酪蛋白檢測方法的分析與研究

2021-05-24 11:29:45 來源: 世界杯賽程預測 導刊

  酪蛋白檢測方法的分析與研究
  分析與研究GB31638-2016酪蛋白的檢測方法,以降低檢測成本和縮短檢測時間,提高工作效率。方法:對膜分離酪蛋白的檢測方法進行了探討,依據對具體檢測步驟的剖析,溶解樣品采用旋渦振蕩儀、器皿選擇50 mL錐形瓶和直徑為9 cm濾紙過濾沉澱等方法操作節約成本和提高檢測效率。結果:改變溶解樣品采用手搖操作方式、選擇合適器皿及濾紙等,此法涉及藥品種類少,檢測效率高,對於檢測收集沉澱量較小的樣品,有較高的優勢。 結論:此法操作便捷,工作效率高,精密度好,在實際的檢測工作中,可以輔助使用。
  酪蛋白[1]是一種含有磷鈣的結合蛋白,對酸敏感,pH值較低時會沉澱,這種蛋白質主要存在哺乳動物中,是哺乳動物的主要蛋白質,可以降低蛋白質的降解率以及氨基酸的氧化率,從而加大蛋白質的身體吸收和利用率。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源,也是鈣和磷的來源,酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。因此市場中也有很多酪蛋白產品,比如酪蛋白磷酸鈦、酪蛋白鈣都是以酪蛋白為主要成分的營養品[2],對人體的營養效果也是非常的好。不僅如此,鑒於這種緩釋特性,酪蛋白還會讓你有持續的飽腹感,這樣就是為什麼健身減肥的人食用酪蛋白後減肥效果更加明顯。
  酪蛋白是以乳和/或乳製品為原料,經酸法或酶法或膜分離工藝製得的產品[3],它是由α、β、κ和r及其亞型組成的混合物,對酸敏感,pH值較低時會沉澱。以乳及乳製品為原料,經脫脂、膜分離酪蛋白,再經濃縮、殺菌、幹燥等工藝製得的產品即為膜分離酪蛋白[4]。本文主要對膜分離酪蛋白的測定方法進行研究。
  由於每位實驗操作者的理解認知不同,在進行GB31638-2016酪蛋白測定時,檢測者無法快速檢測酪蛋白。基於此,筆者綜述實驗過程中的問題,探討更為方便的檢測新方法。通過對膜分離酪蛋白的具體檢測步驟的分析,溶解樣品采用旋渦振蕩儀和直徑為9cm濾紙過濾沉澱等方法操作節約時間,提高檢測效率。
  材料與方法
  材料與儀器
  材料與試劑
  硫酸標準溶液(0.05 mol/L)、氫氧化鈉溶液(400 g/L)、硼酸溶液(20 g/L) 、甲基紅乙醇溶液((1 g/L))、溴甲酚綠乙醇溶液((1 g/L))、乙酸鈉溶液(1 mol/L)、10%乙酸溶液
  主要儀器設備
  定氮儀:Kjeltec8100、電子天平:AL204、旋渦振蕩器
  方法
  稱取0.2克試樣移入幹燥的150mL具塞錐形瓶中,加入8 mL水混勻後置於65-67 ℃的水浴上使其完全溶解(每隔5分鍾輕輕振搖一次,一般為10-15分鍾)。冷卻後再加入乙酸溶液1 mL,混勻,靜置5分鍾,再添加乙酸鈉溶液1 mL,混勻,靜置,使酪蛋白沉澱[5],用幹濾紙過濾。用緩衝溶液少量多次反複洗滌錐形瓶及沉澱,將濾紙連同沉澱物折疊,置於消化管內進行消化,餘下步驟GB5009.5-2016操作。
  研究新方法的實驗步驟與分析
  樣品的溶解
  酪蛋白難溶於水,常溫下不易被混勻。稱取0.2克試樣(精確至0.001克)移入幹燥潔淨的50 mL錐形瓶中,加入8 mL水於漩渦振蕩振蕩器2000轉/min 旋渦1 min左右封口後置於65-67 ℃的水浴鍋使其完全溶解(每隔1分鍾輕輕振搖一次,一般為2-3分鍾)。
