陝西楊淩 712100）

　　基金項目：2020年楊淩職業技術學院校內基金項目'‘食品中多種抗氧化劑的快速檢測研究"（ZK20-61）。作者簡介：崔利輝（1987—）,男，漢族，陝西楊淩人，碩士，助教。研究方向：食品質量安全檢測。

　　摘要：建立超高效液相色譜法測定茶葉中 7種兒茶素類茶多酚，通過調整流動相乙 <-0.1%甲酸溶液梯度，優化了分離度，進行了加標回收試驗，結果表明，在 10 - 100 ug/mL範圍內， 7種兒茶素的峰麵積呈現良好的線性關係，相關係數不低於 0. 999,檢出限為 6.1 ~ 97.8 mg/kg,加標回收率 93. 1 ~ 96.8%,相對標準偏差在 1. 7% ~ 3.3%。該方法具有分析時間短，回收率、精密度高的優點。

　　關鍵詞∶超高效液相色譜;兒茶素;茶葉

　　茶葉中富含多種營養成分『氣有效成分的含量和種類對茶葉的品質至關重要。茶葉中主要的抗氧化活性成分為茶多酚伊勺，約占茶葉幹重的20%〜30%。除此之外，茶多酚還具有抗氧化、抗癌、抑菌、降壓和降脂團等保健功效。茶多酚主要包括黃酮類、黃酮醇、兒茶素類、黃青素類、酚酸類等物質，其中兒茶素類含量最高，占茶多酚的 60%〜80%。兒茶素回包括兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素、沒食子酸和咖啡因等。

　　茶多酚中兒茶素類化合物的檢測方法多為液相色譜法，如GB/T 8313—2018,高效液相色檢測方法分析時間較長，試劑消耗量較大。本研究在此基礎上，利用超高效液相色譜法建立了同時測定7種兒茶素茶多酚定量方法，方法分析速度快，操作簡單，可用於茶葉中兒茶素類的測定。

　　1材料與方法

　　1.1儀器與設備

　　LC30A超高效液相色譜儀（日本島津公司）、MS3渦旋震蕩器（德國IKA公司）、Allegra64R低溫高速離心機（美國貝克曼公司）、ME204電子天平（瑞士梅特勒公司）。

　　1.2材料與試剤

　　乙睛、甲醇（HPLC級，美國天地），甲酸（HPLC級，阿拉丁），水（實驗室自製超純水）。對照品：沒食子酸、表沒食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、表兒茶素沒食子酸酯（純度>98%，北京壇墨質檢）

　　1.3實驗方法

　　1.3.1標準溶液的製備

　　混合標準溶液：準確稱取各標準物50 mg,混合後用甲醇溶解稀釋定容至50 mL,配製成濃度為l.OOmg/mL的混合標準儲備液；分別取1 .OmL、2.0 mL、5.0 mL、8.0 mL 和10.0 mL儲備液用甲醇稀釋定容至100 mL,配製成濃度為 10.0 ng/mL> 20.0 ng/mL、50.0 p.g/mL> 80.00 ng/mL 和 100.0 ng/mL係列混合標準工作液。

　　1.3.2樣品處理

　　稱取約0.2 g（0.000 1 g）茶葉樣品於10 mL離心管中，加入5 mL 70%甲醇，40 °C下超聲提取30 min（每間隔10 min 渦旋1 min） , 8 000 r/min離心5 min,重複提取1次，合並兩次溶液於10 mL容量瓶，混勻後吸取l.OOmL用水1 ： 1 稀釋後過0.22 gm尼龍濾膜，液相色譜測定。

　　1.4色譜條件

　　色譜柱：Shim-pack XR-ODS HI（2 mm><75 mm, 1.6 pm）；流速：0.5 mL/min；進樣量5 gL,柱溫40 °C；流動相A： 0.1%甲酸乙臘溶液，流動相B： 0.1%甲酸水溶液；洗脫程序（A） : 0 ~ 1 min, 5% 升至 95%, 4.5 min 維持 95%； 7.0 min 降至70%維持至8 min；檢測波長：280 nm；檢測器釆集頻率：100 ms；外標法定量。

