肉製品中喹諾酮殘留檢測

□ 張宏博 王洋 王燕 王岩 靳誌敏 範鑫 鄭玉山(通訊作者) 內蒙古自治區食品檢驗檢測中心

摘　要：喹諾酮類藥物是具有4-喹諾酮基本結構並且由人工合成的抗生素類藥物，是一種人畜共用藥，食用含有喹諾酮殘留的食品會對人體造成危害。本實驗參照GB/T 21312-2007，采用液相色譜-質譜/質譜法對羊肉中6種喹諾酮類藥物的殘留量進行檢測。檢測結果顯示，環丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、洛美沙星檢出限分別為0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.05μg/kg;回收率為84.1%~102.1%，各物質的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%;空白對照值為零;本次實驗所采集的12種羊肉樣品均未檢出環丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、洛美沙星這6種抗生素類藥物，符合農業部標準。

關鍵詞：液相色譜-質譜/質譜法 喹諾酮類藥物 氧氟沙星 環丙沙星 諾氟沙星

1 引言

抗生素類獸藥長期無節製的使用會導致動物免疫力下降，同時降低了疫苗的作用，進而使細菌疾病成為家禽的重點傳染疾病[1]。喹諾酮是一類人畜通用藥，因其具有組織濃度高、藥物保留性好、抵抗多種細菌、殺菌作用強、抗菌時間長等特點而被廣泛應用於水產和畜禽等疾病的治療[7]。盡管喹諾酮藥物有諸多優良品質，但仍需重視其毒副作用，如造成肝損害、引發周圍神經病變時間加快，甚至可能產生不可逆的轉變——導致肌無力症狀的患者病情加重等[8]。

喹諾酮是羊肉檢測中最為常見的一種獸藥殘留，其嚴重影響羊肉製品的安全及羊養殖業的發展，也已成為我國羊肉食品出口的主要製約因素。因此，檢測羊肉中喹諾酮的殘留對於世界杯賽程預測管控有重大意義。

2 材料與方法

本實驗參照GB/T 21312-2007農業部第235號公告，利用液相色譜-質譜/質譜法檢測羊肉中培氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、洛美沙星、環丙沙星6種喹諾酮的殘留量。

2.1 設備

實驗設備如表1所示。

2.2 試劑

除特別標注外，此次實驗中所使用的試劑全部都為色譜純，水為GB/T 6682規定的一級水，實驗試劑如表2所示。

2.3 喹諾酮類藥物的檢測方法

2.3.1 提取

稱取5g試樣(精確至0.01g)，裝於50mL具螺旋蓋聚四氟乙烯離心管中，之後加入10mL甲酸-乙腈(2∶98)溶液，立即蓋蓋劇烈振搖，旋渦震蕩1分鍾，超聲提取10分鍾，4000r/min離心5分鍾，然後將乙腈層移入另一幹淨的聚四氟乙烯離心管中。向離心後的沉澱物中再加入10mL甲酸-乙腈(2∶98)溶液搖勻，旋渦震蕩1分鍾，4000r/min離心5分鍾，合並乙腈提取液，待淨化。

2.3.2 淨化

向提取液中加入15mL乙腈飽和正己烷溶液，漩渦震蕩2分鍾，4000r/min離心5分鍾，除去上層正己烷，氮吹至幹。準確加入1mL初始比例流動相溶液，超聲1分鍾，旋渦震蕩1分鍾溶解殘渣，將溶液過0.22μm微孔濾膜，供高效液相色譜-質譜/質譜測定。

2.3.3 高效液相色譜-質譜/質譜法測定

液相色譜條件：色譜柱固定相類型為C18、色譜柱型號為ZORBAX Eclipse Plus C18;規格：2.1×100mm×1.8μm;柱溫：40℃;室溫：22℃;流動相組成：A為0.05%甲酸/水、B為乙腈;流速：0.3mL/min;進樣量：3μL。

最優質譜條件：離子源(電噴霧正離子源);檢測方式：多反映監測;電噴霧電壓：4000V;離子源溫度：350℃，彙總得出結果如表4。

3. 結果與分析

3.1 喹諾酮類標準物質

在濃度為5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、80.0ng/mL、100.0ng/mL得到的線性方程，洛美沙星：Y=52.868650X+16.294115;恩諾沙星：Y=77.573131X+39.593310;諾氟沙星：Y=35.557671X-0.922820;環丙沙星：Y=26.118163X+19.661136;氧氟沙星：Y=89.435717X+17.011289;培氟沙星：Y=41.097360X+130.387546。相關係數R2均為0.99，峰麵積與被測物質濃度呈現出的線性關係良好。

