市場監管總局：食品中匹可硫酸鈉的測定檢驗方法

1 範圍
本標準規定了食品（含保健食品）中匹可硫酸鈉的高效液相色譜-串聯質譜聯用測定方法。
本標準適用於果凍、蜜餞、糖果、飲料等食品（含與上述基質相同的保健食品及片劑、硬膠囊劑保健食品）中匹可硫酸鈉的測定。

2 原理
試樣粉碎後經水或甲醇溶液提取，必要時經聚酰胺淨化後，經反相色譜柱分離，電噴霧離子源離子化，多反應離子監測檢測，外標法定量。

3 試劑和材料
除另有規定，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。
3.1 試劑
3.1.1乙腈（CH₃CN）：色譜純。
3.1.2 甲醇（CH₃OH）。
3.1.3 無水乙醇（CH₃CH₃OH）。
3.1.4 氨水（NH₃žH₂O）：濃度25 %~28 %。
3.1.5乙酸銨（CH₃COONH₄）：色譜純。
3.1.6 三氯乙酸（C₂HCl₃O₂）。
3.1.7聚酰胺固相萃取柱：取1 g聚酰胺粉（層析用，200目），用10 mL水活化，並裝填於帶有適量脫脂棉花的10 mL一次性注射器中。亦可采用商品化固相萃取小柱（1000 mg，6 cc），使用前用水活化，或按商品說明書進行活化操作。
3.2 試劑配製
3.2.1 三氯乙酸溶液（1 %）：稱取10 g三氯乙酸（3.1.6），加1000 mL水溶解。
3.2.2 70 %甲醇溶液：量取700 mL甲醇（3.1.2），加水定容至1000 mL。
3.2.3無水乙醇-氨水-水溶液（7+1+2，體積比）：量取100 mL氨水（3.1.4），700 mL無水乙醇（3.1.3），水200 mL，混勻。
3.2.4乙酸銨溶液（10 mmol/L）:稱取0.77 g乙酸銨（3.1.5），加入1000 mL水溶解，經0.22 μm水相微孔濾膜過濾後備用。
3.3 標準品：匹可硫酸鈉，其中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質量、結構式見附錄A。
3.4 標準溶液配製
3.4.1 標準儲備液（1000 mg/L）：準確稱取匹可硫酸鈉標準品10 mg（精確至0.00001 g），置於10 mL容量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，製成濃度為1000 mg/L標準儲備液，4℃避光保存，有效期1個月。
3.4.2 標準使用液（5 mg/L）：取標準儲備液（3.4.1）1 mL於200 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，製成濃度為5 mg/L的標準使用液，4℃避光保存，有效期7天。
3.4.3 標準係列工作溶液：準確量取標準使用液（3.4.2）適量，用水配製成質量濃度為5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL，或依儀器響應和實際情況配製適當濃度的標準係列工作溶液。
3.5 材料
3.5.1 微孔濾膜：0.22 μm，PES濾膜和PTFE濾膜。

4 儀器與設備
4.1液相色譜-三重四極杆串聯質譜儀，配電噴霧（ESI）離子源。
4.2 分析天平：感量分別為0.0001 g和0.00001 g
4.3 超聲波水浴。
4.4 恒溫水浴鍋。
4.5 固相萃取裝置。

5 試樣製備
5.1 果凍、蜜餞、糖果、固體飲料、片劑、硬膠囊劑
取適量代表性樣品（硬膠囊劑取內容物），采用搗碎、剪碎或研碎等方式混勻，裝入潔淨容器中，密封並標記。
5.2 液體飲料
充分混勻，直接取用。