　　2結果與分析

　　2.1洗脫程序優化

　　本文釆用的超高效液相色譜法測定茶葉中兒茶素類和咖啡堿，色譜峰較窄，為獲得較高的重複性，設定的紫外檢測器檢測頻率為100 ms,進樣量5 hL,以保證的每個峰的釆集點數多於20個，且峰較窄，更有利於分離；乙臘和甲醇相比較，乙睛能有效的降低柱壓，得到更窄的色譜峰，響應強度更高，有利於提升檢測靈敏度，能較好的分離7種化合物，分析時間小於8 mm,色譜圖如圖1所示。

　　2.2標準曲線及定量限

　　按照確定的樣品預處理方法和液相檢測條件，依次測定濃度 10.0 mg/L> 20.0 mg/L> 50.0 mg/L、80.00 mg/L 和 100.0 mg/L,混合標準係列工作溶液，得到線性回歸方程，線性關係良好。以20 mg/L濃度的混標標準品溶液進行液相分析，以各目標峰的信噪比（SIN 2 3）分別確認7種兒茶素的檢出限，如表1表示。

　　2.3準確度和精密度

　　選擇樣品測定6次，計算目標物含量後，於0.2 g樣品中加入0.2 mL 100 mg/mL,按確定的方法進行處理(”=6), 計算加標回收率和精密度，見表2。

　　3結論本研究基於超高效液相色譜法建立了一種處理簡單、快速、準確定量分析茶葉中沒食子酸、表沒食子兒茶素、兒茶素、咖啡堿、表兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯和表兒茶素沒食子酸酯7種茶多酚方法，與GB/T 8313—2018相比, 優化了色譜條件，提高了檢測靈敏度，縮短了檢測分析時間。

　　結果顯示，本方法可以在8 min內完成7種茶多酚的檢測，具有良好的準確度和精密度，在10〜100mg/L範圍內，信號響應值呈現良好的線性關係,線性相關係數大於0.999, 檢出限為6.1〜97.8 mg/kg,加標回收率93.1%〜96.8%, 相對標準偏差在1.7〜3.3%o

　　參考文獻

　　[1]王麗麗，林清霞，宋振碩，等.分光光度法測定茶葉中總黃酮含量[J],茶葉學報,2021,62⑴:1-6.

　　[2]王奕霏，王珊姍，陳豐，等.高效液相色譜法測定茶葉中有效成分含量的方法綜述[J],化工設計通訊,2020,46(6): 156-158.

　　[3]林清霞，王麗麗，楊軍國，等.基於DPPH法的茶葉兒茶素類抗氧化譜效關係研究[J],福建農業學報,2020,35(2): 210-216.

　　[4]白亞欣，侯彩雲.幾種茶葉生化成分及其抗氧化活性分析[J],中國食物與營養,2020,26(1):31-36.

　　[5]張建勇，王偉偉，王蔚，等.茶多酚■保健及藥理功能的應用[J],中國茶葉,2020,42(12):9-15.

　　[6]王芬，裴會敏，陳誌，等.茶多酚■功能及代謝機理研究進展[J].現代食品,2020(14):21-22.

世界杯賽程預測新動向

食品產品責任糾

同心同德謀良策

舞鋼市市場監管

【食安直播課】

《世界杯賽程預測最佳

超高效液相色譜法測定茶葉中的兒茶素

熱點推薦

特醫食品不是藥，卻是臨床治療的關鍵支撐

全十紅紅稗餅幹|中秋團圓，回家必備

和汪氏蜂蜜共同來普及蜂蜜結晶現象

拿坡海開啟西餐加盟新潮流, 大眾化家庭小西餐成未來新趨勢