環介導等溫基因在食源性致病菌檢測中的應用

　　環介導等溫基因擴增技術優勢

　　環介導等溫基因擴增技術優勢主要體現在靈敏性、特異性、快速性以及便捷性幾個方麵。這些優點顯示出食品檢測中對於檢測結果快速產生和快速分析汙染的需要。

　　靈敏性與特異性：在環介導等溫基因擴增技術中設計的4對引物，主要針對病原微生物的特異性基因靶核酸序列，可有效識別出靶基因中特異序列，同時還可實現靶基因特異序列的結合，從而形成擴增效應，但不會造成反應混合物中原有的非靶基因損壞。快速性：應用環介導等溫基因擴增技術合成多種莖狀DNA的過程中，會形成許多焦磷酸根離子，而在反應溶液內適量添加鎂離子，就會發生化學反應，形成沉澱物。這樣隻需肉眼觀察就可檢測出食品是否含有致病菌，同時可采用濁度儀，但需要在400nm光環境下檢測濁度，就可以判斷是否發生擴增。盡管應用PCR技術也會形成焦磷酸根離子，可是數量相對較少，難以實現利用沉澱完成產物檢測。而采用環介導等溫基因擴增技術，由於化學反應產生的焦磷酸酶物質量和DNA形成量具有線性關係，因而還能夠實現反應DNA的相關定量與定性研究。便捷性：環介導等溫基因擴增技術並不需要高昂的檢測設備，其在等溫環境下就可應用。與PCR技術相比較而言，LAMP技術試驗過程中僅需要準備水浴鍋，而且反應產物通過直接檢測便可判斷。並不需要高昂的設備與特殊試劑。

　　環介導等溫基因擴增技術的應用

　　食源性致病菌檢測主要項目就是對金黃色葡萄球菌以及結核分支杆菌檢測和大腸杆菌檢測這幾個方麵。這些菌體可以在極短時間內造成人體出現不良反應，具有集中爆發疾病的危害。作為食源性致病菌之一的金黃色葡萄球菌，采用普通檢測腸毒素技術，難以實現腸毒素的有效分型。其普遍存在於動物的肉體內，金黃色葡萄腸毒素通過動物試驗、血清檢測，以及免疫熒光試劑這些主要的檢測方式。Goto等學者依照編碼SEA、SEB等四種金黃色葡萄球菌的相應腸毒素基因，開展了環介導等溫基因擴增技術檢測實驗，實驗檢測內容僅僅需要1小時就可完成。PCR主要應用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度、複性溫度、延伸溫度之間很好地進行控製。通過與PCR技術對比，雖然特異性相同，但是環介導等溫基因擴增技術靈敏度高。

　　結核分支杆菌檢測：結核病直接威脅著人類的身體健康，是成人單因素感染治病而死亡的重要原因，屬於公共衛生事件，因此結核分支杆菌的快速與高效檢測技術，有利於結核病早期確認與控製。大腸杆菌檢測：大腸杆菌能夠引發多種場外感染。應用LAMP技術可有效檢測大腸杆菌,可以有效防止因誤食汙染食物而出現腹瀉以及出現嘔吐現象。對於大腸杆菌的檢測通常對檢測物采取培養液培植的方式，進行大腸杆菌數量和活性分析，以此確立大腸杆菌的是否超標。

　　薑薇 遼寧省分析科學研究院