6 分析步驟
6.1 試樣提取
6.1.1 果凍
稱取1 g（精確到0.001 g）試樣於50 mL離心管中，加入20 mL水，80 ℃水浴至膠質溶散，水浴過程中注意搖散，提取液轉移至25 mL容量瓶中，加入2.5 mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25 mL，待淨化。若提取液渾濁，可取適量8000 r/min離心5 min，上清液待淨化。
6.1.2 蜜餞
稱取1 g（精確到0.001 g）試樣於50 mL離心管中，準確加入40 mL水，超聲提取15 min， 8000 r/min離心5 min，上清液轉移至50 mL容量瓶中，用5mL水洗滌殘渣，洗滌液並入同一容量瓶，加入5 mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50 mL，待淨化。
6.1.3糖果
6.1.3.1壓片糖果
稱取0.5 g（精確到0.0001 g）試樣於50 mL離心管中，準確加入10 mL 70 %甲醇溶液（3.2.2），渦旋30 s，超聲提取30 min，8000 r/min離心5 min。取上清液1 mL於5 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，過PTFE微孔濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性範圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。
6.1.3.2其他糖果
稱取1 g（精確到0.001 g）試樣於小燒杯中，加入40 mL水，80℃水浴至樣品溶解（膠基糖果水浴15min，水浴過程中注意搖散），轉移至50 mL容量瓶中，用5 mL水洗滌燒杯，洗滌液並入同一容量瓶，加入5 mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50 mL，待淨化。若提取液渾濁，可取適量8000 r/min離心5 min，上清液待淨化。
6.1.4 固體飲料
稱取1 g（精確到0.001 g）試樣於50 mL離心管中，加入25 mL水，80℃水浴10 min， 8000 r/min離心5 min，收集提取液，加入20 mL水洗滌殘渣，渦旋30 s，8000 r/min離心5 min，合並兩次提取液，於提取液中加入5 mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至50 mL。若提取液渾濁，可取適量8000 r/min離心5 min，上清液待淨化。
6.1.5 液體飲料
稱取1 g（精確到0.001 g）試樣於25 mL具塞比色管中，加入20 mL水，80℃水浴10 min，放冷後加入2.5mL三氯乙酸溶液（3.2.1），用水定容至25 mL。若提取液渾濁，可取適量8000 r/min離心5 min，上清液待淨化。
6.1.6 片劑、硬膠囊劑
同“6.1.3.1壓片糖果”。
6.2 試樣淨化
6.2.1果凍、液體飲料
取10 mL待淨化液至已活化的聚酰胺固相萃取柱（3.1.7）內，待溶液流盡後，依次用10 mL水、15 mL 70 %甲醇溶液（3.2.2）洗滌，20 mL無水乙醇-氨水-水溶液（3.2.3）洗脫，收集洗脫液於80 ℃水浴上蒸發至近幹，用水定容至10 mL，過0.22 μm PES或PTFE濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性範圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。
6.2.2蜜餞、其他糖果、固體飲料
淨化操作同“5.2.1果凍、蜜餞、液體飲料”，洗脫液於80 ℃水浴上蒸發至近幹，用水定容至5 mL，過0.22 μm PES或PTFE濾膜，待測。可根據實際濃度用水適當稀釋至線性範圍內，供液相色譜-質譜聯用儀分析。
6.3 空白試樣
稱取空白試樣適量，與試樣同法處理，製得空白基質溶液。
6.4 儀器參考條件
6.4.1 色譜條件
6.4.1.2色譜柱：C18柱，2.1 mm×100 mm，2.6 μm，或同等性能的色譜柱。
6.4.1.2 流動相：10 mmol/L乙酸銨溶液+乙腈（85+15）
6.4.1.3 流速：0.3 mL/min
6.4.1.4 柱溫：35℃
6.4.1.5進樣量：5 μL
6.4.2質譜條件
6.4.2.1離子源：電噴霧離子源（ESI）。
6.4.2.2 掃描方式：正離子掃描。
6.4.2.3檢測方式：多反應模式（MRM）。
6.4.2.4幹燥氣、霧化氣、鞘氣、碰撞氣等均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應調節相應參數使質譜靈敏度達到檢測要求，噴霧電壓、離子源溫度、幹燥氣溫度、鞘氣溫度、鞘氣流量等參數應優化至最佳靈敏度。
6.4.2.5參考監測離子對和參考參數
表1匹可硫酸鈉定性、定量離子和質譜分析參數參考值

名稱	母離子	子離子	去簇電壓（V）	碰撞能（V）
匹可硫酸鈉	438.2	183.9*	120	40
	438.2	278.2	120	28
*定量離子對

6.5 試樣測定
將標準係列工作溶液和試樣溶液分別注入高效液相色譜-質譜聯用儀中測定。根據保留時間和相對離子對豐度比定性，外標峰麵積定量。
表2 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度（%）	>50	>20—50	>10—20	≤10
允許的相對偏差（%）	±20	±25	±30	±50

7 空白試驗
除不加試樣外，均按試樣同法處理。

8 結果計算
試樣中匹可硫酸鈉的含量按下式計算：

式中：
X—食品中匹可硫酸鈉（以C₁₈H₁₃NNa₂O₈S₂žH₂O計）的含量，mg/kg；
c—試品溶液中匹可硫酸鈉（以C₁₈H₁₃NNa₂O₈S₂žH₂O計）的濃度，ng/mL；
V—試品稀釋液體積，mL；
1000—單位換算；
m—試品質量，g。
計算結果以重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留三位有效數字。

9 檢測方法的靈敏度、精密度、專屬性
9.1 靈敏度
果凍、蜜餞、其他糖果、飲料取樣量為1 g，稀釋倍數為25時，定量限為0.125 mg/kg，檢出限為0.05 mg/kg；壓片糖果、片劑、硬膠囊劑取樣量為0.5 g，稀釋倍數為50時，定量限為0.5 mg/kg，檢出限為0.2 mg/kg。
9.2精密度
在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。
9.3 專屬性
空白試驗應無幹擾。

名稱	CAS號	分子式	分子量	結構式
匹可硫酸鈉 Sodium picosulfate	10040-45-6	C18H13NNa2O8S2	481.41