超高效液相色譜-串聯質譜法測定辣椒油中的溶劑紅52

□ 劉永玉 福建紫金礦冶測試技術有限公司廈門分公司

摘　要：本文建立了超高效液相色譜-串聯三重四極杆質譜儀測定辣椒油中溶劑紅52含量的方法。結果表明，辣椒油中的溶劑紅52在0.01~0.50mg/kg範圍內線性關係良好，其方法檢出限為0.003mg/kg，定量限為0.01mg/kg，添加回收率在89%~95%之間，相對標準偏差(n=6)在1.4%~6.5%之間。由此可見，該方法精密度好，回收率高，能夠滿足企業和相關部門的管控要求。

關鍵詞：超高效液相色譜-串聯質譜 溶劑紅52 辣椒油 檢測

溶劑紅是一類含有特殊鮮豔紅色的人工合成染料，由於其價格低廉、顏色亮麗，故被廣泛用於各類紡織品、色素、塑料著色劑等工業領域[1]。常見的溶劑紅染料類型有溶劑紅49(羅丹明B)、溶劑紅111、溶劑紅52、溶劑紅23(蘇丹紅III)等等[2]。溶劑紅染料在合成過程中容易生成一些副產物，如芳香胺等強致癌物質，且其本身也具有明顯的毒副作用。某些不法生產者為了使產品更加鮮豔出眾，在食品生產過程中違法添加具有致癌性的溶劑紅染料，給消費者的身體健康帶來了極大的安全隱患[3，4]。

2005年，多款辣椒醬、紅鴨蛋等食品中被檢測出含有禁用成分“蘇丹紅一號”[5]，該事件逐漸發酵並釀成了一起重大世界杯賽程預測衛生事件。此後，相關部門對於食品中違禁染料“蘇丹紅”的檢測力度[6-8]提升到了一個新高度，也在一定程度上杜絕了“蘇丹紅”染料的違法添加問題。然而，隨著時間的流逝，一些不法生產者受利益驅動鋌而走險，改用其它染料替代“蘇丹紅”，如溶劑紅49、溶劑紅52等，以躲避相關監管部門的檢驗。

溶劑紅52是一種功能性溶劑染料，能夠對各種塑料樹脂及纖維著色，其化學名稱為3-甲基-6-(對甲苯胺基)-3H-二苯並[f,ij]異喹啉-2,7-二酮，結構如圖1。雖然溶劑紅52具有豔麗的紅色及優良的著色性能[9]，但它隻是一種化工染料，並不包含在食品及食品接觸材料使用添加劑的正麵清單內[10，11]。目前，對於溶劑紅52的定量檢測方法鮮見報道。因此，建立食品中溶劑紅52含量的檢測方法不僅能夠為執法部門的檢驗監管提供支撐，更有助於維護消費者的健康安全。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器

液相色譜-三重四極杆質譜聯用儀(6460)，Agilent;移液槍，Eppendorf;超聲儀，上海科導;渦漩振蕩器，上海達姆;離心機，Sigma;純水儀，Millipore。

1.1.2 試劑耗材

一級水，由超純水設備生成;溶劑紅52(CAS：81-39-0)，購自朗盛化學;辣椒油為市售品;乙酸乙酯、正己烷均為色譜純，乙腈、甲醇為LC/MS級，微孔濾膜(0.22μm)，均購自上海安譜;具塞玻璃離心管(25mL)，購自泰坦科技。

圖 1 溶劑紅 52 結構式

1.2 標準溶液的配製

分別準確稱取0.025g(精確到0.1mg)溶劑紅52至25mL容量瓶中，加入1mL水溶解後，再用甲醇定容，在4°C條件下避光保存，此為溶劑紅52的標準儲備液。係列標準溶液由混合標準儲備液用甲醇/水(v/v=50/50)稀釋而得。

1.3 樣品前處理

由分析天平準確稱取1g(精確至0.1mg)辣椒油液體試樣於25mL玻璃離心管中，加入5mL甲醇，渦漩振蕩2分鍾。隨後，將離心管置於離心機中以4000r/min離心10分鍾，將上層甲醇溶液全部移出。之後，加入5mL甲醇於離心管中，重複提取一次，合並兩次甲醇提取液，氮吹至近幹，加入1.0mL甲醇/水溶液(v/v=50/50)渦漩15秒溶解，溶液過0.22μm濾膜後供高效液相色譜-串聯三重四極杆質譜儀進行檢測。