3.2 試劑空白

樣品空白如表6所示，在3.021~3.201min之間沒有出現峰，所以諾氟沙星未檢出;在3.181~3.621min之間沒有出現峰，所以氧氟沙星未檢出;在2.901~3.341min之間沒有出現峰，所以培氟沙星未檢出;在3.141~3.321min之間沒有出現峰，所以環丙沙星未檢出;在2.651~2.521min之間沒有出現峰，所以洛美沙星未檢出;在3.161~3.602min之間沒有出現峰，所以恩諾沙星未檢出。

如表7所示，本次實驗檢測方法為，建立6個加入濃度為100ng/mL混合中間標準溶液50μL的空白試驗與空白試劑對照，將檢測到的各個噪音參數的結果記下來，當S/N=3時得到的最低濃度結果為檢出限。

3.4 回收率

如表8所示，因為在實驗過程中所有加入的物質都會有一定損失，故可能導致最終結果有所誤差。為防止這一現象的發生，在羊肉中加入已知濃度的標準樣液，經過渦旋震蕩後按實驗步驟作其檢測值與羊肉樣品檢測值比較計算，從而知曉試劑是否有配對，羊肉樣品的檢測結果是否無誤。

3.5 精密度

精密稱取6個空白樣品，加入1μg/mL的混合標準中間溶液40μL，按樣品處理同法操作。經計算得出，氧氟沙星精密度為7.4%、諾氟沙星精密度為6.8%、恩諾沙星精密度為6.9%、環丙沙星精密度為10.5%、培氟沙星精密度為8.5%、洛美沙星精密度為7.2%。

3.6樣品檢測

本次試驗共檢測蘇尼特羊、呼倫貝爾羊、大尾羊、山羊、綿羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊後腿、羊蹄筋、羊心12種羊肉樣品，每種樣品檢測2個，以減小隨機誤差，提高檢驗的準確性。

根據農業部標準的要求，氧氟沙星、諾氟沙星、培氟沙星和洛美沙星均不得檢出，環丙沙星和恩諾沙星之和小於等於100μg/kg才為合格品，反之則為喹諾酮類藥物殘留，不合格。

檢測結果如表10所示，12種羊肉樣品中均未檢測出6種喹諾酮藥物，所取羊肉樣品均符合農業部標準，為合格品，消費者可放心購買。

4 結論

本實驗確定了環丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、諾氟沙星、恩諾沙星、洛美沙星試劑空白值全部為0，檢出限分別為0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.05μg/kg，回收率為84.1%~102.1%，各物質的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%。實驗中所用蘇尼特羊、呼倫貝爾羊、大尾羊、山羊、綿羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊後腿、羊蹄筋、羊心12種羊肉樣品均未檢出6種喹諾酮類藥物，本次實驗所采羊肉樣品符合農業部標準，均為合格品。

參考文獻：

[1] 強慧勤，龐曉宇，楊維維等.幼犬使用喹諾酮類藥物應謹慎[J].動物保健.2006(12).

[2] 馬建民，夏曦，李曉薇.陰離子交換固相萃取-超高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬肌肉中13種喹諾酮類藥物[J].中國食品衛生雜誌，2015，25(3):249-253.

[3] Thomas H. Tracking persistent pharmaceutical residues from municipal sewage to drinking water[J]. Journal of Hydronautics. 2002.

[4] 胡梁及，朱盛山，彭亮等.水產養殖中藥物濫用的危害及問題分析[J].水產學雜誌.2015(02).

[5] 劉剛.喹諾酮類藥物的特點、應用及使用注意事項[J].養殖技術顧問.2011(02).

[6] 易檢祥.淺談獸藥的殘留危害及其監管措施[J].湖南畜牧獸醫.2004(03).

[7] Kwang-soo Lee, Kisung Kwon, San-cheong Bae, Hyung Soo Kim. Simultaneous determination of thirteen quinolones in livestock and fishery products using ultra performance LC with electrospray ionization tandem mass spectrometry[J], Food Science and Biotechnology. 2013, 10(22): 1-9.

[8] 錢卓真.動物性食品中喹諾酮類藥物殘留檢測技術研究進展[J].福建水產.2007(04).

[9] 喬坤雲，孫濤，劉聖紅等.高效液相色譜熒光法檢測雞肉中4種氟喹諾酮藥物殘留[J].分析儀器.2015(06).

[10] 楊衛軍，李曼，曹秀梅等.超高效液相色譜法檢測雞肉中氟喹諾酮類藥物殘留[J].現代畜牧獸醫.2016(04).

基金項目：內蒙古自治區科技重大專項(2016年度);內蒙古自治區科技引領項目(2017年度、2018年度)。