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HPLC法測定市售炮製輔料醋中川芎嗪的含量

2021-05-24 11:35:01 來源: 世界杯賽程預測 導刊

HPLC法測定市售炮製輔料醋中川芎嗪的含量
　　本文目的為測定不同品種市售炮製輔料醋中川芎嗪的含量。方法 采用HPLC法測定市售醋中川芎嗪的含量，色譜條件為流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20µL。結果 川芎嗪在0.29300µg·mL-1範圍內線性關係良好,回歸方程為Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，平均回收率為98.08%，RSD值為1.56%（n=6）。結論 本研究建立的方法操作簡便、準確性好、靈敏度高,適用於市售炮製輔料醋的質量控製。
　　食醋中氨基酸的種類多達18種，具有促進胃液分泌，降低血脂和膽固醇，延緩衰老等功能 [1]。近年來，炮製輔料用醋缺少嚴格的藥用標準，有文獻測定[2]食醋中苯乳酸的含量，為炮製輔料醋的質量控製提供了依據，還有文獻[3]用HPLC的方法測定了鎮江香醋中的川芎嗪，認為川芎嗪主要是由微生物的發酵而產生的，美拉德反應是川芎嗪含量增加的主要原因。但是，川芎嗪能否作為炮製輔料醋的質量控製指標未見報道。所以，本實驗采用HPLC法測定13種市售炮製輔料醋中川芎嗪的含量，結合釀造原料和工藝分析結果，為炮製輔料用醋品種的選擇和藥用標準的建立提供依據。
　　儀器與材料
　　Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國Agilent公司）； KQ-250E型醫用超聲波清洗機（昆山市超聲儀器有限公司）；MS105DU型十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；高速冷凍離心機（上海市浦東新區新金橋路27號7號樓），pH試紙（天津市金達化學試劑有限公司）。川芎嗪對照品（批號：110817-200305，中國藥品生物製品檢定所），其餘試劑均為分析純。13種市售炮製輔料醋：山西紫林陳醋（批號：20200531）；紫林原釀陳醋（批號：20200629）；山西溢勺香老陳醋（批號：20150318）；恒順鎮江香醋（批號：20110928）；海天香醋（批號：20200705）；水塔老陳醋（批號：20200310）；恒順鎮江香醋（批號：20200415）；山西西堡泉老陳醋（批號：20130510）；居易米醋（批號：20200616）；正堂食醋（批號：20200227）；德馨齋清香米醋（20190610）；好太太香醋王（20200703）；海天白米醋（20200617）
　　方法與結果
　　對照品溶液的製備 取川芎嗪對照品適量，精密稱定，加甲醇製成濃度為300µg·mL-1的對照品溶液。
　　供試品溶液的製備 精密量取食醋15mL，用10%的NaOH溶液調pH10-11，加入CHCL3 20mL，混勻萃取，靜置分層。7200r·min-1離心15min，轉移CHCL3，重複上述操作一次，合並CHCL3相。將CHCL3水浴60℃蒸幹，殘渣用0.2moL·L-1的鹽酸和甲醇以3：7比例混合均勻的溶液定容至1mL，臨用前用0.45µm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。
　　HPLC色譜條件 采用Inertsil ODS-3C18色譜柱（250×4.6mm，5µm），流動相為甲醇-1%HAC（35：65），流速1.0 mL·min-1，檢測波長280nm，進樣量20µL，柱溫30 ℃。在該色譜條件下，川芎嗪色譜峰圖形較好，見圖1。
　　方法學考察
