反相高效液相色譜法測定食品中的甜蜜素

2021-08-15 17:11:15 來源:

　　反相高效液相色譜法測定食品中的甜蜜素

　　劉曉燕

　　（北京世紀科環生態農業研究院，北京 101102）

　　摘要∶建立高效液相色譜法檢測食品中甜蜜素的分析方法。利用甜蜜素在強酸環境下經過衍生、萃取等工藝處理，采用高效液相色譜分離。結果表明，在1.0～10.0 mg/L範圍內，甜蜜素標準溶液線性回歸方程 y=3 896.1x+1 668.3，相關係數為0.999 3。樣品添加回收率為84.3??105.0??測定結果的相對標準偏差（n=6）1.66??1.81??檢出限為0.5 mg/kg。該方法快速、簡便，在食品檢驗中具有實際應用價值。

　　關鍵詞∶甜蜜素;衍生;液相色譜

　　甜蜜素，化學名為環己基氨基磺酸鈉，是一種應用廣泛的食品添加劑叫我國國家標準《世界杯賽程預測國家標準食品添加劑使用標準》(GB 2760—2014) [2]中對甜蜜素的添加種類、添加量做了規定，但市場上超量、超範圍使用甜蜜素的情況經常發生。目前《世界杯賽程預測國家標準食品中環己基氨基磺酸鈉的測定》(GB 5009.97—2016) [3]的檢測方法主要是液質串聯質譜法、氣相色譜法和液相色譜法。本文在酸性條件下對樣品進行提取，利用次氯酸鈉衍生將甜蜜素轉化為N, N-二氯環己烷，以正庚烷萃取後用高效液相色譜法測定，減少了幹擾，方法簡單、快速、檢出限低。

　　1材料與方法

　　1.1儀器與試劑

　　儀器：島津LC-20AT高效液相色譜儀配二極管陣列 (PDA)檢測器；分析天平；恒溫水浴鍋；離心機；0.22呻針頭微孔濾膜過濾器；超聲波振蕩器；艾傑爾ASB-C18色譜柱：250 mmx4.6 mm, 5.0 pm。

　　試劑：甜蜜素標準品(10tng/mL)；硫酸、次氯酸鈉、鹽酸、碳酸氫鈉為分析純試劑；乙臘、正庚烷、甲醇為色譜純試劑；水為超純水。

　　1.2供試樣品

　　麵包，購自超市。

　　1.3色譜條件

　　LC檢測器為PDA；實驗過程釆用乙臘+水(70%+30%) 以1.0 mL/min的流速洗脫；色譜柱為艾傑爾ASB-C18 (250mmx4.6mm, 5.0)xm)；在波長為 314 nm、柱溫為 40 °C 的條件下進樣；進樣量為10pL。

　　1.4標準溶液的製備

　　準確移取濃度為10 mg/mL的標準物質溶液1.0 mL,用水定容至10 mL配製成甜蜜素標準儲備液1 000 ng/mLo

　　甜蜜素標準曲線的製備，準確移取甜蜜素標準中間液 0.10 mL, 0.20 mL、0.50 mL、0.80 mL 和 1.0 mL 於 10 mL 容量瓶中製成濃度為 1.0 mg/L、2.0 mg/L, 5.0 mg/L、8.0 mg/L 和10 mg/L的標準使用溶液，用於衍生後，測定。

　　1.5標準曲線工作液的衍生

　　將製備好的標準曲線工作液10 mL進行衍生。先加入5% 次氯酸鈉溶液2.0 mL後，再加入正庚烷6.0 mL,硫酸溶液 3.0 mL,渦旋混句靜止後待分層，除去水層，在正庚烷層加入5%碳酸氫鈉溶液25 mL,渦旋混勻靜止取上層經有機濾膜(0.22 pm)過濾，上機檢測。

　　1.6樣品的提取

　　稱取5 g樣品(精確到0.01 g)於塑料離心管中，準確加入25mL 0.1 mol/L的HCL溶液，超聲30 min後加入5 mL 正己烷劇烈振蕩用於除去樣品中的油脂，5 000 r/min離心 5 min,取出水層後備用。

　　1.7樣品的衍生

　　取樣品10 mL,製備後按照標準曲線衍生方法進行同樣操作。渦旋混勻靜止取上層經有機濾膜(0.22 pm)過濾，上機檢測。

　　2結果與分析

　　2.1提取溶液的選擇

　　直接用水提取會提取和目標物相似的結構化合物，衍生後會出現雜亂峰影響判斷。實驗發現酸化水溶液和正己烷的混合溶液提取效果最好，部分樣品內含有油脂，在提取樣品的過程中會產生油脂包裹化合物的情況。以麵包樣品為基質添加水平為2.5 mg/kg的標準溶液進行實驗，不同溶劑的回收率差異見表1。

　　2.2色譜條件的選擇

　　將甜蜜素的衍生物標準溶液在紫外分光光度計上 200〜350 nm的範圍內進行掃描測定，綜合考慮吸收峰值、幹擾峰等因素，最終選取檢測波長為314皿。此峰值基線穩定、吸收值高且峰型滿意。

　　流動相的選擇，比較了不同比例的甲醇：水(85%+15%,

　　V: V)、乙臘：水(90%+10%,V : V)、甲醇:水(70%+30%,

　　V： V)、乙精：水(70%+30%, V ： V),發現乙睛:水 (70%+30%, V : V)雜質幹擾小，基線處於平穩的狀態。經液相色譜分離後，甜蜜素的衍生物N,N-二氯環己胺能得

　　到良好的分離，保留時間為6.895 min,峰形滿意。如圖1 所示。

　　2.3線性範圍和檢出限

　　對衍生後 1.0 mg/L、2.0 mg/L> 5.0 mg/L、8.0 mg/L 和 lOmg/L甜蜜素標準工作曲線進行測定，以峰麵積為縱坐標，濃度為橫坐標繪製標準曲線。標準曲線如圖2所示。從標準曲線上得出甜蜜素衍生物標準溶液的峰麵積與濃度在1.0〜10 mg/L範圍內呈線性關係，其線性回歸方程戶3 896.1X+1 668.3,相關係數為0.9 993,外標法定量，方法的檢出限為0.5 mg/kgo

　　2.4樣品測定

　　從圖3可以看出，麵包中不含有甜蜜素衍生物，在 2.5〜5.0 min有較強的溶劑峰，基線比較平穩，沒有其他幹擾。

　　2.5方法準確度和精密度

　　稱取已處理的樣品5.0 g,添加100.0 mg/kg的甜蜜密標準中間溶液。平行測定6次，測定數據見表3,結果表明該麵包樣品加標回收率範圍84.3%〜105.0%,相對標準偏差(RSD)在 1.66% 〜1.81%。

　　3結論

　　本實驗在酸性條件下對樣品進行提取，利用次氯酸鈉將食品中的甜蜜素轉化為N,N-二氯環己胺，經正庚烷提取後用高效色譜法測定。此方法前處理操作簡單，結果穩定且準確性高、重現性好，適用於食品中甜蜜素的檢測。

　　參考文獻

　　[1]邵鐵峰，李雪琥，陳勤偉，等.高效液相色譜法測定酒中的甜蜜素[J],中國釀造.2004(12):31-32.

　　[2]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.食品國家安全食品添加劑使用標準:GB 2760—2014[S].北京：中國標準出版社2014.

　　[3]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會.食品安全國家標準食品中環己基氨基磺酸鈉的測定:GB 5009.97- 2016[S],北京：中國標準出版社,2017.

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