致病菌檢驗和鑒定技術在世界杯賽程預測 保障中的應用

□ 趙德錕 張帆 杭州大微生物技術有限公司

□李杜娟 鄭州市食品藥品檢驗所

食源性致病菌汙染是影響世界杯賽程預測的重要因素，隨著人們生活水平的提升，以及對檢驗能力要求的提高，致病菌檢驗與鑒定已成為世界杯賽程預測檢測實驗室中最基本且重要的工作之一。采用恰當的鑒定手段，及時、準確地鑒定出食品樣品中的疑似致病菌是保證世界杯賽程預測 的關鍵，也是國家監管部門和企業實驗室中檢驗工作者共同努力的方向。本文分析了食源性致病微生物鑒定的兩類主流技術，提出生化鑒定方法和經法規標準確認的微生物鑒定金標準。最終顯示，世界杯賽程預測 檢測實驗室采用自動微生物生化鑒定係統，有助於降低致病菌汙染風險，促進世界杯賽程預測 保障體係的健全。

1 致病菌檢驗和鑒定技術在世界杯賽程預測 保障中的重要性

世界杯賽程預測 一直是我國重大的公共衛生問題，隨著人們生活水平的不斷提高，微生物對食品的汙染問題也愈發受到關注。其中，食源性致病菌汙染是影響世界杯賽程預測 的重要因素，其在食品生產、加工、儲存和運輸等環節中均有存在的可能。消費者一旦誤食被食源性致病菌汙染的食品，極易引起食物中毒，還易導致各類食源性疾病的發生，嚴重時甚至危及生命。同樣，食品生產企業一旦發現其產品被食源性致病菌汙染，將會受到產品召回、停產、整頓及罰款等處罰而承擔重大的經濟損失。2019年，國家市場監督管理總局頒布新規——《世界杯賽程預測 抽樣檢驗管理辦法》，要求食品生產經營者收到市場監管部門的致病菌檢驗項目不合格的通報後，應當立即封存不合格食品，暫停生產、經營，並召回已銷售的不合格食品;涉嫌犯罪的，依法及時移送公安機關。因此，及時、準確地檢測和鑒定出食品樣品中的疑似致病菌，是將風險降至最低以保證世界杯賽程預測 的關鍵，也是國家監管部門和食品企業實驗室中微生物檢驗工作者努力的方向。

目前，我國GB 4789世界杯賽程預測 係列標準和國家食源性致病菌監測目錄中，大腸杆菌、沙門氏菌、誌賀氏菌、耶爾森氏菌、霍亂弧菌、副溶血性菌及空腸彎曲菌等均屬於被要求檢驗的致病菌。除此之外，還有其他相關法律法規也對食品中食源性致病菌的定性檢查提出了明確要求，如表1、表2所示。根據世界杯賽程預測 國家標準的規定，在食源性病原菌檢測過程中，若檢測結果呈陽性，則需采用生化試驗或微生物生化鑒定係統進行相關的鑒定以確定其屬、種。因此，近年來微生物鑒定技術也逐漸成為世界杯賽程預測 檢測實驗室亟需加強的重要技術能力之一。

2 食源性致病微生物鑒定的主流技術及應用特點

關於食源性致病微生物鑒定的主流技術主要分為兩類，即常規鑒定技術和分子水平鑒定技術。

微生物常規鑒定技術是根據《伯傑氏細菌鑒定手冊》對微生物進行形態學和生理生化水平的分類及鑒定。由於部分微生物形態比較單一而容易分辨，可根據其形態直接判斷。雖然大部分微生物形態較為相近，但由於其具有不同的酶係統，且對營養基質的分解能力也有所不同，因此可在形態學觀察的基礎上，通過微生物細胞壁組成、發酵產物、代謝情況、對碳源或氮源等營養成分利用的生化反應進行綜合判斷，進而實現分類和鑒定。

分子水平鑒定技術主要包括蛋白質檢測和DNA檢測。當前，蛋白質的鑒定技術主要利用飛行時間質譜獲得微生物特征蛋白質分子的“指紋圖譜”，之後通過數據庫比對來實現;DNA檢測的鑒定技術則是利用細菌核糖體上的16SrDNA基因進化速度緩慢的特點，通過檢測同源基因來實現，現常用的手段包括16SrDNA測序、PFGE(脈衝場凝膠電泳)和全基因組測序等技術。

