優化液質聯用法對氟喹諾酮類藥物殘留的檢測

□ 戴菲菲 廣東省惠州市質量計量監督檢測所

摘 要：GB/T 20366-2006在氟喹諾酮類藥物殘留檢測中的應用十分頻繁，但由於其存在有機溶劑使用量大、回收率低、操作時間長、峰形差等問題，因此本研究通過對該方法的提取、旋蒸、定容液環節進行優化，以期獲得理想結果。

關鍵詞：氟喹諾酮 GB/T 20366-2006 液質聯用

氟喹諾酮(fluoroquinolones，FQs)類藥物具有6-氟-7-呱嗪-4-諾酮環的特征結構，且具備酸堿兩性，因其具有機體吸收快、組織濃度高、殺菌效果好、抗菌譜廣等優勢，故在治療家禽感染性疾病中的應用十分廣泛。氟喹諾酮類藥物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、細胞內病原菌、黴形體及某些耐藥菌株都有很好的抗菌活性，常用藥物包括恩諾沙星、環丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、沙拉沙星等。但是，隨著氟喹諾酮類藥物的廣泛應用，其被濫用的問題也逐漸引起各方重視——長期食用氟喹諾酮類藥物超標的肉類、蛋類等食物會致使人體內的抗生素蓄積，進而導致內分泌係統、消化係統、生殖係統等損傷，甚至產生細菌耐藥性。當前，農業部製定了《世界杯賽程預測國家標準 食品中獸藥最大殘留限量》(GB 31650-2019)，發布《在食品動物中停止使用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、諾氟沙星4種獸藥的決定》(農業部公告第2292號)等，以規範氟喹諾酮類藥物的使用。

目前，適用於檢測氟喹諾酮類藥物殘留的方法包括免疫分析法、微生物法、高效毛細管電泳分析法、高效液相色譜法、液相色譜-質譜聯用法等，在《國家世界杯賽程預測監督抽檢實施細則》中采用的方法主要有《動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》(GB/T 20366-2006)、《動物源性食品中14種喹諾酮藥物殘留檢測方法 液相色譜-質譜/質譜法》(GB/T 21312-2007)等。由於GB/T 20366-2006中不使用固相萃取柱，且提取過程需使用大量乙腈和正己烷，並存在旋蒸耗時長等問題，導致實驗不夠簡便快捷。因此，筆者從提取、旋蒸、定容等方麵對GB/T 20366-2006的方法進行了優化，以期為動物源食品中氟喹諾酮類藥物殘留的測定提供參考。

1 儀器設備

1.1 檢測儀器

液相色譜-串聯質譜儀：AB SCIEX API 4000，配有電噴霧離子源;

ZORBAX Eclipse PlusC18 600Bar (3×100mm，1.8μm)。

1.2 前處理設備

均質器、旋轉蒸發儀、氮吹儀、渦旋混勻器、離心機、分析天平、移液器、聚四氟乙烯離心管等。

1.3 試劑

甲酸，優級純;乙腈、正己烷，色譜純;一級水。

1.4 氟喹諾酮類藥物標準品

恩諾沙星(Dr.)、環丙沙星(Dr.)、諾氟沙星(Dr.)、恩諾沙星(Dr.)、氧氟沙星(Dr.)、沙拉沙星(Dr.)。

用乙腈配製成1000mg/L的標準溶液，並逐級稀釋配製成混合標準工作液。

2 實驗方法

參照《動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》(GB/T 20366-2006)。

3 結果與分析

3.1 優化提取體積

分別用5、10、20mL甲酸-乙腈溶液提取待測樣品2次，使用提取溶液總體積為10、20、40mL，其餘步驟按照GB/T 20366-2006進行。結果顯示，提取溶液體積與回收率呈正相關，依次為40.3%~50.6%、66.8%~75.2%、69.5%~77.4%。當提取溶液總體積為20mL時，既能得到較好的回收率，又可以降低有機溶劑的使用量。因此，將甲酸-乙腈溶液20mL作為優化後的提取體積，同時正己烷的用量相應減少。

3.2 優化旋轉蒸發

在進行旋轉蒸發操作時，經常因提取溶液中的水分較多不易蒸幹而耗費大量時間。本實驗在正己烷除脂後，於下層提取溶液中加入適量無水硫酸鈉以除去提取溶液中的水分，同時提高旋蒸溫度以減少蒸幹時間。如表1所示，添加無水硫酸鈉的同時提高旋蒸溫度對回收率無顯著影響，且旋蒸用時縮短了6~8分鍾。因此，將添加無水硫酸鈉、50℃旋蒸作為優化後的旋蒸條件。

3.3 優化定容液

GB/T 20366-2006使用的定容液為甲酸-乙腈(2+98)，由於乙腈比例太高，導致峰形不好，響應不高，定量不準確。本試驗將定容液改為乙腈-0.1%甲酸-水(乙腈：水=2∶10)溶液後，峰形和響應都得到明顯改善，回收率為85.1%~113.7%。因此，將乙腈-0.1%甲酸-水(乙腈：水=2∶10)溶液作為優化後的定容條件。

4 結論

研究結果顯示，采用10mL甲酸-乙腈溶液提取2次，並相應減少正己烷用量，添加無水硫酸鈉後於50℃旋蒸，用乙腈-0.1%甲酸-水(乙腈：水=2：10)定容，其餘按照GB/T 20366-2006步驟進行，不僅能夠在減少有機溶劑使用量的同時縮短實驗用時，更可以改善峰形，提高響應值，進而得到令人滿意的回收率。

參考文獻：

[1] 國家質量監督檢驗檢疫總局，國家標準化管理委員會.《動物源產品中喹諾酮類殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》(GB/T 20366-2006).

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[3] 李佩佩，陳雪昌，張小軍，梅光明.高效液相色譜法檢測水產品中氟喹諾酮類藥物殘留量方法的優化[J].中國漁業質量與標準，2012，2(02):84-88.