　　線性關係的考察 分別精密量取川芎嗪標準品溶液（300µg·mL-1）0.010、0.039、0.156、0.625、2.500mL，置10mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取以上稀釋的溶液各20µL，進行檢測，記錄峰麵積，以濃度為橫坐標，峰麵積為縱坐標，繪製標準曲線，回歸方程為 Y=59.18X+127.16(r=0.9998)，川芎嗪在0.29300µg·mL-1有良好的線性關係。
　　精密度實驗 取同一供試品溶液，連續檢測6次，記錄峰麵積，計算峰麵積的RSD為2.58%，表明儀器精密度良好。
　　穩定性實驗 取同一供試品溶液，按2.3項下的色譜條件分別在0、2、4、8、16、24 h進行測定，川芎嗪峰麵積的RSD為2.46%，說明供試品溶液在24h內穩定性良好。
　　重複性實驗 取同一供試品溶液6份，按2.3項下的色譜條件進行測定，結果川芎嗪的含量的RSD為1.86%，說明該方法重複性良好。
　　加樣回收率實驗 精密吸取已知含量為9.31µg·mL-1 ，恒順鎮江香醋7.5mL（批號：20200415），共6份，加入川芎嗪對照品溶液適量，按2.2項下製備供試品溶液，2.3項下色譜條件測定，測得的回收率為98.08%，RSD為1.56%，該方法回收率高，符合含量測定的要求。
　　樣品測定 取2.2項下供試品溶液，按2.3項下的HPLC色譜條件依次進行測定，計算樣品中川芎嗪的含量，見表2
　　討論
　　本文用HPLC法測定13批市售炮製輔料醋中川芎嗪的含量，發現不同方法釀製的輔料醋中川芎嗪的含量也不同。德馨齋白醋、海天白米醋采用液態發酵技術，均未檢測到川芎嗪，這與釀造過程中的脫色[4]有關，脫色過程中選擇活性炭作為吸附劑，活性炭對極性基團的吸附能力較強，凡是分子中含有極性基團的物質都容易被活性炭吸附，川芎嗪可能在脫色過程被吸附除去。因此，白醋及白米醋不適合作為中藥炮製的輔料醋。批號為20110928的恒順鎮江香醋和批號為20200415的恒順鎮江香醋生產原料均為糯米、麥麩、大米、大曲，川芎嗪的含量相差較大，這與陳放過程中的美德拉反應有關，隨著醋存放時間的增長，川芎嗪的含量會持續增加[3]。米醋主要有固態發酵和液態發酵兩種發酵方式，而液態發酵法周期較短(大約7d)，而固態發酵法生產周期比較長(大約30d)，更利於多種微生物及酶的參與，所發酵醋的風味口感更好[5]。因此，固態發酵的食醋更適宜作為中藥炮製的輔料。綜上，不同食醋中川芎嗪的含量不同，炮製輔料醋的發酵方法、存放時間等都可對川芎嗪的含量產生影響，可考慮將川芎嗪作為醋的質量控製指標，下一步可進行同一品種不同批次食醋間川芎嗪含量的穩定性試驗。
　　參考文獻：
　　[1] 吳曉明，曹嵐.我國食醋行業發展現狀及趨勢[J].中國調味品,2012,37(09):19-21.
　　[2] 吳仁蔚，陳亨業，郭俊陸，等.食醋中苯乳酸的提取、鑒定及含量比較[J].中國釀造,2020,39(01):66-70.
　　[3] 李丹亞，許泓瑜，陸震鳴，等.鎮江香醋在陳放過程中功能因子的變化規律研究[J].食品工業科技,2008(07):219-221.
　　[4] 曹寶忠,蘇迎會，許新軍，等.發酵白醋生產及脫色技術探討[J].中國釀造,2010(04):138-141.
　　[5] 胡本高．液態深層發酵與固態發酵食醋風味差別探討[J].食品工業,2004(5):27－28．
　　基金項目:國家中醫藥管理局全國中醫藥創新骨幹人才培訓項目（國中醫藥人教函[2019]128號）；山東中醫藥大學大學生研究訓練計劃(SRT)項目(2020050)
　　作者簡介
　　董月梅，女，從事藥物分析工作。
　　*通信作者，張超
　　董月梅 薑其寶 田金鳳 宋曉 張超*
　　山東中醫藥大學藥學院 山東濟南 250355
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