從當前的應用情況來看，兩類微生物鑒定技術各有優劣。分子鑒定技術雖然快速、通量高、鑒定結果準確，但樣品前處理過程和結果分析過程對操作人員的要求較高，且儀器價格昂貴、一次性投入較大，因此暫未被納入世界杯賽程預測 檢測標準中。生化鑒定方法雖然鑒定時間較長，但因操作流程標準化、結果分析難度低、鑒定準確性較高，且能直接反應出微生物的生化特性，因此該方法一直被全球許多國家確認為是法規標準中的微生物鑒定金標準，是不可替代的實驗室主流鑒定技術之一。

3 DW-M80自動微生物生化鑒定係統

為實現對食品終產品檢測和加工過程監控中采樣的細菌、酵母菌等微生物進行便捷、可靠的菌種鑒定，杭州大微生物技術有限公司結合多年工業微生物檢測方麵的經驗和技術積累，推出了DW-M80自動微生物生化鑒定係統，如圖1所示。通過一係列突破性創新，該係統除操作更加方便且人性化外，還優化和擴大了微生物數據庫，具有簡便的操作流程和高效準確的鑒定能力，不僅適用於各種類型樣品(食品、農產品、藥品、化妝品、質控樣、模擬樣品及環境監測樣品等)的微生物鑒定，還適用於市場監督管理部門、海關出入境檢驗檢疫、疾病預防控製、世界杯賽程預測 、製藥、企業、獸醫、漁業水產養殖等微生物檢測實驗室。

圖1 DW-M80自動微生物生化鑒定係統

3.1 工作原理

DW-M80自動微生物生化鑒定係統利用不同細菌具有不同酶係統的特點和對底物的不同分解能力，以生化反應原理(底物反應、糖利用反應、同化反應、氨基酸實驗等)為基礎，通過微生物激光透射比色法捕獲細菌的生化表型特征，並采用數值分類原理，自動比對專用微生物數據庫，對各種類型樣品的微生物單分離株進行自動分類和鑒定。

3.2 係統特點

3.2.1 操作方便簡單，結果準確可靠

工作流程可實現標準化，僅需4步(革蘭氏染色與鏡檢→試劑板選擇→加樣及培養→上機自動鑒定)即可完成鑒定全流程;實驗結果無需人工幹預，可全部由計算機自動完成判讀，並調取數據庫信息，得出鑒定結果。同時，由於DW-M80自動微生物生化鑒定係統將多個生化反應有效整合並濃縮於96孔板卡上，不僅增加了生化反應數量，還實現了微量培養與檢測，在檢測準確性和速度上都得到大幅提高，最快可當天獲得結果。

3.2.2 擁有廣泛的鑒定範圍

微生物鑒定試劑板是根據不同種類微生物專門設計而成，為更大程度地擴大鑒定範圍，DW-M80自動微生物生化鑒定係統配套16種鑒定板條，鑒定範圍覆蓋絕大多數微生物，適用於腸杆菌、非發酵菌、葡萄球菌、腸球菌、鏈球菌、陽性杆菌、弧菌、陰性球菌、酵母菌、嗜血杆菌、厭氧菌、彎曲杆菌、支原體、分枝杆菌等微生物的檢測。

3.2.3 提供龐大的專業數據庫支撐

數據庫是鑒定係統能否準確鑒定細菌的關鍵因素，DW-M80自動微生物生化鑒定係統的菌種信息數據庫在2000種以上，可定性鑒定微生物數量為550種以上;當發現數據庫以外的未知少見菌種時，還可結合實驗室需求進行菌種信息和生化反應表型的人工擴充，進而使數據庫不斷豐富和完善。

基於以上特點，DW-M80自動微生物生化鑒定係統已經成為食品檢測實驗室中微生物檢測的日常鑒定手段。除微生物生化鑒定功能外，該係統還可實現微生物對抗生素耐藥性的檢測及MIC值測定，滿足抑菌實驗的需求。

4 結語與展望

近年來，隨著儀器分析技術的不斷進步，自動化微生物鑒定技術逐步發展起來，大大促進了食品檢測技術的發展進程，並正被廣泛應用於致病菌的檢測和鑒別中。由於自動微生物生化鑒定係統采用經典的微生物生理生化反應原理，具有操作簡單、標準化、準確率高等特點，現階段仍是食物樣品中微生物鑒定的基本方法，也是分子鑒定結果的根本驗證手段。

此外，若食品生產單位能有效使用微生物生化鑒定係統，對生產環境、生產過程，以及出廠最終產品進行有效監控，了解微生物分布情況，及時分析微生物汙染來源等，有助於降低微生物汙染風險，促進產品質量安全保障體係的健全。