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測試片方法快速檢測活性乳酸菌飲料中的乳酸菌總數

2020-04-27 15:37:24 來源: 世界杯賽程預測 導刊

　　測試片方法快速檢測活性乳酸菌飲料中的乳酸菌總數
　　作者簡介：霍建偉（1983-），男，工程師，從事食品微生物檢測及世界杯賽程預測質量控製工作。
　　摘要： 國標乳酸菌檢測方法中，對於僅含乳杆菌類的檢測，需要3天的時間，且需要在厭氧環境中培養，3M乳酸菌測試片方法，測試片自帶厭氧環境，可在正常有氧環境下培養，檢測時間2天，提高檢測效率，本文針對活性乳酸菌飲料（僅含乳杆菌類）在乳酸菌檢測時，對2種方法進行了一致性比較，為企業更好的應用該產品提供有效數據。
　　關鍵詞：測試片方法，乳酸菌檢測，提高效率
　　0引言
　　活性乳酸菌飲料(僅包含乳杆菌類)含有大量的乳酸菌，一般出廠時乳酸菌含量大於107 CFU/ml, 目前國標的檢測方法是GB 4789.35-2016乳酸菌檢測， 對於乳杆菌類的檢測，需要厭氧培養，72小時出具結果，企業多數采用的是厭氧罐加厭氧袋加厭氧指示劑的方式，為厭氧培養提供條件。
　　3M 乳酸菌測試片是一種即用型培養基係統，測試片含有氧氣清除的成分，使其能夠自帶厭氧環境，可直接在培養箱中培養，無需厭氧罐等輔助設備，且可以在48小時出具結果。
　　本文對2種方法進行比較，通過大量實驗數據表明2種方法的一致性，並且3M 乳酸菌測試片方法能提高效率和快速出具檢測結果。
　　1 實驗
　　1.1材料、試劑和儀器
　　活性乳酸菌飲料（僅包含乳杆菌類)，市場購買。
　　恒溫培養箱：36 ℃±1 ℃；天平：感量為0.1 g；均質器；無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭；無菌錐形瓶：容量250 mL、500 mL；無菌培養皿：直徑90 mm； 3MTM PetrifilmTM乳酸菌測試片；厭氧罐；厭氧劑；厭氧指示劑，MRS瓊脂培養基。
　　1.2方法：
　　1.2.1 樣品的處理
　　樣品應先將其充分搖勻後，以無菌吸管吸取樣品25 mL 放入裝有225 mL生理鹽水（提前滅菌）的無菌錐形瓶中，充分振搖，製成1:10 的樣品勻液。用1 mL微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注於裝有9 mL 生理鹽水的無菌試管中，製成1:100 的樣品勻液。 按上述操作順序，依次稀釋至10-6，10-7，10-8。
　　1.2.2 GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗方法
　　GB 4789.35-2016乳酸菌檢驗中6.2.3.4 乳杆菌計數要求，根據待檢樣品活菌總數的估計,選10-7，10-8適宜稀釋度,每個稀釋度吸取1mL樣液到平皿內,每個稀釋度做兩個平皿。稀釋液移入平皿後,將冷卻至48 ℃的MRS瓊脂培養基，傾注入平皿約15mL,轉動平皿使混合均勻。36℃±1℃厭氧培養72h±2h。從樣品稀釋到平板傾注要求在15min內完成。
　　1.2.3 3M乳酸菌測試片方法
　　將上述對應稀釋度的樣品，吸取1mL，揭開測試片上層膜，垂直加到測試片中央，將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡產生，切勿使上層膜直接落下，將壓板放置在上層膜中央處，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋於圓形的培養麵積上，切勿扭轉或滑動壓板，拿起壓板，靜置至少1min以使培養基凝固，每個稀釋度做兩個測試片。將測試片的透明麵朝上置於培養箱內，堆疊片數不超過20片，36℃±1℃下需氧培養48h±2h。
　　2實驗結果與分析
　　2.1實驗結果見表1
　　2.2結果分析
　　2.2.1 Log差值分析方法：
　　統計2種檢測結果Log值差值的平均值，經計算兩種方法的log差值平均值的絕對值為0.08，小於0.50，表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法有很好的一致性。（見表2）
　　2.2.2 配對t檢驗分析方法
　　以上檢測結果的配對t檢驗，P值是0.075，P值大於0.05，表明本次實驗中3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016方法的結果沒有統計學上的差異。
　　2.2.3結論
　　本次實驗表明，針對活性乳酸菌飲料（僅含乳杆菌類）的乳酸菌檢測，3M乳酸菌測試片方法和GB4789.35-2016乳酸菌檢測方法,無顯著性差異，一致性很好。
　　測試片方法操作簡單，自帶厭氧環境，無需厭氧罐和厭氧試劑等設備及耗材，提高了檢測效率，檢測時間為48h，相比傳統GB方法，能在更短時間內獲得樣品的檢測結果。
　　參考文獻：
　　[1] GB 4789.35-2016 《世界杯賽程預測國家標準 食品微生物檢驗 乳酸菌檢驗》
　　[2]SN/T 2775-2011 《商品化食品檢測試劑盒評價方法》
　　[3]ISO 16140-2：2016 Microbiology of the food chain – Method validation –Part 2: Protocol for the validation of alternative(proprietary) methods against a reference method
　　[4]AOAC 041701 3MTM PetrifilmTM Lactic Acid Bacteria Count Plate
　　霍建偉
　　3M中國有限公司 北京技術中心 北京 100176
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