速凍水餃中金黃色葡萄球菌計數結果不確定度的評定

    摘　要：評定速凍水餃金黃色葡萄球菌檢測結果的不確定度，檢測方法依據GB 4789.10-2010，分析速凍水餃中金黃色葡萄球菌計數結果的不確定來源，並對實驗結果取對數後評定其不確定度。結果顯示擴展不確定度為0.05，金黃色葡萄球菌含量為1.6×10⁴~2.7×10⁴CFU/g。結論為不確定度的分析能夠有效掌握檢測結果的可信程度和準確性。
    關鍵詞：金黃色葡萄球菌　計數　不確定度　評定
    金黃色葡萄球菌係指一類革蘭氏陽性球菌，其排列成葡萄狀、無芽胞和莢膜，是評價食品衛生質量的重要指標之一。美國疾病控製中心報告指出，由金黃色葡萄球菌引起的感染占全球第2位，僅次於大腸埃希菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是世界性衛生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大占到45%，我國每年也有此類中毒事件發生。因此，做好金黃色葡萄球菌的檢測尤為重要，特別是我國衛生部於2011年11月24日公布世界杯赛程预测 國家標準《速凍麵米製品》，允許金黃色葡萄球菌限量存在，而金黃色葡萄球菌計數存在很大的分散性，故做好金黃色葡萄球菌計數不確定度評定更為重要。
    1 原理與方法
    1.1 評定原理
    不確定度含義為:表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結果相聯係的參數。本文介紹的是依據GB 4789. 10-2010《食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》，在同一相對恒定的實驗條件下，由檢測人員對同一份質控菌液進行4次獨立檢測，共做20次，然後對檢測結果進行不確定度評定。
    1.2 檢測方法
    25mL檢樣+225mL稀釋液，均質；
    選擇2個連續的適宜稀釋度的樣品均液，每個稀釋度分別吸取1mL；樣品勻液以0.3mL、0.3mL、0.4mL接種量分別加入3塊Baird-Parker平板，然後用無菌L棒塗布整個平板，36℃，48h；
    計數及血漿凝固酶試驗；
    報告。
    2 數學模型及不確定度來源
    2.1 數學模型     T-樣品中金黃色葡萄球菌菌落數；
    A-某一稀釋度典型菌落的總數；
    B-某一稀釋度血漿凝固酶陽性的菌落數；
    C-某一稀釋度用於血漿凝固酶試驗的菌落數；
    d-稀釋因子。
    2.2 不確定度分量的主要來源
    在微生物檢測中一般認為不確定度來源於培養基、培養條件、計量器具校準、操作人員技能等。由於重複檢測結果的發散性較大，所以本文隻對稱樣、稀釋、重複性檢驗、Baird-Parker培養基儲存條件引起的不確定度進行分析。
    3 各分量不確定度的評定
    3.1 樣品稱量過程產生的不確定度
    3.2 樣品製備過程中引入的不確定度評定
    3.2.1 天平引入的不確定度
    本實驗室采用精度為0.01g的電子天平，根據JJG 1036-2008《中華人民共和國計量檢定規程：電子天平》規定，該準確級(Ⅱ)的天平在0~500g稱量範圍的MPE為±0.5g，天平線性MPE為矩形分布，天平稱量引入的不確定度。     3.2.2 玻璃器皿引入的不確定度
    用250mL的量筒量取225mL無菌生理鹽水緩衝液加入，量筒按JJG 196-2006常用玻璃量器的容量允差為2.0mL。由於按級使用的數字式儀表、測量儀器最大允差誤差導致的不確定度屬於矩形（均勻）分布，則玻璃容器的標準不確定度分別為：     3.2.3 天平和玻璃器皿產生的相對合成不確定度     所以     3.3 樣品稀釋過程產生的不確定度
    微生物檢驗常用的吸管有1ml、10ml B級兩種，根據JJG 196-2006常用玻璃量器規定，B級1mL吸管，容量允差為±0.015/ml；B級10mL吸液管，容量允差為±0.1/ml。取矩形分布，它們的標準不確定度分別為：      所以，連續稀釋產生的相對標準不確定度：
 
    3.4加樣體積產生的相對不確定度
    由於檢測中是吸取1mL的加樣體積分別以0.3mL、0.3mL、0.4mL，加入3個Baird-Parker平板中，使用的是1mL吸管，那麼加樣所產生的不確定度為：     那麼：     3.5 樣品重複性檢驗的不確定度
    重複檢測引起的不確定度，主要是檢測過程中，在多種因素作用下隨機所得各次金黃色葡萄球菌數數值不同引起的。由於檢測結果數值的發散性較大，因此采用統計學方法，以金黃色葡萄球菌含量的對數求不確定度。同一位操作人員分別對同一批受汙染的5份速凍水餃各自4次獨立檢測的金黃色葡萄球菌含量和計算過程見表1。  
    則重複性的標準差為：     4 合成不確定度     合成標準不確定度：
          
    通常取包含因子k=2,則平板計數的擴展不確定度：
 
    該樣品中的金黃色葡萄球菌的含量x=10^4.3298=21369= 2.1×10⁴，檢測結果的對數均值範圍為4.3298±0.1006，金黃色葡萄球菌的取值範圍1.6×10⁴~2.7×10⁴CFU/g。
    5 討論
    按GB 4789.10-2010 的操作規程，本次金黃色葡萄球菌計數是由同一位操作人員對同一批速凍水餃5個樣品進行4次獨立檢測完成的，由於各組之間的測量條件可能會稍有不同，因此不能直接用貝塞爾公式對總共5×4次測量計算實驗標準差，而必須計算其合並樣本標準差，合並樣本標準差也稱為組合實驗標準差。
通過對受汙染的速凍水餃中金黃色葡萄球菌計數結果的不確定度識別和評定得知：此次檢測結果的不確定度主要是由樣本的重複檢測、樣本稀釋、加樣體積、樣品稱樣四方麵產生的，尤其是以金黃色葡萄球菌重複檢測過程中所產生的A類不確定度為主要來源。由此可見，嚴格控製實驗環境、培養條件、以及提高操作人員的技能，是降低來自這方麵的不確定度的有效措施。
    參考文獻：
    [1] GB 4789.10-2010 世界杯赛程预测 國家標準 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗.
    [2] 張文利，劉月芳.BP培養基經不同條件貯存後對金黃色葡萄球菌檢測結果的影響[J].中國衛生檢驗雜誌，     2005,15(5):620-621.
    [3] 王曉紅，薑嫻.食品中菌落總數檢測結果的不確定度評定[J].中國衛生檢驗雜誌，2011,21(11):2799-2800.
    [4] 王李寶，淩雲，劉綠葉等.水產品金黃色葡萄球菌檢測結果不確定度的評定[J].食品科學，2010,3(10):212-215.
    [5] 張洪軍，張銘華.食品中金黃色葡萄球菌平板計數不確定度的評定[J].微生物學雜誌，2013,33(2):39-42.
    [6] 徐麗萍，商曉春，舒青青.質控金黃色葡萄球菌計數結果不確定度評定[J]. 中國衛生檢驗雜誌，2011,21(3):654-656.