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氣相色譜質譜法檢測雞蛋中五氯酚酸鈉殘留

2018-08-29 11:07:17 來源: 世界杯賽程預測 導刊

　　五氯苯酚（PCP）是一種有毒農藥，常用於木材防腐、殺真菌、殺蟲等。我國曾大量將五氯酚酸鈉（PCP-Na）用於殺滅釘螺。同時五氯酚酸鈉也為觸殺型滅生性除草劑，主要用於防除稗草和其他多種由種子萌發的幼草。
　　五氯酚酸鈉可由呼吸道、消化道以及皮膚進入人體，在酸性條件下轉化為五氯苯酚，微量的五氯苯酚即可導致人體中樞神經係統、肝、腎損傷及內分泌紊亂。《動物性食品中獸藥最高殘留限量》規定：五氯酚酸鈉禁止使用於食品中。
　　雞蛋作為一種營養價值高，蛋白質含量豐富的食品，深受人們的喜愛。蛋黃主要由卵黃磷蛋白組成，脂肪含量高，其中脂肪主要為卵磷脂，磷脂具有非常好親水性。國標GB 29708的前處理方法無法有效除去雞蛋中的磷脂，使試樣中含有大量脂肪，不僅降低了目標物的提取效率，還極易汙染檢測設備，給五氯酚酸鈉的檢測帶來了較大困難。
　　材料與方法
　　試劑與儀器
　　五氯酚酸鈉標準溶液100µg/mL（曼哈格）；甲醇（迪馬公司，色譜純）；衍生試劑（乙酸酐：吡啶=1：1）；0.2mol/L碳酸鉀水溶液；5%三氯乙酸水溶液；濃鹽酸；濃硫酸。
　　實驗室用水都為超純水。
　　Agilent 7890B-Agilent 7000C氣質聯用儀（配置EI源）；Millipore超純水機；西格瑪高速離心機；漩渦混合器；分析天平（感量0.1mg）；恒溫幹燥箱；氮吹儀；50mLPPOC高速離心管。
　　方法
　　標準溶液的配製
　　精密吸取五氯酚酸鈉標準溶液0.1mL，於10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配製成濃度為1μg/mL的五氯酚酸鈉標準儲備液，-20℃以下保存。
　　取適量的1μg/mL五氯酚酸鈉標準儲備液，用水配製成濃度為10、20、40、60、80、100ng/mL標準係列工作液。
　　樣品液的製備
　　準確稱取混合均勻的試樣2.00g於50mL具塞離心管中，加入5%三氯乙酸溶液（3.9）10mL、濃鹽酸0.5mL和正己烷10mL，高速渦旋提取1min，8000r/min離心5min，收集有機層於50mL離心管中。再用20 mL正己烷分2次洗滌殘渣，合並有機層，再向有機相中加入濃硫酸0.5mL，小心振搖，靜置2min，8000r/min離心5min，收集上清液，於45℃氮氣吹至近幹。殘餘物中加入正己烷1.0mL，加入乙酸酐-吡啶溶液0.2mL，密封，於60℃反應15min，冷卻，加碳酸鉀溶液0.5mL，充分混勻，靜置分層，取有機相，供氣相色譜質譜儀測定。同時用空白樣品做空白實驗。
　　實驗條件
　　色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25μm）；
　　升溫程序：60℃保持1min，以15℃/min升溫到280℃保持10分鍾。
　　進樣方式：不分流進樣；
　　不分流時間：0.75min；
　　進樣量：1μL；
　　進樣口溫度：260℃
　　載氣：氦氣（99.999%）；
　　恒流模式：1mL/min；
　　離子源溫度：280℃；
　　傳輸線溫度：280℃；
　　掃描模式：選擇離子檢測，檢測離子（m/z）：266（定量），308，237，165，130。
　　結果與討論
　　實驗原理
　　GB 29708-2013使用水提取試樣中的五氯酚酸鈉，三氯乙酸脫蛋白。五氯酚酸鈉在酸性條件下轉化為五氯苯酚，使用乙酸乙酯-環己烷（1︰1）提取五氯苯酚，後經衍生，生成五氯苯乙酸酯（PCP-OAc），使用氣質聯用儀測定PCP-OAc的含量，來獲得五氯酚酸鈉的含量。
　　雞蛋中除豐富的蛋白質外，卵黃中還含有大量的磷脂，磷脂具有較好的親水性和脂溶性，無法使用GB 29708的前處理方法除去。而五氯苯酚在脂肪中的溶解度較大，要保證檢測的靈敏度和準確度，就必然帶入大量的磷脂，過量的磷脂將嚴重影響衍生效果和汙染檢測設備。本方法直接使用正己烷提取，簡化了提取操作。在衍生前，通過加入濃硫酸來脫去脂肪，排除磷脂產生的不良影響，提高了檢測效率，保證了靈敏度和準確度。該方法也可用於其他脂肪含量高的樣品中五氯酚酸鈉的測定。
　　標準曲線
　　分別取濃度為10、20、40、60、80、100ng/mL的標準工作液1.0mL，置於50mL離心管中，以下操作步驟同樣品溶液的製備。以特征離子質量色譜圖峰麵積為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標，繪製標準曲線。求回歸方程和相關係數。標準物質色譜圖質譜圖見圖1，標準曲線見圖2。

　　圖1 PCP-Oac的色譜圖（上）和質譜圖（下）
　　圖2標準曲線
　　回收率和精密度實驗
　　雞蛋的稱樣量為2.00g，添加濃度為5µg/kg，20µg/kg，50µg/kg三個水平，各做三個平行樣，標準物質、樣品加標和樣品圖譜見圖4，測定結果和精密度見表1。
　　圖3樣品圖譜（自上而下依次為標準溶液、樣品加標、空白樣品）
　　表1加標回收率和精密度
　　由圖3可見，淨化效果良好，且對檢測沒有幹擾。本方法在雞蛋中的加標濃度為5µg/kg時，回收率為109%，重複性RSD為3.6%；加標濃度為20µg/kg時，回收率為109%，重複性RSD為2.9%；加標濃度為50µg/kg時，回收率為113%，重複性RSD為4.1%，以上數據表明該方法檢測雞蛋中的五氯酚酸鈉穩定可靠。方法檢出限以3倍信噪比計算得到，本方法測定雞蛋中五氯酚酸鈉的檢出限為0.5µg/kg。
　　圖4樣品加標量為5µg/kg的提取離子流圖
　　結論
　　雞蛋中的五氯酚酸鈉在酸性條件下，經正己烷提取，濃硫酸脫脂，衍生後經氣質聯用儀測定確認，外標法定量。結果表明：本法五氯酚酸鈉的回收率為106.1%-118.4%，平行測定結果的RSD值≤5%，方法檢出限為0.5µg/kg，能夠滿足雞蛋中五氯酚酸鈉殘留量的檢測要求。同時該方法也拓展到其他脂肪含量高的樣品中五氯酚酸鈉的測定。
　　□何旭峰黃小蘭易良鍵肖琦龍超
　　重慶市萬州食品藥品檢驗所
　　作者簡介：何旭峰，男，助理工程師。
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