建立測定河粉中脫氫乙酸的高效液相色譜方法。方法:用氫氧化鈉溶液提取試樣中的脫氫乙酸,經脫脂、去蛋白處理,以甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液(5:95)為流動相,流速1.0mL/min,在293nm波長下檢測。結果:在1.00mg/L~200 mg/L濃度範圍內線性良好,相關係數r=0.9999,目標物的加標回收率為95.3%~99.5%,RSD為0.50%~1.2%,檢測限為1.0mg/kg。結論:該方法具有靈敏度高、精密度、準確度良好、分析速度快、操作簡單等優點,可以用於測定河粉中的脫氫乙酸。
雪白透明、韌而爽滑的“河粉”一直是人民鍾愛的民間傳統美食。按規定(GB 2760-2014)河粉中不允許添加防腐劑。但近年來,不法商人采取在河粉中添加脫氫乙酸,達到防腐保鮮,延長保質期的目的。而脫氫乙酸是一種廣譜型防腐劑,在高劑量才能抑製細菌,食用過量有礙健康,可能會導致出現胃腸道不適、肺栓塞、皮膚反應等副作用。目前GB 5009.121-2016規定了部分食品中脫氫乙酸的檢測方法,河粉可參考執行,但需要對檢驗方法進行驗證優化。為更好防範河粉中添加脫氫乙酸,保障人民群眾吃得安全放心,需要通過對河粉中脫氫乙酸進行檢測研究。目前,測定脫氫乙酸的方法有紫外分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法。本文采用高效液相色譜法檢測河粉中脫氫乙酸,操作簡便,準確度、精密度好,靈敏度高,完全能夠滿足於檢驗機構日常檢測任務的要求。
儀器與試藥
島津LC-20A型高效液相色譜儀,KH-2000DB超聲清洗機,Sartorius萬分之一電子分析天平(QUINTIX224-1CN),脫氫乙酸標準溶液(購買於北京海岸鴻蒙標準物質技術有限公司,編號為BST002-1701、濃度1000mg/L),甲醇、乙酸銨為色譜純,其他試劑均為分析純。
方法與結果
標準係列工作液配製
分別精密吸取不同體積的標準溶液,用水將其稀釋成脫氫乙酸含量分別為1.00mg/L、5.00 mg/L、10.0 mg/L、50.0 mg/L、100mg/L、200 mg/L的標準係列工作液。
供試品溶液的製備
稱取樣品2g,置於50mL離心管中,加入約30mL水、5mL硫酸鋅溶液,用氫氧化鈉溶液調pH值至7.5,加水稀釋至刻度,搖勻,超聲提取10min,4000r/min 離心10min,取上清液過0.45μm 有機濾膜,供高效液相色譜測定。
色譜條件及係統適用性試驗
色譜柱:Angel C18(4.6mm× 250 mm,5μm),流動相:甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液(5:95),流速 1.0mL/min,檢測波長293nm,柱溫30℃,進樣量:10μL。在上述色譜條件下,脫氫乙酸的保留時間為12.min,且色譜峰分離度良好,色譜圖見圖1。
1.脫氫乙酸
圖1 A.對照品;B.樣品;C.空白樣品
檢出限
按GB/T16631-2008《高效液相色譜法通則》以3倍信噪比計算檢測限為1.0mg/kg。
精密度試驗
精密吸取濃度為10.0 mg/L對照品溶液10μL,按“色譜條件及係統適用性試驗”項下色譜條件連續進樣 6次,測定成分峰麵積。結果脫氫乙酸峰麵積的RSD為0. 66% 。
加樣回收率試驗
精密稱取已知含量(含脫氫乙酸0.266mg/g)的河粉9份,每份約1g,以三份為一組,每組分別精密加入標準溶液0.05mL、0.1mL、0.2mL,按“供試品溶液的製備”項下方法製備供試品溶液,按“色譜條件及係統適用性試驗”項下色譜條件進樣測定,計算加樣回收率,結果見表1。結果每組的平均回收率分別為95.3%、98.7%、99.5%,RSD分別為1.2%、0.59%、0.50%。表明該方法準確度良好。
穩定性試驗
取同一試樣溶液分別在0,4,8,12,16,20h進樣測定。結果脫氫乙酸峰麵積的RSD為0.72%,說明加標試樣溶液在20h內穩定。
樣品測定
取13批河粉,按“供試品溶液的製備”項下方法製備供試品溶液,在“色譜條件及係統適用性試驗”項色譜條件下進行測定,外標法定量。結果見表2。可以看出河粉中這種違法添加已經非常泛濫,不合格率高達84.6%,必須采取有效措施加以控製。
討論
3.1在供試品溶液製備中,比較了超聲後用正丁醇除雜對測定結果的影響,最終確定了“2.2”項中的方法。
3.2係統適用性試驗中,比較了甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨溶液、甲醇-0.1%甲酸水溶液 3種流動相,同時比較了不同流速(0. 8、1. 0、1.2mL/min)對測定結果的影響,最終確定了“2.3”項的色譜條件。脫氫乙酸的最大吸收波長為293nm,故選擇293nm作為檢測波長。
作者簡介:陽文武,主管中藥師,從事食品藥品檢驗工作;
通訊作者:周祥德,高級工程師,從事食品藥品檢驗工作。
陽文武 萬 莉 羅長琴 周祥德
重慶市萬州食品藥品檢驗所