PCX柱淨化-氣相色譜質譜法測定牲畜瘦肉中的鹽酸克倫特羅

　　鹽酸克倫特羅，又名瘦肉精，是一種對動物具有促進生長、減少脂肪含量的興奮劑類物質，曾廣泛應用於生豬的飼養。由於鹽酸克倫特羅容易在動物組織內殘留，當人們食用含有一定量鹽酸克倫特羅的牲畜肉後，可能會引起中毒，所以我國已禁止將鹽酸克倫特羅作為生長促進劑使用。但因其具經濟效益，故非法使用鹽酸克倫特羅的現象依然存在，因此建立快速高效的鹽酸克倫特羅檢測方法具有重要的意義。

　　氣相色譜-質譜檢測鹽酸克倫特羅的方法較多，如GB/T 5009.192-2003、NY/T 468-2006，我們在以往的實驗基礎上對前處理步驟進行了改變，在一定程度上減少了鹽酸克倫特羅的檢測時間。

　　實驗部分

　　材料與設備：三氯乙酸、氨水，分析純;甲醇、正己烷，色譜純;鹽酸克倫特羅標準品;美托洛爾標準品;N，O-雙(三甲基矽烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯矽烷(TMSCI);Agela Cleanert PCX固相萃取柱60mg/3mL;安捷倫氣相色譜-質譜儀。

　　氣相色譜條件：色譜柱RTX-5ms，30m x 0.25m x 0.25μm;程序升溫條件：初始溫度70℃，保留1min;18℃/min升溫至200℃，保留0.0min;5℃/min升溫至245℃，保留0.0min;25℃/min升溫至280℃，保留5.0min。總運行時間：23.622min;載氣：氦氣，純度≥99.99%;進樣口溫度：220℃;進樣量：3μL;進樣方式：不分離進樣。檢測器：EI檢測器。檢測器溫度：230℃。全掃描模式：35-400amu。SIM模式：72、86、187、223、243、262amu。

　　樣品處理 提取：稱取5～10g已粉碎的牲畜瘦肉於離心管中，加入15mL的5%三氯乙酸溶液，勻漿後超聲萃取20min，再以9000r/min離心3min，取清液於另一離心管。重複上述步驟一次，合並提取液。

　　正己烷淨化：向上述提取液中加入10mL正己烷，渦旋震蕩後靜置分層，吸去上層正己烷相，若油脂較多，可重複一次。

　　PCX淨化：依次加入3mL水、3mL甲醇活化PCX柱，棄去流出液;往PCX柱加入樣品提取液，棄去流出液;依次加入5mL甲醇、5mL水，棄去流出液;加入6mL的5%氨水甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。

　　衍生：在55℃加熱條件下氮吹洗脫液至幹，加入內標美托洛爾，再氮吹至幹。加入100μL甲苯和100μL (BSTFA)/(TMSCI)衍生試劑，渦旋2min後將樣品置於80℃烘箱中加熱衍生1h。待樣品冷卻後，加入800μL甲苯，渦旋2min後進樣測定。

　　結果與討論

　　鹽酸克倫特羅衍生後的氣相色譜圖如圖1所示，結果顯示，峰型良好，衍生效果滿足實驗要求。

　　圖1 鹽酸克倫特羅衍生後的氣相色譜圖

　　提取方法的選擇：對比酶提取法、國標NY/T 468-2006乙酸乙酯提取法、三氯乙酸酸性水溶液提取法，結果顯示，酶提取法操作繁瑣、耗時較長，一般需要在37℃下酶解16小時，而且試劑成本較高。乙酸乙酯提取法操作也比較繁瑣，需要旋蒸幹乙酸乙酯後再進行淨化，影響實驗的回收率。采用三氯乙酸酸性水溶液提取法，鹽酸克倫特羅離子化後溶解在水中，並且結合PCX淨化，利用離子鍵作用力，能夠有效保留鹽酸克倫特羅。

　　固相萃取柱的選擇：對比常用的固相萃取柱HLB和PCX柱，結果顯示，PCX柱回收率更高。主要原因可能是HLB主要采用範德華力保留待測物，而PCX有兩重作用力，π-π作用力和離子鍵作用力，能夠有效地保留鹽酸克倫特羅。結合氨水甲醇溶液洗脫，本實驗能夠很好地淨化鹽酸克倫特羅，達到檢測要求。

　　標準曲線、檢出限、回收率與精密度：在10-500μg/L範圍內，鹽酸克倫特羅濃度與峰麵積呈現良好的線性關係,其線性回歸方程為：Y=8665.5X，相關係數為0.9990，檢出限為1μg/L。取一份經檢測不含有鹽酸克倫特羅的樣品作為空白樣品，測得平均加標回收率均大於75%，標準偏差為2.6%～5.8%。

　　實際樣品的應用：本方法應用於廣東省內農貿市場日常生活銷售的豬肉檢測，對其進行世界杯赛程预测 監測與預警，假陽性檢出低，效果良好。

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