氣相色譜-質譜法測定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量

□ 張秋萍 王春民 馬曉豔 蘇州市疾病預防控製中心

摘　要：本試驗采用氣相色譜-質譜法測定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，樣品經濃度為2mol/L的鹽酸溶液提取後超聲處理，上清液以濃氨水調至pH=9後用三氯甲烷液-液萃取後氮吹至近幹，殘渣用三氯甲烷溶解，然後用氣質聯用儀分離測定;采用電子電離源(EI)模式電離，單離子選擇(SIR)監測方式檢測。結果顯示，該方法的線性範圍為100~1000μg/L，線性回歸方程為Y=85.6X-4.638，r=0.999，樣品最低定量濃度(LOQ)為0.01mg/kg，在0.05~5.0mg/kg添加水平下回收率為82%~94%，相對標準偏差(RSD)為4.9%~7.4%。故得出結論，本方法準確度高且重複性好，能夠用於曼陀羅藥酒中莨菪堿含量的快速測定。

關鍵詞：氣相色譜質譜儀 莨菪堿 曼陀羅

曼陀羅又名洋金花、風茄兒，係一年生茄科草本植物，我國各省區均產，其根葉果實皆可入藥。曼陀羅全株都有毒，且以果實毒性最大(主要成分為莨菪堿、東莨菪堿等)，中毒的臨床表現類似阿托品中毒。曼陀羅中毒的潛伏期短則20分鍾、長則3小時，多為1小時左右病發，症狀先有唇幹口渴、嗓子發苦、吞咽困難、聲音嘶啞、皮膚幹燥潮紅、發熱等，繼而有頭暈、瞳孔散大、視力模糊等，甚至出現幻聽幻視，嚴重者心率加快、躁動不安、血壓不穩、驚厥、昏迷，更有甚者會因呼吸衰竭而死亡[1]。

現行藥典規定了莨菪堿的液相色譜法(HPLC)[2]，但該方法僅適用於藥材，尚不能滿足食品基質中莨菪堿的檢測。本文采用氣相色譜-質譜法測定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，以期開發誤食曼陀羅藥酒引起中毒的快速定性定量檢測方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

氣相色譜質譜儀：TRACE GC ULTRA/ISQ,Thermo公司，台式離心機。

1.1.2 試劑

濃氨水，分析純;鹽酸，優級純;甲醇，色譜純;三氯甲烷，色譜純。

1.1.3 標準品

莨菪堿，莨菪堿標準儲備液(1000mg/L)：精確稱取10.0mg(精確到0.1mg)莨菪堿標準品置於10mL容量瓶中，用甲醇作溶劑溶解，定容，混勻，於4℃避光保存。

1.2 方法

1.2.1 提取與淨化

稱取1g(精確至0.01g)樣品試樣置於50mL離心管中，加入濃度為2mol/L的鹽酸溶液10mL，超聲處理30min，冷卻，高速離心，倒出上清液。用濃度為2mol/L的鹽酸溶液10mL洗滌殘渣，高速離心，合並上清液。用濃氨水將上清液調至pH=9，倒入分液漏鬥，用三氯甲烷振蕩提取3次，每次10mL，合並三氯甲烷並氮吹至近幹，殘渣用三氯甲烷溶解並定容，然後上機測定。

1.2.2 實驗條件

色譜柱：HP-5MS柱，60m×0.250mm×0.25Micro。

柱溫：80℃、保持1min，以20℃/min的速度升到220℃、保持1min，然後以10℃/min的速度升到270℃、保持10min，總體運行時間為24分鍾。進樣口溫度：250℃;流量：1.0/min;進樣量：1.0μL。

質譜條件：Full scan質譜掃描範圍：50~650m/z，離子源溫度：280℃，接口溫度：250℃，SIM模式：定量離子124m/z;定性離子82，94m/z。

2 結果

2.1 分析方法

目前，測定曼陀羅中莨菪堿含量的方法主要有高效液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳法、離子對色譜法等。近年來，醫藥行業主要采用高效液相色譜法(HPLC)測定曼陀中莨菪堿的含量[3]，但是該方法靈敏度較差，對流動相的要求比較繁瑣。本研究建立GC-MS方法用於測定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量。由於莨菪堿為典型的生物堿類，如按照傳統生物堿的提取方法，色譜圖會出現較多雜峰且分離度並不理想。本實驗采用酸提取，上清液氨化後進行三氯甲烷液-液萃取，不僅提取回收率高，色譜圖也比較簡單，故該方法適合用於曼陀羅藥酒中莨菪堿的提取與分離。

2.2 方法學評價

2.2.1 線性範圍及檢出限實驗

將莨菪堿標準儲備液逐級稀釋得到濃度分別為100、250、500、750、1000μg/L的標準工作液，濃度由低到高進樣檢測，以定量子離子峰麵積-濃度作圖，得到標準曲線回歸方程，外標法定量。待測樣液中莨菪堿的響應值應在標準曲線線性範圍內，超過線性範圍則應稀釋後再進樣分析。由此得出結論，該方法的線性範圍為100~1000μg/L，線性回歸方程為Y=85.6X-4.638，r=0.999，以信噪比(S/N)為3時對應的含量作方法的檢出限(LOD)，以S/N=10對應的含量作方法的定量限(LOQ)為0.01mg/kg。在50~5000μg/kg添加水平下回收率為82%~94%，相對標準偏差(RSD)為4.9%~7.4%。

圖 1 陽性樣品圖譜

2.3 樣品測定結果

某地發生一起5人突發中毒事件，主要症狀均為譫妄、狂躁、惡心嘔吐等，部分中毒患者處於昏迷和意識不清狀態。食物暴露調查顯示，5人與其他參加喪宴人員的食譜均相同，僅在就餐時飲用了存放在2樓的自製藥酒。據觀察，泡藥酒的草藥中有些與曼陀羅的果實十分相似，流調人員從後院菜地收割的曼陀羅植株中采集2枚果實，從剩餘的藥酒罐中采集200mL左右的藥酒，經實驗室檢測發現果實中的莨菪堿含量為650mg/kg;藥酒中的莨菪堿含量為300mg/L。依據實驗室檢測結果，結合中毒患者的臨床表現與流行病學調查以及檢驗結果，判斷該起中毒事件是一起喪宴中誤服藥酒導致的5人曼陀羅(莨菪堿)中毒事件，陽性樣品圖譜見圖1。

3 結論

本文采用氣相色譜-質譜法測定曼陀羅藥酒中莨菪堿的含量，方法的準確度及精密度均符合分析要求，可適用於固體、液體食品中莨菪堿的定性確證與定量測定。

參考文獻：

[1] 陳靜，張鳳，張銳，李卿，等.LC-MS/MS法測定毛曼陀羅中莨菪堿、東莨菪堿和山莨菪堿的含量[J].井岡山大學學報(自然科學版)2019，40(4)：92-95.

[2] 崔雅慧，金誌國等.高效液相色譜法測定止喘靈注射液中鹽酸麻黃堿、丁溴東莨菪堿和苦杏仁苷含量[J].中國藥業,2020，29(13):71-73.

[3] 李紅紅，陳朋朋，付傳香，吳澤宇，惠愛玲，許坤，張文成，等.HPLC法同步測定洋金花中東莨菪堿和莨菪堿的含量[J].安徽化工，2018，44(5):92-94.

作者簡介：張秋萍(1979.10-)，女，漢族，學士學位，高級工程師，主要從事食品理化分析工作。