  沉澱物的轉移
  國標檢測方法中步驟是用緩衝溶液少量多次反複洗滌錐形瓶及沉澱,將濾紙連同沉澱物折疊,置於消化管內進行消化。實際操作時需要大量時間衝洗沉澱物也很難處理幹淨,經過反複實驗得到結論:借助外物轉移沉澱即為增加一根適中長度的玻璃棒作為輔助工具,能快速、徹底地轉移沉澱物。
  濾紙的選擇和硫酸的加入量控製
  消化不完全是消化完畢顏色出現黑色的主要原因。 導致消化不完全的影響因素有:消化溫度低;消化時間不夠等。本次研究新方法主要針對在消化時間、消化溫度、硫酸鉀和硫酸銅用量等滿足要求的條件下,進行濾紙的選用的解析。
  濾紙大小對消化顏色的影響
  濾紙的選擇國標檢測方法中沒有具體要求,因此選擇較小且能達到過濾效果的濾紙能節省檢測藥品(硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸和硫酸標準溶液)的用量,同時能更有效地解決了因催化劑、濃硫酸等用量小造成消化完畢的樣品顏色發黑無法繼續檢測的問題。新方法選擇不同濾紙在消耗的硫酸用量一定情況下對消化完畢顏色的變化進行實驗,顏色深淺量越低表示越接近正常(淺藍色)顏色,其中濾紙直徑為9cm時是最佳選擇。
  關鍵步驟檢測樣品時間
  針對酪蛋白具體檢測時間分別依據國標方法和本次研究的新方法各做了6組數據(表1),其中新方法中混勻樣品時間、水浴時間溶解消耗、轉移沉澱消耗時間都明顯減少很多。
  根據表1可以看出:進行消化前處理樣品消耗總時間新方法明顯低於國標方法。
  不同人員間對比
  分別取3個不同的酪蛋白樣品,不同檢測人員在同一檢測條件下,分別對不同樣品進行檢測,檢測結果的相對偏差均小於國標要求偏差範圍(10%),人員間對比結果偏差較小,準確性可靠。
  重複性
  取同一個樣品進行檢測,重複性檢測次數為10次,結果分別是:84.5 84.9 84.7 85.3 84.8 86.0 85.7 86.0 84.8 85.7(g/100g)相對偏差百分比分別是:0.08 0.04 0.06 0.01 0.05 0.09 0.06 0.09 0.05 0.06。精密度的檢測:取同一批次樣品結果,對酪蛋白進行計算,精密度較高如(表1)。
  結論
  本文對膜法酪蛋白的檢測方法進行了探討,依據對具體檢測步驟的分析,在明確清晰的操作過程中達到節省藥品、時間,為檢驗者指明方向。此法涉及藥品種類少,檢測效率高,對於檢測收集沉澱量較小的樣品,有較高的優勢。此法操作便捷,準確度高,精密度好,在實際的檢測工作中,可以輔助使用。
  參考文獻
  [1]李曉暉. 牛乳中酪蛋白的結構特性及其應用[J]. 食品工業, 2002, 023(001):29-31.
  [2]吳斌.酪蛋白和乳糖的營養價值及提取方法[J].世界最新醫學信息文摘(連續型電子期刊).2015,(23).256-256
  [3]張建忠, 酈一心. 酪蛋白和酪蛋白製品的開發[J]. 中國乳品工業, 1998,26(6):31-32.
  [4]姚強, 史宏, 楊剛,等. 酪蛋白的聚集態及其膜分離[J]. 南京工業大學學報(自然科學版), 2012(06):102-105.
  [5]蘇 麗. pH 值對牛乳中酪蛋白提取收率的影響[J]. 2015.
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