1.4 分析方法

1.4.1 液相色譜條件

色譜柱為ZOBRAX-C18，3.5µm(3.5μm，2.1×150mm);流動相A：水，流動相B：甲醇，A︰B=20︰80，等度洗脫;進樣量：1.0μL;流速：0.30mL/min;柱溫：35℃。

1.4.2 質譜參考條件

離子化模式：電噴霧電離(ESI)，正離子模式;質譜掃描方式：多反應監測(MRM);幹燥氣流速：10L/min;噴霧電壓：4500V;離子源溫度：350℃;幹燥器溫度：350℃;霧化器壓力：45psi;裂解電壓：135V;MRM參數見表1。

2 結果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

通過對含有溶劑紅52的辣椒油樣品進行溶劑提取，考察了乙腈、甲醇、水、正己烷和乙酸乙酯這5種不同的溶劑。結果表明，正己烷、乙酸乙酯與辣椒油無法分層;乙腈、甲醇的提取效率比較接近，而水的提取效率低於上述兩種溶劑。考慮到乙腈的毒性較大，且甲醇性價比較高，因此最終選擇甲醇作為提取溶劑。

2.2 提取方式和提取次數的選擇

確定了以甲醇為提取溶劑後，通過比較超聲、渦漩振蕩兩種提取模式對陽性樣品進行提取。結果表明，渦漩振蕩提取效率更高，且時間更短，故最終采用渦漩振蕩作為提取方式。然後，繼續考察提取次數的影響。結果顯示，對同一個加標陽性樣品提取兩次後的回收率大於99%，因此最終確定提取次數為兩次。

2.3 色譜柱和流動相的選擇

對於色譜柱的選擇，發現采用C18即可滿足要求，因此采用ZOBRAX-C18(3.5μm，2.1×150mm)窄徑柱，其能有效提高分離效率並節省分析時間。通過優化流動相發現，乙腈-水體係和甲醇-水體係均能較好地得到目標物的色譜峰。綜合考慮試劑的毒性、價格成本及提取效果等因素，最終選用甲醇-水為流動相，采用等度洗脫(甲醇︰水=80︰20)進行色譜分離，整個分析時間不超過5分鍾，其色譜圖如圖2。

圖 2 標準溶液中溶劑紅 52 的 MRM 色譜圖

2.4 方法檢出限和限性範圍

通過配置濃度範圍為0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50mg/L的係列標準溶液，在選定的色譜條件下進行測定，以各目標化合物的濃度為橫坐標，響應麵積為縱坐標，進行外標法定量。結果表明，其在0.01~0.50mg/kg範圍內線性良好(R2=0.998)。通過逐級稀釋標準溶液後進行液相色譜-串聯質譜檢測，以3倍信噪比估算所對應目標物的檢出限，10倍信噪比估算定量限。結果表明，辣椒油中溶劑紅52的檢出限為0.003mg/kg，定量限為0.01mg/kg。

2.5 精密度實驗

為了驗證方法的有效性，本文通過對陰性樣品進行加標回收實驗，即向不含溶劑紅52的辣椒油樣品中添加0.01、0.05、0.50mg/kg這3個水平的溶劑紅目標物，每個含量平行測定8次。結果表明，不同水平的添加回收率在89%~97%之間，其RSD的範圍為1.4%~6.5%，具體結果如表2。

2.6 實際樣品檢測

在市麵上采購了6批不同廠商生產的辣椒油樣品進行溶劑紅52的檢測，均未檢出該物質，表明市麵上辣椒油中溶劑紅52的違法添加風險較小。

3 結論

本研究采用高效液相色譜-串聯三重四極杆質譜儀，建立了辣椒油中溶劑紅52的定量檢測方法，檢出限為0.003mg/kg，定量限為0.01mg/kg。可見該方法準確可靠，靈敏度高，能夠對相關辣椒油產品進行檢驗監管，有助於打擊違法分子，幫助企業和相關政府部門保障消費者的食品衛生安全。

參考文獻：

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[11] EU 10/2011. Union Guidelines on Regulation (EU) No 10/2011 on plastic materials and articles intended to come into contact with food[S]. 2011.